ENUMERACIÓN, DESCRIPCIÓN Y PREPARACIÓN DEL MATERIAL UTILIZADO EN MICROBIOLOGÍA

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LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA GENERAL 
PRÁCTICA Nº 2 
EL LABORATORIO BACTERIOLOGICO. 
 
ENUMERACIÓN, DESCRIPCIÓN Y PREPARACIÓN DEL MATERIAL UTILIZADO EN 
MICROBIOLOGÍA 
OBJETIVOS DE LA PRÁCTICA 
 Reconocer los equipos, materiales e instrumentos de empleo común en los 
laboratorios bacteriológicos. 
 Aplicar los procedimientos de lavado y acondicionamiento de cristalería e 
instrumental empleados en laboratorios bacteriológicos. 
 Interpretar él porque de los requisitos empleados en el lavado, cuidado y 
acondicionamiento de la cristalería e instrumental. 
MATERIALES DE VIDRIO: 
El material de vidrio que se utiliza en Microbiología debe ser de cristal, cuya 
composición especial permita una fácil fusión. El material debe ser neutro (para evitar 
alteraciones de los medios y materiales que se introduzcan), transparente, resistente a 
golpes y variaciones térmicas, y no sufrir desvitrificación al ser sometido a llama. Los 
materiales de vidrio más utilizados en laboratorios de Microbiología e Inmunología son: 
 
Láminas Porta-objeto: 
Láminas de vidrio, rectangulares y de tamaño 
variable. Usados para colocar preparaciones 
que van a ser observadas. Limpios y 
desgrasados. 
 
 
Láminas Cubre-objeto: 
Laminillas de vidrio cuadradas, redondas 
o rectangulares, tamaño variable. Para Examen 
microscópico al fresco. Evitan desecación y 
contaminación del lente. 
 
 
 
 
 
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Láminas de Koch: 
Semejante a una lámina portaobjeto pero 
presenta una excavación central o hendidura. 
Gota pendiente para observar motilidad 
bacteriana. 
Tubos de ensayo: 
Recipientes de vidrio de paredes gruesas, de 
diferentes dimensiones (150X16 mm; 175x22 
mm; 100x22 mm). Sirve como envase de 
medios de cultivo. Se esterilizan con tapa de 
algodón. 
 
 
 
Tubos de fermentación Durham: 
Tubos pequeños, de dimensiones variables 
(más común 50x6 mm). Se colocan invertidos 
en medio de cultivo líquido en un tubo mayor. 
Recolecta el gas producido por la fermentación. 
 
 
 
 
Tubos de Roux: 
Son tubos de 200X25 mm., que presentan una 
estrangulación en el extremo inferior. Se usa 
para cultivo en papa. 
 
 
 
 
Tubos con tapa de baquelita: 
Tubos de ensayo que presentan en su extremo 
superior una tapa de baquelita resistente al 
autoclave. 
 
 
 
 
 
 
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Tubos de centrifuga: 
Tubos cónicos graduados o no, con diversas 
capacidades. Uso en aerología. 
 
 
Placas de Petri: 
Recipientes de vidrio o de plástico, redondos y 
planos. Se emplean como recipientes de 
medios de cultivo sólido. Superficie extensa 
permite siembra de bacterias. Es esencial para 
el aislamiento. 
 
Balones: 
Envases de vidrio o plástico en forma de balón 
con un cuello alargado, pueden presentar fondo 
plano. 
 
 
Balones aforados: 
Envases de vidrio en forma de balón con cuello 
alargado y graduación. Empleados para la 
preparación de soluciones con volúmenes 
exactos. 
 
 
Fiolas de Erlenmeyer: 
Recipientes de vidrio de forma cónica, para 
diferentes volúmenes (de 125 a 2.000 ml) Se 
emplean para mezclar y calentar soluciones, 
preparar y almacenar de medios de cultivo. 
 
Fiolas de Kitasato: 
Recipientes de vidrio con la misma forma que 
los Erlenmeyer. Pero con mayor espesor y una 
prolongación tubular lateral ya sea superior o 
inferior. Empleado para realizar filtraciones al 
vacío (líquido ascítico, suero) que el calor 
puede dañar. 
 
 
 
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Frasco o botella de Roux: 
Envases achatados que se emplean para 
cultivos confluentes en agar y en grandes 
cantidades. Se emplean en la preparación de 
antígenos, bacterinas, etc. 
 
