PRACTICA MEDIOS DE CULTIVO

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Cultivo de microorganismos: Medios de cultivo y métodos de siembra 
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 UNIVERSIDAD CENTRAL DE VENEZUELA 
FACULTAD DE CIENCIAS VETERINARIAS 
DEPARTAMENTO DE PATOLOGÍA VETERINARIA 
CATEDRA DE MICROBIOLOGÍA E INMUNOLOGÍA 
ASIGNATURA: MICROBIOLOGÍA 
 
LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA GENERAL 
CULTIVO DE MICROORGANISMOS: 
MEDIOS DE CULTIVO Y MÉTODOS DE SIEMBRA. 
1.- OBJETIVOS DE LA PRÁCTICA 
a. Reconocer los medios de cultivos, materiales, instrumentos y técnicas 
empleadas rutinariamente en los procedimientos de aislamiento primario e 
identificación bacteriológica de patógenos de interés veterinario. 
b. Conocer la clasificación, preparación, esterilización y distribución de los medios 
de cultivo. 
c. Adquirir conciencia de la importancia que tiene la correcta preparación del 
medio de cultivo en la práctica microbiológica. 
d. Reconocer la necesidad de evitar la contaminación tanto de los medios de 
cultivo como de los demás elementos utilizados en el laboratorio de 
microbiología 
e. Adquirir conocimientos básicos teóricos y prácticos de la siembra y aislamiento 
de bacterias realizando sobre medios de cultivo los diferentes procedimientos 
de siembra por extensión, siembra por estría y agotamiento en placa, siembra 
en masa por placa vertida y siembra en medios de cultivo líquidos y sólidos en 
tubos. 
2.- ACTIVIDADES DEL INSTRUCTOR: 
a. Explicación sobre medios de cultivo, métodos de siembra y aplicaciones 
b. Demostración de las técnicas de preparación, esterilización y distribución de 
los medios de cultivo en placas de petri y tubos de ensayo, diferenciando, en 
estos últimos las técnicas para los medios líquidos y sólidos. 
c. Demostración de técnicas de siembra por agotamiento en placa de agar, placa 
vertida, tubos de medios líquidos y sólidos. 
3.- ACTIVIDADES DE LOS ALUMNOS: 
a- Aplicando técnicas asépticas, siembre el medio de cultivo líquido en tubo que 
se le suministra. Emplee el esquema de diseminación del inoculo indicado. 
Marque el tubo, incube el tubo en estufa a 37ºC. 
b- Aplicando técnicas asépticas, siembre el medio de cultivo sólido en tubo (medio 
con bisel) que se le suministra. Emplee el esquema de diseminación del inoculo 
indicado. Marque el tubo, incube el tubo en estufa a 37ºC. 
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c- Aplicando técnicas asépticas, siembre en la placa de agar nutritivo que se le 
suministra, por la técnica de extensión, usando una espátula de Drygalsky 
esquemas de diseminación del inoculo. Marque la placa, incube la placa en 
posición invertida, en estufa a 37ºC. 
d- Aplicando técnicas asépticas, siembre en la placa de agar nutritivo que se le 
suministra, por la técnica de agotamiento, usando cualquiera de los esquemas 
de diseminación del inoculo. Marque la placa, incube la placa en posición 
invertida, en estufa a 37ºC. 
e- Aplicando técnicas asépticas, y a partir de un tubo de una dilución seriada de 
una muestra bacteriológica, realice la siembra siguiendo la técnica de siembra 
en masa por placa vertida. 
4.- LOS MEDIOS DE CULTIVO EN MICROBIOLOGÍA 
Los microorganismos se encuentran ampliamente distribuidos en la naturaleza, 
de modo que podemos encontrarlos prácticamente en cualquier ambiente. 
Frecuentemente, se encuentran varias especies microbianas compartiendo un 
determinado ambiente; buenos ejemplos de complejas comunidades bióticas lo 
constituyen el colon humano o animal, el rumen, las cavidades naturales del hombre y 
los animales, el suelo, etc. 
Las mezclas de microorganismos es frecuente en los materiales clínicos, sobre 
todo en los que proceden de regiones en las que existe una flora microbiana normal 
establecida como, por ejemplo, las muestras de lesiones en piel, exudados óticos, 
nasales, faríngeos, uretrales, vaginales, heces, etc. 
 Las bacterias se encuentran en el ambiente junto con otros microorganismos, 
razón por la cual es difícil aislarlas. A menudo nuestro interés es caracterizar una 
especie bacteriana, para lo cual debemos estar preparados para aislar, cultivar e 
identificar a la misma. Si bien el aislamiento es un paso crucial en este camino, 
