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MATERIAIS MAIS UTILIZADOS NO LABORATÓRIO DE Microbiologia Diagnóstico laboratorial: depende da obtenção de biomassa microbiana na forma de populações puras, que quando desenvolvidas/crescidas em meios de cultura denominam-se culturas puras ou axênicas (populações homogêneas quanto ao tipo de microrganismo, cultivados em meios de cultura sem a presença de outras formas de vida contaminantes). A obtenção de uma cultura pura a partir de uma cultura mista denomina-se isolamento, conseguido através da semeadura dos microrganismos na superfície de meios de cultura sólidos em placas de Petri, o que permitirá a formação de colônias (que são populações isoladas que crescem na superfície destes meios). Como todos os seres vivos, os microrganismos necessitam de nutrientes apropriados ao seu desenvolvimento, assim como condições físicas ou ambientais favoráveis. Sendo assim, necessário reproduzir em laboratório as condições naturais. Fornecendo: Fonte de Carbono Fonte de Nitrogênio Fonte de Fósforo Fonte de Enxofre Fonte de Sais e Íons Fatores de crescimento Agentes oxidantes Agentes redutores Temperatura Atmosfera de incubação Ph Pressão Osmótica MEIOS DE CULTURA Substâncias nutritivas em concentrações adequadas que devem servir como: Condições Ambientais Favoráveis: In st ag ra m : @ ca ro l_ nb Umidade OS MEIOS DE CULTURAS SÃO UTILIZADOS EM TRÊS TIPOS DIFERENTES DE CONSISTÊNCIA: Líquida:utilizados para crescimento em massa (não promovem a formação de colônias, mas sim, crescimento por dispersão). Sólida: propiciam a formação de colônias sobre ou dentro do substrato sólido. Ideal para realização de isolamento de colônias. Semissólida: para verificação de motilidade. OS MEIOS DE CULTURAS PODEM SER CLASSIFICADOS EM, QUANTO À FUNÇÃO: Meios de transporte:meios utilizados para garantir a viabilidade dos microrganismos que não podem ser semeados logo após a coleta e que poderiam morrer. Ex.: Ringer- Pras (próprio para transporte de bactérias anaeróbias). Meios de triagem: meios utilizados para identificação presuntiva ou separação de bactérias em grandes grupos ou níveis taxonômicos mais amplos. Ex. separação de bactérias de uma mesma família - Ágar tríplice açúcar ferro (TSI) quando utilizado para triagem de bactérias da família Enterobacteriaceae. Meios enriquecidos: Aumentam possibilidade de crescimento da espécie desejada, quando a mesma se encontra em pequeno número, ou demanda nutrientes/fatores de crescimento particulares. Adicionam-se ao meio substâncias de enriquecimento, tais como sangue, soro, ovo, extrato de levedura, extrato de carne, vitaminas, etc. Ex: Ágar sangue. Meios complexos:possuem os componentes essenciais ao crescimento da maioria dos organismos quimioheterotróficos. A composição química exata não é inteiramente conhecida Instagram : @ carol_nb Meios seletivos:inibem o desenvolvimento de determinados microrganismos, devido à adição de substâncias inibidoras (antibióticos, sais biliares, substâncias químicas, corantes, etc), favorecendo o crescimento dos microrganismos de interesse. Ex. Meio Bacteroides Bile Esculina (BBE). Meios indicadores (ou diferenciais): meios que revelam uma propriedade bioquímica particular, permitindo uma identificação presuntiva. Ex.: caldo lactose c/ vermelho neutro (indicador de fermentação da lactose). Meios seletivos indicadores (ou seletivo-diferenciais): são utilizados para o isolamento e identificação presuntiva de microrganismos. Exemplo: Ágar MacConkey (seletivo por conter cristal violeta e sais biliares que inibem o crescimento de bactérias Gram positivo e Gram negativo exigentes, e indicador da fermentação da lactose evidenciada pelo vermelho neutro). Meios redutores: meios que servem para crescimento de bactérias anaeróbias obrigatórias, pois possuem substâncias capazes de se combinar com o oxigênio dissolvido, eliminando-o do meio de cultura. Ex. BHI c/L-cistina. Meios quimicamente definidos: meio no qual a composição química exata é conhecida. Exemplo: meio para o cultivo de bactérias quimioheterotróficas exigentes. TÉCNICAS DE SEMEADURA Conceitos importantes Isolamento de um microorganismo: Obtenção de uma cultura pura - identificação do microorganismo. Semeadura: Plantio de um microorganismo em um meio de cultura. Repique: transferência de um microrganismo de um meio de cultura para outro Instagram: @carol_nb