 
Beaker o vaso de precipitado: 
Recipiente de cristal o de material plástico de 
capacidad variable y boca ancha. Se emplea en 
la mezcla y preparación de medios y reactivos. 
 
Frasco de dilución: 
Frasco de vidrio con tapa de baquelita que se 
emplea en la realización de diluciones, sobre 
todo en microbiología de alimentos. 
 
 
Embudos: 
Recipientes de plástico o vidrio, con pico 
terminado en bisel, de diferentes diámetros. Se 
utiliza para repartir medios de cultivo en tubos 
de ensayo y otros recipientes. Permite filtrar 
sustancias. 
 
 
Cilindros graduados o probetas: 
Son recipientes cilíndricos con una base ancha 
que le confiere estabilidad, de capacidad 
variable indicada por una escala graduada en 
su parte externa. Se emplea en la 
determinación volumétrica de líquidos. 
 
 
 
 
 
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 Viales: 
Recipientes de vidrio con tapa de diferentes 
tamaños, empleados en la toma de muestras o en 
la conservación mediante congelación de material 
o líquidos. 
 
Varilla de vidrio: 
Se utilizan para agitar o mover sustancias, es 
decir, facilitan la homogenización. De 
dimensiones, formas y espesor variables: simple, 
acodada, espátula de Drigalski. 
 
Espátula de Drigalski. 
Varilla de vidrio que se usa para siembra sobre 
superficies de medios sólidos y para cosechas de 
cultivos. 
 
Pipeta de Bang: 
Pipeta con graduación externa especial. Se 
emplea para medir volúmenes muy específicos 
(0,08; 0,04; 0,02; 0,01; 0,005 ml). Se emplea en la 
prueba de Brucelosis. 
 
 
Pipeta volumétrica: 
No están graduadas y sólo permiten medir un 
volumen único 
 
Recipientes para coloraciones (inmersión 
total): 
Frasco de vidrio de paredes gruesas y boca 
ancha, con tapa. Se emplea para la inmersión de 
láminas portaobjetos con extendidos en 
soluciones colorantes. 
 
 
 
 
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Goteros: 
Frascos de vidrio con dispositivo dosificador gota 
a gota en su tapa. Puede ser de color ámbar o 
transparente, dependiendo de la estabilidad a la 
luz que presente el reactivo contenido en su 
interior. Permite contener sustancias que se 
necesitan agregar en pequeñas cantidades. 
 
Frascos dosificadores de colorantes: 
Frasco de vidrio de paredes gruesas con tapa de 
diseño especial que permite la salida de solución 
colorante de manera controlada. Se emplea para 
colorear láminas con extendidos fijados por calor. 
 
 
Pipetas graduadas: 
Tubos delgados que presentan un extremo agudo y 
otro romo empleados para medir trasvasar o medir 
volúmenes fijos de soluciones. Existen pipetas 
graduadas hasta la punta (pipetas terminales) y de 
doble enrase (graduación termina por arriba de la 
punta). En la punta roma se coloca un algodón que 
tiene como función: Proteger al operador de posible 
contaminación accidental e impedir la contaminación 
del material al soplar. 
Pipetas Pasteur: 
Pipetas sin graduación, con punta inferior de 
diámetro capilar. Se emplea para colocar gotas en 
láminas, cuando sembramos o se precisa tomar un 
volumen inexacto de líquidos. 
 
 
 
 
 
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APARATOS E INSTRUMENTOS: 
Mango de Kolle con alambre o Asa de 
Platino: 
Constituido por un mango de material diverso 
con una extremidad recubierta de abonita que 
actúa como aislante térmico; en la otra tiene 
una aguja o asa de alambre de platino (niquel-
cromo). Sembrar o repicar en medios de cultivo. 
 
Asas y agujas de inoculación desechables: 
Asas y agujas de plástico calibradas y estériles. 
Se emplean para sembrar o repicar bacterias 
en medios de cultivo. 
 
Mechero Bunsen: 
Instrumento formado por un tubo metálico 
vertical sujeto a un pie de conveniente peso, la 
entrada de gas se efectúa por un tubo lateral. 
En la parte inferior del tubo vertical existe un 
orificio que permite la entrada de aire, cuya 
apertura se regula por un tornillo. Se utiliza para 
producir la llama de gas. 
Balanza de un solo plato: 
Aparato que permite determinar el peso de 
medios de cultivo, colorantes u otras 
sustancias. Es una aparato que permite pesar 
sustancias su sensibilidad es de 1 décima de 
gramo. 
 