comenzaremos examinando los medios de cultivo, ya que en estos últimos se basan 
muchos de los principios del aislamiento. 
Uno de los sistemas más importantes para la identificación de microorganismos 
es observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el 
laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio 
de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Se han preparado más 
de 10.000 medios de cultivo diferentes. 
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial 
debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y 
presión de oxígeno adecuadas, así como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un 
medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y 
debe estar exento de todo microorganismo contaminante. 
Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros 
componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de los 
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microorganismos. Es decir, es cualquier “medio” que proporcione substancias nutritivas 
que permitan el desarrollo y reproducción de microorganismos. La diversidad 
metabólica de los microorganismos es enorme, por ello, la variedad de medios de 
cultivo también lo es, no existiendo un medio de cultivo universal adecuado para todos 
ellos. 
El conocimiento de las necesidades nutritivas y físicas de los microorganismos 
es fundamental para seleccionar un medio de cultivo adecuado. 
Los requisitos que debe reunir el cultivo de un microorganismo tienden a 
reproducir el ambiente natural en el que se desarrollan. 
La mayoría de las bacterias patógenas requieren nutrientes complejos similares 
en composición a los líquidos orgánicos del cuerpo humano. Por eso, la base de 
muchos medios de cultivo es una infusión de extractos de carne y Peptona a la que se 
añadirán otros ingredientes. 
El agar es un elemento solidificante muy empleado para la preparación de 
medios de cultivo. Se licúa completamente a la temperatura del agua hirviendo y se 
solidifica al enfriarse a 40 grados. Con mínimas excepciones no tiene efecto sobre el 
crecimiento de las bacterias y no es atacado por aquellas que crecen en él. 
La Gelatina es otro agente solidificante pero se emplea mucho menos ya que 
bastantes bacterias provocan su licuación. 
En los diferentes medios de cultivo se encuentran numerosos materiales de 
enriquecimiento como hidratos de carbono, suero, sangre completa, bilis, etc. Los 
hidratos de Carbono se adicionan por dos motivos fundamentales: para incrementar el 
valor nutritivo del medio y para detectar reacciones de fermentación de los 
microorganismos que ayuden a identificarlos. El suero y la sangre completa se añaden 
para promover el crecimiento de los microorganismos menos resistentes. 
También se añaden colorantes que actúan como indicadores para detectar, por 
ejemplo, la formación de ácido o como inhibidores del crecimiento de unas bacterias y 
no de otras (el Rojo Fenol se usa como indicador ya que es rojo en pH básico y 
amarillo en pH ácido. La Violeta de Genciana se usa como inhibidor ya que impide el 
crecimiento de la mayoria de las bacterias Gram-positivas). 
5.- LA EVOLUCIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO 
Podemos decir que la microbiología empieza su verdadero desarrollo como 
ciencia en el momento en que se descubre el microscopio y comienza la observación 
de los primeros microorganismos, pero es indudable que la puesta a punto de los 
medios de cultivo y la utilización del agar como solidificante, marcan dos importantes 
puntos de inflexión en su evolución. 
La primera noticia de la utilización de medios decultivo nos llega del micólogo 
Brefeld, que consiguió aislar y cultivar esporas de hongos en medios sólidos realizados 
a base de gelatina. 
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Sin embargo este sistema no era adecuado para las bacterias (por su menor 
tamaño) y no fue hasta el año 1878 cuando Lister popularizó un método enfocado al 
cultivo puro basado en diluciones seriadas en un medio líquido. 
Koch realizó sus investigaciones utilizando en un primer momento rodajas de 
patata como soporte nutritivo sólido, pero no tardó en recurrir al caldo de carne líquido, 
