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Importância da pesquisa de anticorpos no diagnóstico individual • Diferenciação da fase da doença: ✓ Em algumas patologias, principalmente as que provocam fetopatias (toxoplasmose, sífilis, citomegalia, rubéola, doença de Chagas) a detecção de diferentes classes de imunoglobulinas especificas ao agente infeccioso na circulação dos pacientes é importante na identificação da fase da infecção. ✓ A mudança da classe de imunoglobulina ocorre durante a resposta imune, seguindo uma ordem geneticamente determinada. ✓ A imunoglobulina IgM é a primeira a ser formada, sendo normalmente encontrada nos processos agudos, enquanto a imunoglobulina IgG encontrada no final dos processos agudos permanece durante longos períodos na circulação do hospedeiro, como imunoglobulina de memória, estando muitas vezes relacionada com a proteção do indivíduo • Diagnóstico de doença congênita: ✓ A propriedade da imunoglobulina IgM de não atravessar a barreira placentária tem desempenhado papel importante na definição de doenças congênitas. • Seleção de doadores de sangue: ✓ Além das triagens clínica e epidemiológica, a triagem sorológica tem um papel de destaque na prevenção da doença transfusional para doença de Chagas, sífilis, hepatite B e C, síndrome da imunodeficiência adquirida (AIDS) e HTLV-I e II. ✓ Os testes utilizados devem apresentar alta sensibilidade. • Seleção de doadores e receptores de órgãos para transplantes: ✓ Anticorpos altamente específicos para determinantes estruturais individuais que caracterizam diferentes antígenos do completo principal de histocompatibilidade (sistema HLA) são utilizados em testes de linfocitotoxicidade. ✓ A reação entre antígenos encontrados nos linfócitos e os soros que contêm anticorpos específicos anti-HLA torna possível identificar quais são os antígenos HLA expressos por diferentes indivíduos ✓ A tipagem desses antígenos é importante na seleção de doadores e receptores de órgãos em transplantes. Importância da pesquisa de anticorpos em inquéritos soroepidemiológicos • Prevalência da doença: ✓ A prevalência da doença pode ser estabelecida pela pesquisa de anticorpos IgG em amostras de sangue coletadas com rigoroso critério epidemiológico. • Erradicação da doença: ✓ A erradicação de determinada doença em uma região pode ser verificada por testes sorológicos. ✓ A ausência de anticorpos contra o patógeno em crianças nascidas no local expostas às condições ambientais é forte indicio da erradicação da doença ✓ O acompanhamento sorológico dessas crianças por um período de tempo é necessário para confirmação dos resultados. Importância da pesquisa de antígenos • Critério de cura: ✓ A ausência do patógeno ou de seus produtos após um processo infeccioso está diretamente relacionada com a cura do paciente ✓ Os testes sorológicos utilizados para definição dessa possibilidade devem apresentar elevados níveis de sensibilidade e especificidade por meio da utilização de anticorpos altamente específicos em técnicas rigorosamente padronizadas. • Seleção de doadores de sangue: ✓ Essa pesquisa, indicativa de um processos agudo, poderia ser utilizada mesmo na fase em que a pesquisa de anticorpos ainda é negativa, fase pré-sorológica. ✓ Os testes devem apresentar níveis máximos de sensibilidade e especificidade. Parâmetros para validação de um teste diagnóstico • Parâmetros intrínsecos: ✓ A validade intrínseca de um teste, que é o desempenho do teste quando comparado a um teste de referência, pode ser avaliada por parâmetros como sensibilidade, especificidade e eficiência (estas são características do teste, e não da população em que está sendo aplicado). ✓ Para evitar problemas de resultados falso-positivos, deve-se selecionar como indivíduos não doentes aqueles residentes em áreas endêmicas da doença, sem alterações clinicas e com xenodiagnóstico negativo. ✓ Para a definição dos parâmetros de validação intrínseca de um teste, foi utilizada uma tabela de dupla entrada, relacionando a presença ou não da doença e os resultados obtidos no teste em estudo, positivo ou negativo ✓ São apresentadas quatro possibilidade de resultados: verdadeiro-positivo (VP), quando o resultado do teste é positivo na presença de doença; falso-positivo (FP), quando o resultado é positivo na ausência de doença; verdadeiro- negativo (VN), quando o resultado é negativo na ausência da doença; falso-negativo (FN), quando o resultado é negativo na presença de doença. ✓ Sensibilidade: ➢ A sensibilidade de um teste refere-se à porcentagem de resultados positivos pelo teste na população de doentes, ou seja, a proporção de resultados verdadeiro-positivos. ➢ Sensibilidade = VP/VP+FN ✓ Especificidade: ➢ A especificidade de um teste sorológico é definida pela porcentagem de resultados negativos pelo teste nos indivíduos não doentes, ou seja, a proporção dos verdadeiro- negativos. ➢ A especificidade do teste pode ser influenciada por inúmeros fatores que levam a resultados falso-positivos. ➢ Especificidade = VN/VN+FP ✓ Eficiência: ➢ A eficiência do teste sorológico refere-se à relação entre o somatório dos resultados verdadeiro-positivos e verdadeiro- negativos com a população estudada. ➢ Eficiência = VP+VN/VP+VN+FP+FN • Parâmetros extrínsecos: ✓ Os valores preditivos dos resultados positivos e negativos do teste são parâmetros que dependem da prevalência da doença na população em estudo. ✓ A validade extrínseca é a capacidade do teste em detectar a real situação da população em relação à doença que está sendo estudada e também o desempenho do teste em uma determinada população e pode ser avaliada por parâmetros como reprodutibilidade, acurácia e precisão. ✓ Precisão: ➢ Precisão é um parâmetro que determina existir concordância dos resultados obtidos quando um mesmo teste é feito várias vezes ➢ Mede o erro acidental do método, que corresponde ao erro experimental acumulado ✓ Acurácia ou exatidão: ➢ É um parâmetro que determina a capacidade do teste em fornecer resultados muito próximos ao verdadeiro valor do que se está medindo. ➢ A medida da exatidão torna possível detectar erro sistemático ou tendência dos resultados de se desviarem em uma dada direção e proporção em relação ao valor real. ✓ Reprodutibilidade: ➢ Refere-se à obtenção de resultados iguais em testes realizados com a mesma amostra do material biológico, quando feitos por diferentes pessoas em locais distintos e se garante quando a precisão e a exatidão são sempre avaliadas ➢ A variação da reprodutibilidade está associada a fatores relacionados com erros acidentais ou sistemáticos que podem ser evitados quando se trabalho com profissionalismo, aparelhos bem calibrados, reagentes confiáveis e ambiente saudável. Aplicação de testes diagnósticos • Escolha de um limiar de reatividade ou cut-off: ✓ Entende-se como limiar de reatividade ou cut-off a região de corte de um teste diagnóstico, ou seja, um valor acima do qual os resultados são considerados positivos e indicam os doentes, e abaixo os resultados são dados como negativos e correspondem aos não doentes. ✓ Para exemplificar, será analisada uma curva de distribuição de frequência de títulos de anticorpos normalmente observada na população-alvo. Referências FERREIRA, Antonio Walter; MORAES, Sandra do Lago. Diagnóstico Laboratorial das Principais Doenças Infecciosas e Autoimunes. 3ª. ed. [S. l.]: Guanabara Koogan, 2013. 477 p.
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