Balanza Analítica: 
Balanza que permite determinar cantidades 
muy pequeñas y precisas (0,1 mg o menos). 
 
 
 
 
 
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Campana de microaerofilia: 
Recipientes de vidrio, en los cuales se coloca 
una vela encendida con el objeto de producir 
CO2 y crear una atmósfera libre de O2 y con 
una concentraciónde CO2 en el orden del 5 al 
8%. Se emplea en el cultivo de M.O. tales 
como: Brucella abortus, Neisseria, 
Haemophyllus, entre otros. 
 
Jarra de Gas-pak: 
Recipiente que permite obtener ambientes 
libres de oxígeno empleando reactivos equipos 
catalizan la eliminación del oxígeno mediante 
una reacción en frío. El oxígeno es reducido a 
agua. 
Agitador vortex: 
Equipo que se utiliza para mezclar diluciones, o 
resuspender partículas, entre ellas gérmenes 
que se encuentran en suspensión en los 
líquidos. 
 
Estufa: 
Equipo parecido a un horno eléctrico que se 
emplea para someter los medios de cultivo a 
incubaciones con diferentes rangos de 
temperatura, generalmente 37 ºC. Esta 
controlado por un termostato. 
 
Horno Pasteur: 
Equipo parecido a la estufa, pero alcanza 
valores de temperatura superiores. Se utiliza en 
la esterilización de la cristalería mediante la 
aplicación de calor seco (180 ºC x 30´). 
 
 
 
 
 
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Autoclave: 
Equipo que se emplea para esterilizar todo 
material que puede dañarse por calor seco, 
tales como medios de cultivo, materiales de 
superficie de goma,etc). Esteriliza mediante 
calor húmedo a una temperatura de 121 ºC a 
15 libras de presión durante 15´. 
 
 
Pipetero: 
Recipientes de acero inoxidable que se utilizan 
para guardar pipetas previamente preparadas 
(esterilizadas). 
 
 
Espátulas: 
Instrumentos empleados para tomar material de 
un recipiente con el objeto de pesarlo o 
mezclarlo. Generalmente esta compuesto de un 
mango de madera y una laminilla de acero 
inoxidable. 
 
 
Mortero y mazo: 
Son utensilios hechos de diferentes materiales 
como: porcelana, vidrio o ágata, los morteros de 
vidrio y de porcelana se utilizan para triturar 
materiales de poca dureza y los de ágata para 
materiales que tienen mayor dureza. 
 
 
 
Aglutinómetro: 
Caja de madera con características especiales (placa 
de vidrio cuadriculada y fuente de luz en el fondo), 
que se emplea para leer pruebas de aglutinación, Ej.: 
Pruebas de brucelosis. 
 
 
 
 
 
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Pisetas: 
Recipientes plásticos de contextura suave con 
una punta por la cual se puede expeler su 
contenido al comprimirlos. Se usa para rociar 
agua, desinfectante, etc. 
 
 
Baño María: 
Recipiente de acero inoxidable en el cual se 
coloca agua para calentarla. Incluye un 
termostato regulador de temperatura y un 
termómetro que indica la temperatura 
alcanzada. Dentro del agua se colocan tubos, 
frascos u otros envases conteniendo diversos 
líquidos. La temperatura puede variar desde 20 
ºC hasta 80 ºC. El uso más frecuente es a 37 
ºC o a 55 ºC. 
 
 
Centrifugas: 
Es un aparato que aplica una fuerza centrífuga 
sostenida (esto es, una fuerza producida por 
rotación) para impeler la materia hacia afuera 
del centro de rotación. Este principio se utiliza 
para separar partículas en un medio líquido por 
sedimentación. La parte funcional está 
constituida por un eje vertical accionado por un 
motor eléctrico que hace girar el soporte o 
cabezal que lleva los tubos a diferentes 
velocidades, gracias a un regulador de 
revoluciones. Algunas centrifugas llevan un reloj 
de tiempo para controlar la duración de la 
centrifugación, también puede llevar un 
tacómetro que indica las revoluciones que da el 
aparato. Se emplea para separar en base a 
pesos moleculares. 
 
 
 
 
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Microcentrifuga: 
Igual al anterior, pero para volúmenes 
pequeños. Emplea tubos capilares o eppendorf. 
 