diseñado por Loeffler, al que, en 1881, añadió gelatina, logrando un medio sólido 
transparente ideal para la observación de la morfología macroscópica de las colonias 
microbianas. 
En el año 1882 tiene lugar uno de los grandes avances de la microbiología en 
relación con los medios de cultivo: el médico alemán Walter Hesse introduce el agar-
agar (polisacárido extraído de algas rojas) como solidificante. 
En 1887 un ayudante de Koch llamado Petri, comienza a utilizar placas de cristal 
planas, que se llaman desde entonces placas de Petri, para sustituir a las clásicas 
bandejas de vidrio cubiertas con campanas que se usaban hasta entonces. 
Beijerinck y Winogradsky, que desde de 1888 realizaron sus investigaciones 
sobre las bacterias quimioautótrofas (utilización de nitrógeno y azufre sobre todo) 
tuvieron gran importancia en el desarrollo de los medios selectivos y de 
enriquecimiento. Diseñaron este tipo de medios de tal forma que su especial 
composición química favorecía el crecimiento de ciertos tipos de microorganismos que, 
en función de sus procesos metabólicos, eran los únicos capaces de utilizar para su 
desarrollo ciertos nutrientes del medio. 
En 1892 Würtz impulsó el uso de los medios diferenciales, incorporando 
indicadores de pH a la composición de ciertos medios con lo cual se podía observar la 
producción de ácidos en la fermentación en ciertos microorganismos. 
6.- CONDICIONES GENERALES PARA EL CULTIVO DE MICROORGANISMOS 
El desarrollo adecuado de los microorganismos en un medio de cultivo se ve 
afectado por una serie de factores de gran importancia y que, en algunos casos, son 
ajenos por completo al propio medio. 
a- disponibilidad de nutrientes adecuados 
Un medio de cultivo adecuado para la investigación microbiológica ha de 
contener, como mínimo, carbono, nitrógeno, azufre, fósforo y sales inorgánicas. En 
muchos casos serán necesarias ciertas vitaminas y otras sustancias inductoras del 
crecimiento. Siempre han de estar presentes las sustancias adecuadas para ejercer de 
donantes o captadores de electrones para las reacciones químicas que tengan lugar. 
Todas estas sustancias se suministraban originalmente en forma de infusiones 
de carne, extractos de carne o extractos de levadura. Sin embargo, la preparación de 
estas sustancias para su aplicación a los medios de cultivo provocaba la pérdida de los 
factores nutritivos lábiles. 
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Actualmente, la forma más extendida de aportar estas sustancias a los medios 
es utilizar peptona que, además, representa una fuente fácilmente asequible de 
nitrógeno y carbón ya que la mayoría de los microorganismos, que no suelen utilizar 
directamente las proteínas naturales, tienen capacidad de atacar los aminoácidos y 
otros compuestos más simples de nitrógeno presentes en la peptona. 
Ciertas bacterias tienen necesidades nutritivas específicas por lo que se añade 
a muchos medios sustancias como suero, sangre, líquido ascítico, etc. Igualmente 
pueden ser necesarios ciertos carbohidratos y sales minerales como las de calcio, 
magnesio, manganeso, sodio o potasio y sustancias promotoras del crecimiento, 
generalmente de naturaleza vitamínica. 
Muy a menudo se añaden al medio de cultivo ciertos colorantes, bien como 
indicadores de ciertas actividades metabólicas o bien por sus capacidades de ejercer 
de inhibidores selectivos de ciertos microorganismos. 
b- consistencia adecuada del medio 
Partiendo de un medio líquido podemos modificar su consistencia añadiendo 
productos como albúmina, gelatina o agar, con lo que obtendríamos medios en estado 
semisólido o sólido. 
Los medios solidificados con gelatina tienen el gran inconveniente de que 
muchos microorganismos no se desarrollan adecuadamente a temperaturas inferiores 
al punto de fusión de este solidificante y de que otros tienen la capacidad de licuarla. 
Actualmente los medios sólidos son de uso universal, por su versatilidad y 
comodidad, pero hay también gran cantidad de medios líquidos cuyo uso está 
ampliamente extendido en el laboratorio. 
c- presencia (o ausencia) de oxígeno y otros gases 
Gran cantidad de bacterias pueden crecer en una atmósfera con tensión de 