 
Camisas de centrifugas: 
Contenedores de metal en los que se 
introducen los tubos de centrífuga, estas 
camisas se colocan en ejes vasculantes dentro 
de las centrifugas. 
 
Campana de flujo laminar: 
Equipo de laboratorio que provee un ambiente 
seguro de trabajo al proteger manos, cara y 
todo el cuerpo del operario. Posee fuente de 
gas, aire comprimido, electricidad. Igualmente 
ofrece como ventaja un flujo de aire dirigido 
hacía filtros que permiten la captura de todo el 
material microbiológico infectante. 
 
 
Reloj cronómetro para turnos: 
Cronómetro con alarma acústica que advierte la 
culminación del tiempo de una incubación. 
 
Termómetro: 
Instrumento que permite determinar la 
temperatura del medio ambiente o los medios. 
Se utilizan para determinar la temperatura a la 
que ocurre una reacción. 
 
Parafilm: 
Película plástica que permite la mezcla de 
soluciones al colocarse sobre la boca de los 
frascos sin tapa. 
 
 
 
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Contador de colonias: 
Equipo conformado por una lámina de vidrio 
cuadriculada, una fuente de luz, una lupa y 
electrodo, que permite el contaje de colonias en 
placas de Petri con medio de cultivo. Empleada 
en Microbiología de alimentos y agua. 
 
Microscopio: 
Equipo de laboratorio conformado por oculares, 
objetivos y lentes de aumento que permite 
observar preparaciones con especimenes 
microbiológicos. 
 
 
pHmetro: 
Equipo conformado por un electrodo y un 
monitor. Se emplea para la determinación del 
pH. 
 
 
 
Micropipetas graduables o fijas: 
Pipetas mecánicas que emplean puntas 
desechables plásticas para volúmenes 
pequeños de líquido (< 1ml). 
 
 
 
Propipetas: 
Instrumento empleado para facilitar la toma de 
líquidos que se coloca sobre el extremo 
superior de las pipetas y que permite la 
manipulación de líquidos potencialmente 
peligrosos sin riesgo para el operario. 
 
 
 
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Medios de cultivo: 
Sustrato empleado para el cultivo y aislamiento 
de cultivos puros bacterianos. 
 
 
 
Carro de transporte para materiales de 
laboratorio: 
Carro de acero inoxidable para el transporte de 
reactivos y equipos de uso en el laboratorio. 
 
 
Reactivos coloración de Gram: 
Reactivos empleados para colorear 
microorganismos obtenidos a partir de medios 
de cultivo o de muestras clínicas. 
 
 
Agujas vacutainer: 
Agujas de doble punta que son empleadas en 
la toma de muestras sanguíneas estériles. 
 
 
 
Tubos vacutainer estériles con vacío: 
Tubos de ensayo con tapones de goma, 
estériles y con vacío, empleados en las tomas 
de muestras sanguíneas. 
 
 
 
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Medios de transporte: 
Sistemas para recolección, preservación y 
transporte de especimenes microbiológicos. 
 
Gradillas para tubos: 
Rejillas que permiten el sostén de tubos de 
ensayo de diversos calibres. Pueden ser de 
metal o de plástico. 
 
Nevera: 
Equipo empleado para preservar los reactivos y 
medios a bajas temperaturas. 
 
 
 
 
Base para agitador magnético: 
Permite la mezcla de reactivos y solubilización 
de los mismos. 
 
 
 
Agitadores magnéticos: 
Piezas imantadas recubiertas de plástico que 
permiten la mezcla de reactivos y solubilización 
de los mismos mediante agitación por rotación. 
Batas de laboratorio: 
Blancas, manga larga, debidamente 
abotonadas. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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Cinta indicadora para Autoclave: 
Cinta con propiedades adherentes empleada 
como indicadora del correcto funcionamiento 
del autoclave. Cuando la cinta es sometida a la 
temperatura, presión y tiempo de incubación 
adecuado aparece una señal visual sobre la 
misma. 
 
 
Cepillos para lavado de cristalería: 
Cepillos con asa de alambre o plástico, útiles 
para la limpieza de una amplia variedad de 
cristalería 
Escobillas o limpia tubos: Permite lavar tubos 
de ensayo. 
 
 
Yesqueros: 
Instrumentos empleado para encender los 
mecheros, pueden ser de pedernal, de gas o 
eléctrico. 
 
Rotores orbitales: 
Equipo que permite la mezcla de medios 
líquidos o suspensiones que no pueden se 
agitadas violentamente. Consta de una 
plataforma y un rotor que permite el movimiento 
circular de la primera. 
 