oxígeno normal. Algunas pueden obtener el oxígeno directamente de variados 
sustratos. Pero los microorganismos anaerobios estrictos sólo se desarrollarán 
adecuadamente en una atmósfera sin oxígeno ambiental. En un punto intermedio, los 
microorganismos microaerófilos crecen mejor en condiciones atmosféricas 
parcialmente anaerobias (tensión de oxígeno muy reducida y concentraciones elevadas 
de CO2 – 5-8%), mientras los anaerobios facultativos tienen un metabolismo capaz de 
adaptarse a cualquiera de las citadas condiciones. 
d- condiciones adecuadas de humedad 
Un nivel mínimo de humedad, tanto en el medio como en la atmósfera, es 
imprescindible para un buen desarrollo de las células vegetativas microbianas en los 
cultivos. Hay que prever el mantenimiento de estas condiciones mínimas en las estufa 
s de cultivo a 35-37ºC proporcionando una fuente adecuada de agua que mantenga la 
humedad necesaria para el crecimiento de los cultivos y evitar así que se deseque el 
medio. 
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e- Luz ambiental 
La mayoría de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que en 
presencia de luz solar. Hay excepciones evidentes como sería el caso de los 
microorganismos fotosintéticos. 
f- pH 
La concentración de iones hidrógeno es muy importante para el crecimiento de 
los microorganismos. La mayoría de ellos se desarrollan mejor en medios con un pH 
neutro, aunque los hay que requieren medios más o menos ácidos. No se debe olvidar 
que la presencia de ácidos o bases en cantidades que no impiden el crecimiento 
bacteriano pueden sin embargo inhibirlo o incluso alterar sus procesos metabólicos 
normales. En general el rango óptimo de pH para la mayoría de las bacterias oscila 
entre 6,6 y 7,8 con pH óptimo de 7,4. 
g- Temperatura 
Los microorganismos mesófilos crecen de forma óptima a temperaturas entre 15 
y 43ºC. Otros como los psicrófilos crecen a 0ºC y los temófilos a 80ºC o incluso a 
temperaturas superiores (hipertemófilos). En líneas generales, los patógenos humanos 
crecen en rangos de temperatura mucho más cortos, alrededor de 37ºC, y los saprofítos 
tienen rangos más amplios. 
h- Esterilidad del medio 
Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estériles para evitar la 
aparición de formas de vida que puedan alterar, enmascarar o incluso impedir el 
crecimiento microbiano normal del o de los especímenes inoculados en dichos medios. 
El sistema clásico para esterilizar los medios de cultivo es el autoclave de Chamberland, 
el cual utiliza vapor de agua a presión como agente esterilizante. (15 libras de presión 
a 121ºC, durante 15 a 20 minutos) 
i.- Presión osmótica y fuerza iónica 
Aunque en menor grado, a veces, puede ser necesario controlar las condiciones 
de salinidad y presión osmótica del medio de cultivo 
7.- CLASIFICACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO 
Los medios de cultivo son una mezcla equilibrada de nutrientes que en 
concentraciones adecuadas y con condiciones físicas óptimas permiten un buen 
crecimiento de los microorganismos. Contienenuna base mineral; fuente de carbono, 
nitrógeno y azufre; atmósfera adecuada y los factores de crecimiento necesarios. Ellos 
pueden clasificarse en función a: 
7.1.- SEGÚN SU ORIGEN 
Los medios de cultivos pueden clasificarse en: 
a.- Naturales: 
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Son aquellos que existen como tales en la naturaleza, por ejemplo, agua, 
suero, papa, huevos, leche, sangre, tierra, etc. 
b.- Artificiales: 
Están compuestos de sustancias que son manipuladas por el hombre en el 
laboratorio. A los medios artificiales a su vez se los puede dividir en sintéticos 
y complejos. 
Sintético o químicamente definido: Medio del cual se conoce exactamente 
su composición química y las cantidades precisas de sus componentes; 
puede ser una simple solución de sales con una fuente de carbono o puede 
contener muchos compuestos orgánicos. 
Medio no sintético o complejo: es aquel del que se desconoce su 
composición química exacta; se trata básicamente de extractos de tejidos 
vegetales, animales o microbianos, cuya concentración no se conoce con 
exactitud y que proveen todos los nutrientes necesarios, como por ejemplo 
el caldo nutritivo. 
 
7.2.- ATENDIENDO A SU ESTADO FÍSICO O CONSISTENCIA: 
Líquidos: 
Semisólidos: Se preparan agregando a un medio líquido sustancias 
solidificantes, tales como la gelatina y el agar; este último es el más usado 
por tratarse de un polisacárido complejo, formado por moléculas de 
galactosa, que muy pocas bacterias son capaces de degradar. Los medios 
semisólidos se preparan agregando 2,5 a 3 gramos de agar por litro y son 
ampliamente utilizados para estudiar motilidad bacteriana. 
Sólidos: Se preparan agregando 13 a 15 gramos de agar por litro de medio 
7.3.- ATENDIENDO A SU UTILIDAD PRÁCTICA: 
a.- Medios Básicos Ordinarios o medios simples: 
En esta clase tenemos los medios como el caldo y el agar nutritivo, capaces 
de soportar el crecimiento de microorganismos que no ostentan 
requerimientos de cultivos especiales. Se utilizan con frecuencia para 
mantener cepas de laboratorio, como base para preparar medios más ricos 
o complejos, para el sub-cultivo de microorganismos a partir de colonias 
aisladas, etc. 
b.- Medios Enriquecidos: 
Aunque muchas bacterias desarrollan bien en medios de cultivos simples u 
ordinarios, algunas tienen requerimientos especiales, no siempre bien 
conocidos, que no son cubiertos por los medios ordinarios y, por ello, no 
desarrollan en esos medios. Se recurre entonces al uso de los llamados 
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“medios enriquecidos”, que son básicamente, medios de cultivo simples u 
ordinarios a los cuales se agrega sangre, suero, líquido ascítico, extracto de 
levadura o cualquier otro producto biológico, con el fin de aportar los factores 
de crecimiento requeridos por esos microorganismos llamados “exigentes”. 
Ejemplos de este tipo de medio son: el agar sangre, el agar chocolate, el 
caldo cerebro corazón más suero, etc. Cuando se trata de medios líquidos 
no existe dificultad para agregar al medio estéril las sustancias 
enriquecedoras necesarias, en las proporciones deseadas. Tratándose de 
medios de cultivo sólido se requiere fundir el medio base a 100ºC, esperar a 
que su temperatura descienda a 46-50ºC, aproximadamente, y luego, añadir 
la sustancia enriquecedora estéril, respetando rigurosas condiciones de 
asepsia. 
c.- Medios Selectivos: 
Son medios de cultivo que, por su composición, permiten el desarrollo de 
determinado microorganismo e inhibe el crecimiento de otros. Ejemplos de 
estos medios de cultivo selectivo son: 
Medio de Chapman, utilizado en el aislamiento y caracterización de 
miembros del género Staphylococcus y especialmente de la especie 
patógena Staphylococcus aureus. El poder selectivo de este medio reside 
en su alta (7,5%) concentración de cloruro de sodio, con relación a la de los 
medios ordinarios (0,5%), lo cual impide el desarrollo de la mayoría de las 
bacterias, pero permite el desarrollo de los Staphylococcus; de esa manera 
se facilita grandemente su aislamiento a partir de muestras poliinfectadas. 
Medio de Edwards, es un medio usado para aislamiento de miembros del 
género Streptococcus; este medio es, básicamente, un agar sangre, pero 
contiene cristal violeta que impide el desarrollo de los microorganismos Gram 
negativos y sales de talio, que inhibe el desarrollo de ciertas bacterias Gram 