Bomba de vacío: 
Motor que permite la creación de vacío. Se 
emplea para filtrar soluciones o líquidos al 
hacerlos pasar a través de membranas 
porosas. También se emplean para purificar 
líquidos. 
 
 
 
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Cestas de alambre: 
Recipiente que permite contener material para 
esterilizar en autoclave 
 
Porta placas u porta pipetas: 
Recipienteelaborado en acero inoxidable que 
se utiliza para contener placas de Petri y/o 
pipetas estériles. 
 
 
Rejilla de amianto o asbesto: 
Es una tela de alambre de forma cuadrangular 
con la parte central recubierta de amianto o 
asbesto, con el objeto de lograr una mejor 
distribución del calor. Se utiliza para sostener 
utensilios que se van a someter a un 
calentamiento y con ayuda de este utensilio el 
calentamiento se hace uniforme. 
 
 
 
Bandejas de coloración: 
 
 
 
 
 
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Soportes para embudos: 
Pieza del equipamiento de laboratorio que sirve 
para sujetar embudos de filtración, embudos de 
decantación, etc. 
 
Trípodes: 
Es un aparato de tres patas y parte superior 
circular o triangular, que permite estabilizar un 
objeto y evitar el movimiento propio de este. La 
palabra se deriva de tripous, palabra griega que 
significa ‘tres pies’. Sobre la plataforma del 
trípode se coloca una tela de amianto para que 
la llama no dé directamente sobre el vidrio y se 
difunda mejor el calor. 
Soportes universales: 
Es una pieza del equipamiento de laboratorio 
donde se sujetan las pinzas de laboratorio, 
mediante dobles nueces. Sirve para sujetar 
tubos de ensayo, buretas, embudos de 
filtración, criba de decantación o embudos de 
decantación, etc. También se emplea para 
montar aparatos de destilación y otros equipos 
similares más complejos. 
Aro metálico: Instrumento metálico de 
laboratorio, que se emplea como soporte de 
otros materiales anexado al soporte universal. 
 
 
 
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Espátulas, tijeras, pinzas, bisturís, etc.: 
Instrumentos empleados para tomar, separar, 
sujetar, cortar o diseccionar material biológico y 
no biológico. 
 
 
 
 
Marcadores: 
Se utiliza en la rotulación e identificación de 
vidriería empleada en la preparación de los 
medios de cultivo en los cuales se siembran las 
cepas bacterianas 
 
 
Lámpara de Luz Ultravioleta: 
Lámpara que emite radiación electromagnética 
en el intervalo entre 4 y 400 nm, o más allá del 
espectro violeta de la luz visible. El cual es 
empleado para el control y muerte de 
microorganismo sobre la superficie de áreas e 
instrumentos de trabajo. 
 
 
 
 
 
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Soportes para filtros o membranas filtrantes: 
Instrumento empleado como un método físico-
mecánico para la separación de bacterias que 
se encuentran en un suspensión en mezclas 
de sustancias compuestas de diferentes fases 
(fase = componente homogéneo en un 
determinado estado de agregación). Un medio 
filtrante poroso es atravesado por un líquido 
quedando retenidas las bacterias en la 
superficie o en el interior del medio filtrante 
 
Mangueras: 
Es un instrumento de caucho que se utiliza para 
traspasar líquidos o gases de un instrumento a 
otro. 
 
Gafas de seguridad: 
Este instrumento sirve para proteger los ojos y 
parte de la cara, de cualquier partícula que 
pueda afectarla. 
 