positivas como los Staphylococcus. 
Medio de MacConkey, es un medio que contiene sales biliares, lactosa, rojo 
neutro y cristal violeta, además de las sustancias usuales. Las sales biliares 
impiden el desarrollo de la mayoría de las bacterias Gram positivas y el cristal 
violeta evita el desarrollo de ciertos gérmenes Gram negativos. El medio es 
recomendable para el aislamiento de enterobacterias patógenas. La 
presencia de lactosa en el medio y del rojo neutro como indicador de pH, 
permiten además una diferenciación inicial entre bacterias fermentadoras de 
la lactosa (E. coli y otras bacterias coliformes) y no fermentadoras de la 
lactosa (Salmonella sp., Shigella sp.) 
d.- Medios Diferenciales: 
Son medios de cultivo diseñados para estudiar características bioquímicas o 
enzimáticas, que nos permiten la identificación de las bacterias aisladas. 
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Existen muchos medios de cultivo diferenciales de uso frecuente; p. ej. El 
medio Kliger, medio citratado de Simmon, caldo nitratado, medios 
hidrocarbonados, caldo urea, medios de Clark y Lubs MR-VP (para pruebas 
de Rojo Metilo y Voges-Proskauer), etc. 
e.- Medios Especiales: 
Se trata de medios desarrollados con una finalidad específica, por ejemplo 
tenemos los medios de Lowestein-Jensen y Petragnani, diseñados para el 
aislamiento de bacilo tuberculoso humano o bovino. 
f.- Medios de Enriquecimiento: 
La mayoría de estos medios están basados en el mismo principio señalado 
para los medios selectivos; sin embargo, los medios de enriquecimiento no 
siempre permiten el aislamiento del microorganismo investigado en un solo 
paso, Ejemplos de este tipo de medio son el Caldo Selenito, el Caldo 
Tetrationato para enriquecimiento de Salmonella sp., a partir de muestras de 
heces y el agua peptonada alcalina para Vibrio cholerae. En ocasiones, el 
enriquecimiento de un determinado microorganismo se logra por 
incorporación de una determinada fuente de carbono usada preferentemente 
por el agente investigado, con lo cual se logra su multiplicación rápida y 
prevalencia en la población microbiana inoculada en el medio. 
g.- Medios de transporte: 
Se trata de medios diseñados especialmente para el transporte de muestras 
clínicas. Generalmente, son medios químicamente definidos, formulados 
para lograr que la población microbiana presente en una muestra que sufra 
pocas modificaciones, durante períodos que varían dependiendo del medio 
de transporte. Estos medios se caracterizan por no aportar materiales 
nutritivos, por lo que no se produce multiplicación microbiana, con lo cual la 
proporción de bacterias presentes en la muestra no se altera. Además, son 
medios tamponados, por lo que el pH se mantiene cercano a la neutralidad 
y, algunos, vienen incorporados con carbón, que absorbe sustancias tóxicas. 
Generalmente, son semisólidos y de bajo potencial de óxido reducción, por 
lo que pueden usarse también en caso de sospecharse microorganismos 
anaerobios. Ejemplos de estos medios son el medio de Stuart, el medio de 
Cary y Blair y el medio de Amies. En el mercado existen medios de transporte 
como el Transcult y el Culturette. 
 