 
Papel filtro: 
Se utiliza para filtrar disoluciones, reteniendo 
los precipitados o impurezas. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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ELIMINACIÓN Y LIMPIEZA DEL MATERIAL CONTAMINADO. 
ESTERILIZACION. 
ESTERILIZACIÓN: 
En Microbiología se define esterilización, como la destrucción o eliminación 
total de todos los microorganismos vivos en un objeto o material, incluidas las 
endosporas bacterianas. En otras palabras, la esterilización implica la destrucción 
o eliminación de cualquier forma de vida. Se considera que un objeto está estéril 
cuando se encuentra libre de todo organismo viable. Un organismo viable o vivo 
es aquel que puede reproducirse. La esterilidad por lo tanto es un estado absoluto, 
no hay grados de esterilidad. 
La comprensión de los principios básicos de esterilización y desinfección es 
fundamental para la práctica razonable de la medicina y, en general, de las 
carreras correspondientes al área de la salud. En Microbiología es importante 
recordar la necesidad de una pulcra y esmerada limpieza del material, así mismo, 
es muy importante la recuperación del material reciclable y la eliminación del 
material desechable. 
Continuamente se introducen nuevas técnicas de esterilización y nuevos 
productos desinfectantes; sin embargo, la mayoría de los procedimientos y 
agentes utilizados en la actualidad son los mismos que han venido empleándose 
desde hace cientos de años. 
Al aplicar algunos procedimientos de esterilización (esterilización por calor, 
por ejemplo), es posible destruir o matar a los microorganismos, pero no los 
eliminamos físicamente. En ocasiones especiales, especialmente tratándose de 
líquidos, pueden permanecer organismos muertos o restos de los mismos, aun 
cuando el líquido es estéril, estos productos remanentes pueden interferir con la 
finalidad a la que se destina el líquido. 
Obviamente en ocasiones no basta con esterilizar un objeto, material o 
sustancias; Es necesario también escoger adecuadamente el procedimiento de 
esterilización apropiado a la situación específica. 
Hay varios métodos de esterilización posibles, que pueden clasificarse de la 
siguiente manera: 
1. METODOS FISICOS: 
Permiten la destrucción de los microorganismos mediante aplicación de 
calor o radiaciones, o bien, su eliminación mediante filtración o centrifugación. 
2. METODOS QUIMICOS: 
Los microorganismos son destruidos mediante la aplicación de agente 
químico. 
 
 
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La descripción de los métodos empleados para el control y muerte de 
microorganismos se discutirán, con bastante detalle más adelante, en la práctica 
correspondiente. Por los momentos solo mencionaremos la dinámica de la 
esterilización que sustenta las técnicas empleadas para la preparación del material 
de cristalería requerido en el trabajo microbiológico. Igualmente consideramos que 
es pertinente aclarar algunos de los términos de uso frecuente en Microbiología: 
ESTERILIZACIÓN: Termino absoluto que implica la inactivación de toda 
forma de vida microbiana, en términos de la capacidad de organismos para 
reproducirse. 
SEPSIS: Estado de infección. 
SÉPTICO: Calificativo dado a materiales infecciosos. 
ASEPSIA, ASÉPTICO: Estado no infeccioso o ausencia de material 
infeccioso respectivamente. 
ANTISÉPTICO: Sustancias químicas que tienen la propiedad de oponerse a 
la sepsis o putrefacción ya sea, matando los microorganismos o inhibiendo su 
capacidad de crecer y multiplicarse. Este termino se utiliza comúnmente para 
referirse a agentes químicos que se aplican tópicamente sobre: tejidos vivos o se 
incorporan a materiales destinados a inoculación (vacunas, por ejemplo), o que 
interesa conservar libres de contaminación (sueros). 
DESINFECTANTE: Agente capaz de destruir microorganismos capaces de 
producir infecciones. El término comúnmente se adjudica a los agentes que se 
aplican sobre objetos inanimados: utensilios, pisos, paredes, etc. 
SUFIJOS -CIDA y -STASIS: Se añaden cuando la acción final del agente 
comporta la muerte del microorganismo o la inhibición de su capacidad de crecer y 
multiplicarse, respectivamente. 
BACTERICIDA: Agente capaz de destruir bacterias. 
GERMICIDA: destruye gérmenes o microorganismos. 
BACTERIOSTÁTICO: agente capaz de inhibir la multiplicación bacteriana. 
DINAMICA DE LA ESTERILIZACIÓN. 
Para la comprensión de las bases de la esterilización por agentes letales, 
es imprescindible tener una información acerca de la cinética de la muerte en 
poblaciones bacterianas. Tratándose de microorganismos, el único criterio válido 
de muerte es la incapacidad para multiplicarse. Eso se determina mediante 
siembra en medios de cultivo adecuados; usualmente aplicamos métodos de 
recuento o contaje bacteriano viable. 
Cuando una población bacteriana se expone a un agente letal, ocurre una 
disminución, progresiva en el tiempo, en el número de microorganismos 
sobrevivientes. La cinética de la muerte de una población bacteriana es, 
usualmente, exponencial, si elaboramos un gráfico representando el logaritmo del 
número de microorganismos sobrevivientes, como una función del tiempo de22 
exposición, obtenemos una línea recta, cuya pendiente negativa define la rata o 
tasa de muerte. La tasa de muerte no dice sólo que fracción de la población inicial 
sobrevive a un determinado período de exposición al agente. Para determinar el 
número real de sobrevivientes es necesario conocer el tamaño, en términos de 
número de individuos, de la población inicial. 
La curva logarítmica es matemáticamente conveniente y aproximadamente 
correcta cuando se usan concentraciones relativamente altas de desinfectantes 
pero, cuando la concentración es baja la curva de desinfección es sigmoidal; la 
tasa de muerte es lenta en las etapas iniciales de contacto, procede luego procede 
luego en forma rápida y se hace lenta hacia el final. Esto debe tomarse e cuenta 
cuando la carga microbiana inicial es alta, pues en ésta circunstancias aumenta la 
probabilidad de que se encuentran presentes individuos resistentes, o formas de 
resistencia bacteriana como las esporas. La experiencia indica que mientras 
mayor es el número inicial de microorganismos presentes, debe considerarse 
además el tipo de microorganismos presentes. No todos los microorganismos son 
igualmente susceptibles; por ejemplo, los esporulados son más resistentes a una 
serie de agentes físicos y químicos que aquellos que no lo son. De hecho, hay 
mucha variación en la sensibilidad de las distintas especies microbianas a los 
diferentes agentes microbianos y, aún más, es posible encontrar variaciones 
dentro de una misma especie. 
Preparación del Material para la Esterilización 
Limpieza de la Cristalería: 
Toda la cristalería utilizada en Microbiología debe estar escrupulosamente 
limpia y estéril Para el lavado y limpieza de la cristalería se debe considerar si es 
nueva o no, pues amerita tratamientos diferentes según el caso. Cristalería nueva: 
La cristalería nueva generalmente contiene álcalis libres, por lo que es necesario 
introducir1a en un recipiente que contenga una solución al 2% de HCI, durante 
algunas horas, para lograr la neutralización. Posteriormente, se enjuaga con agua 
comente y se procede a lavarla. 
Lavado de la Cristalería: 
1.- Cristalería Nueva: La cristalería nueva (ya neutralizada) o la usada pero 
no contaminada con materiales infecciosos, se coloca en agua, preferiblemente 
tibia, con suficiente jabón para que se forme abundante espuma y luego se limpia 
con cepillos y esponjas especiales. Se enjuaga con agua comente varias veces y 
posteriormente se enjuaga al menos tres veces con agua destilada. Se deja 
escurrir hasta secar y se procede al taponamiento y envoltura para la 
esterilización. 
2.- Cristalería Sucia con Material infeccioso: Se procede a la 
decontaminación o esterilización de la cristalería con el fin de destruir todo agente 
vivo. Este proceso de esterilización se lleva a cabo en el autoclave. Después de la 
 
 
23 
esterilización, se desecha el contenido de los recipientes y se procede al lavado 
como se describió anteriormente. 
3.- Lavado de Pipetas, Láminas, laminillas y varillas de vidrio usados: Este 
material contaminado con agentes infecciosos, se coloca de inmediato en 
recipientes con desinfectante (solución de fenol al 0.5%), que siempre debe estar 
ubicado en el mesón de trabajo. Después del tiempo de acción necesario este 
material se considera descontaminado y se procede al lavado en la forma ya 
descrita. 
4.- Cristalería Turbia: La cristalería, después de ser usada por mucho 
tiempo, en general se enturbia. Lo que impide una buena visualización de los 
medios y materiales contenidos en ella. Para eliminar el enturbiamiento se utiliza 
una solución llamada mezcla sulfocrómica, que se prepara de la siguiente manera: 
 
MEZCLA SULFOCRÓMICA 
Bicromato de potasio 65 g. 
Agua destilada 400 mI. 
Acido Sulfúrico concentrado hasta completar 1000 mI. 
 