 
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8.- CONSTITUYENTES HABITUALES DE LOS MEDIOS DE CULTIVO 
Los elementos citados a continuación, son los más frecuentemente usados en la 
preparaciónde los medios de cultivo, aunque pueden no ser los únicos e incluso alguno 
de ellos puede estar ausente de la preparación. 
 
a.- Agua destilada o desionizada. Libre de inhibidores del crecimiento. 
 
b.- Agar. El agar se utiliza como agente gelificante para dar solidez a los medios de 
cultivo. El componente dominante en el agar es un polisacárido, al que acompañan 
algunas impurezas y que se obtiene de ciertas algas marinas. Existe en rama o 
en polvo, se solubiliza en agua a ebullición (funde hacia los 98°C) y al enfriarse 
forma un gel inodoro e insípido (se gelifica alrededor de los 42°C), dependiendo 
de su grado de pureza, por lo que tiene la ventaja de ser sólido a la temperatura 
de incubación. Con la excepción de algunos microorganismos marinos, el agar no 
es empleado como nutriente. Para preparar un medio sólido se le agrega agar al 
12-18 %. Si se desea visualizar movilidad se usa agar blando se le agrega agar al 
3 %. 
 
c.- Extractos. Para su preparación, ciertos órganos o tejidos animales o vegetales 
(por ejemplo carne, hígado, semillas, etc.) son extraídos con agua y calor, y 
posteriormente concentrados hasta la forma final de pasta o polvo. Estos 
preparados deshidratados son frecuentemente empleados en la confección de 
medios de cultivo. Ejemplos: extracto de carne, de levadura, de malta, etc. En el 
caso del extracto de carne en polvo o pasta, provee sustancias nitrogenadas, 
minerales y vitaminas, mientras que el extracto de levaduras provee vitaminas del 
grupo B, nitrógeno y carbono. 
 
d.- Peptonas. Son mezclas complejas de compuestos orgánicos nitrogenados y sales 
minerales que carecen de identidad química definida; se obtienen por digestión 
enzimática o química de proteínas animales o vegetales (soja, carne, gelatina, 
caseína, etc.). Las peptonas son muy ricas en péptidos y aminoácidos, pero 
pueden ser deficientes en determinadas vitaminas y sales. Proveen proteosas, 
peptonas, polipéptidos y aminoácidos. 
 
e.- Fluidos Corporales. Sangre completa, sangre desfibrinada, plasma o suero 
sanguíneo son frecuentemente añadidos a los medios empleados para el cultivo 
de algunos patógenos. La sangre no puede ser esterilizada y debe, por tanto, ser 
obtenida en condiciones asépticas directamente de un animal sano. Los fluidos 
corporales no solamente contribuyen con factores de crecimiento, sino también 
con sustancias que neutralizan inhibidores del crecimiento de algunas bacterias. 
 
f.- Sistemas amortiguadores. Algunos componentes son incorporados al medio de 
cultivo para mantener el pH dentro del rango óptimo del crecimiento bacteriano. 
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Los microorganismos más comunes son neutrófilos (el pH óptimo para su 
crecimiento está próximo a la neutralidad), y sales como fosfatos bisódicos o 
bipotásicos, o sustancias como las peptonas, previenen una desviación del pH. 
 
g.- Indicadores de pH. Indicadores ácido- base se añaden a menudo a los medios 
de cultivo con objeto de detectar variaciones del pH. 
 
h.- Agentes reductores. Cisteína, tioglicolato y otros son agentes reductores que se 
añaden a los medios de cultivo para crear condiciones que permitan el desarrollo 
de los gérmenes microaerófilos o anaerobios. 
 
i.- Agentes selectivos. La adición de determinadas sustancias al medio de cultivo 
puede convertirlo en selectivo (ver más adelante, clasificación de los medios de 
cultivo). Por ejemplo, cristal violeta, sales biliares, azida sódica, telurito potásico, 
antibióticos, etc., a la concentración adecuada, actúan como agentes selectivos 
frente a determinados microorganismos. 
 
9.- P REPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO 
 
En la actualidad, la mayoría de los medios de cultivo se encuentran 
comercializados, normalmente bajo la forma de liofilizados que es preciso re-hidratar. 
En general, la preparación de un medio de cultivo se reduce simplemente a pesar la 
cantidad deseada del mismo y disolverla en agua destilada, siguiendo las instrucciones 
del fabricante y luego esterilizarlo. 
 
En caso que el medio de cultivo debamos hacerlo nosotros, la preparación de un 
medio de cultivo comienza por hacer un estudio de la fórmula que constituye una receta 
que deberá respetarse estrictamente. 
 