El Bicromato se disuelve en el agua con ayuda del calor; se deja enfriar y se 
añade lentamente el ácido sulfúrico, agitando constantemente. 
La cristalería turbia se sumerge en esta mezcla durante varias horas (12 - 
24 horas). Luego se retira, la enjuaga con agua comente y después con agua 
destilada. Posteriormente se procede al secado y preparación para la 
esterilización. Para manipular la mezcla sulfocrómica es imprescindible el uso de 
guantes de goma. 
Preparación de la cristalería para la esterilización 
Después del lavado y secado, se procede a preparar la cristalería para la 
esterilización. La cristalería se tapona y se envuelve de manera diferente según la 
forma del recipiente. 
PREPARACIÓN Y PROCESAMIENTO DEL MATERIAL DE 
LABORATORIO: 
El material que se va a esterilizar debe prepararse de tal manera que se 
conserve sin contaminar una vez esterilizado: 
Todos los objetos sucios o contaminados deben recogerse en recipientes 
adecuados, provistos de tapa. El material de vidrio, tubos, matraces y pipetas, se 
separa del resto del material recogiéndose en un contenedor vertical u horizontal 
lleno de una solución desinfectante, como por ejemplo una solución diluida de 
lejía, en la que permanecerá antes de su lavado durante 24 horas. 
 
 
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Como los objetos contaminados contienen, con frecuencia, cantidades 
importantes de materia orgánica (procedente de los medios de cultivo) que 
protegen a los microorganismos de los agentes físicos o químicos utilizados en la 
descontaminación de los mismos, no puede asegurarse la total destrucción de las 
formas vegetativas y mucho menos de las esporas. Por ello, se recomienda utilizar 
mayores concentraciones de desinfectante y tiempos más largos de tratamiento 
que para la desinfección o la esterilización de material limpio. 
Generalmente se utiliza el autoclave para la descontaminación de 
instrumentos, equipos y material que sean estables al calor, así como de material 
desechable. A tal objeto se coloca este material en recipientes adecuados y se 
introducen en el autoclave sometiéndolos a la acción del vapor de agua a 1 
atmósfera de sobrepresión (121º C) en ciclos más prolongados de lo habitual (1 
hora en lugar de hacerlo durante 30 minutos). 
Una vez efectuado este tratamiento, se procede a su lavado para eliminar 
toda materia extraña, sumergiendo el material en agua caliente jabonosa o 
utilizando detergentes, mezcla crómica o cualquier otro procedimiento enérgico, 
tanto mecánico como químico. Se aclara bien con abundante agua y se deja 
escurrir y secar a temperatura ambiente. En el caso de las pipetas, y antes de ser 
lavadas, debe extraerse con ayuda de un alambre o pinzas especiales, el trozo de 
algodón que tienen en la boquilla. 
Algunos de los objetos sucios y contaminados (portas, pipetas, etc), 
después de lavados, se sumergen en una mezcla sulfocrómica donde se dejan 24 
horas al cabo de las cuales se lavan con agua y se dejan escurrir. Los portas se 
secan con un paño de hilo limpio, procurando que no queden hilazas sobre la 
superficie. El material que contiene colorantes se trata, según las condiciones del 
material, durante un tiempo variable con una solución que puede ser de ácido 
clorhídrico, nítrico o mezcla sulfocrómica. 
El resto del material (tubos de plástico, jeringas, etc) se trata con distintas 
soluciones desinfectantes como hipoclorito sódico, formol, etc, pero debe 
recordarse que se utilizan a concentraciones superiores a las utilizadas con otros 
fines. 
El material de vidrio, como tubos, matraces, frascos, etc, se cierran con 
algodón graso o tapones metálicos para evitar la entrada o salida de los 
microorganismos. Además, cuando se usa algodón, a de cubrirse éste con un 
papel impermeabilizado. En el caso de las pipetas, se les coloca en la boquilla un 
trocito de algodón que actuará como filtro, evitando la contaminación del operario 
con los microorganismos de la muestra y que éste a su vez contamine la muestra. 
Una vez preparadas, se introducen en estuches o cajas metálicas, o bien se 
envuelvenindividualmente en papel satinado para ser posteriormente 
esterilizadas. Todo el material de vidrio se esteriliza con calor seco, generalmente 
en un horno Pasteur. 
El material de plástico desechable ya se suministra estéril y listo para su 
uso. Por ejemplo, las placas de Petri se introducen en bolsas de plástico selladas 
y se esterilizan con óxido de etileno o radiaciones. 
 
 
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Las soluciones y medios de cultivo líquidos se envasan en matraces o tubos 
y se esterilizan, generalmente, en autoclave. 
Existen varios métodos para llevar a cabo el proceso de esterilización y la 
selección de un determinado método se encuentra condicionado por el tipo de 
material que se quiere esterilizar. 
PRESTE A TENCION A LAS INDICACIONES ACERCA DE LA 
PREPARACION DE CADA MATERIAL.