Primero se agrega agua destilada o desionizada a un recipiente, luego se van 
incorporando todos los ingredientes de la lista en el orden en el que se encuentran. 
Generalmente figura en primer término el compuesto que actúa como tampón, como 
puede ser el PO
4
H
2
K, que además provee fósforo y potasio. 
 
Es conveniente añadir todos los ingredientes en el orden indicado y disolverlos 
de a uno antes de agregar el siguiente. 
 
Al finalizar la preparación y una vez que ésta se enfríe, se debe verificar que el 
pH sea el adecuado. En caso de ser necesario se ajusta con CO
3
Na
2 
(1N) o HCl (1N). 
 
9.1.- EJEMPLOS DE PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO 
 
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MATERIALES: 
- Erlenmeyer 
- Pipetas de 10 ml 
- Tubos de ensayo con sus tapones 
- Gradillas 
- Tiras de pH o pHmetro 
- Reactivos correspondientes a cada fórmula 
- Balanza 
- Autoclave 
 
A.- CALDO NUTRITIVO (CALDO CARNE) 
Es el medio complejo más común para el cultivo de microorganismos. 
Fórmula: 
Peptona.................... 5 g 
Extracto de carne..... 3 g 
Agua c.s.p................. 1000 ml 
pH............................... 7,2 
 
Preparación: 
1) Colocar un volumen medido de agua destilada en un recipiente. 
2) Disolver los ingredientes de a uno y por orden. 
3) Llevar a ebullición agitando periódicamente con una varilla de vidrio. 
4) Completar el volumen hasta 1000 ml. 
5) Dejar enfriar y medir pH. Si hace falta corregir con HONa 1M. 
6) Colocar 10 ml del caldo en tubos de ensayo y volúmenes apropiados 
en frascos. 
7) Tapar, colocar capuchón de papel y esterilizar en autoclave 15 
minutos a 1 atm. 
 
B.- AGAR NUTRITIVO 
Fórmula: 
Agar........................... 20 g 
Caldo nutritivo........ 1000 ml 
 
Preparación: 
1) Colocar 1000 ml de caldo en un recipiente. 
2) Agregar el agar calentando a baño maría agitando hasta disolución 
total. 
3) Ajustar pH hasta 7,2. 
4) Llevar 10 ml a tubos de ensayo. 
5) Esterilizar. 
 
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La preparación de agar nutritivo no requiere usar caldo estéril, la esterilización 
se lleva a cabo una vez que se ha envasado el caldo agarizado. 
 
Para la preparación de tubos con agar inclinado o en pico de flauta (slant), se 
colocan 5 ml del agar en los tubos de ensayo, se tapan y esterilizan. Una vez fuera del 
autoclave, cuando están aún líquidos, se apoyan sobre la mesada con un cierto ángulo 
hasta que solidifiquen. 
 
Para la preparación de tubos con agar para punción, se colocan 5 ml del agar 
en los tubos de ensayo, se tapan y esterilizan En este caso, una vez que los tubos 
fueron retirados del autoclave se dejan solidificar en posición vertical. 
 
Para la preparación de capsulas de Petri con agar nutritivo se puede utilizar 
medio de cultivo recién esterilizado y todavía líquido, o bien medio solidificado y fundido 
a ebullición en Baño María. Se deja enfriar el agar hasta 45 ºC, luego se lo vuelca 
asépticamente en caja de Petri estéril, teniendo la precaución de flamear previamente 
la boca del tubo o recipiente a la llama del mechero. Se deja solidificar en posición 
horizontal y posteriormente se invierten las placas para almacenarlas en nevera. 
10.- SIEMBRA Y AISLAMIENTO BACTERIANO 
En la naturaleza los microorganismos se encuentran en comunidades más o 
menos complejas. Son diversos los procedimientos existentes para el estudio de los 
mismos que dependerán del tipo de microorganismo y del período de tiempo de 
conservación que se requiera. Paraello existen técnicas de siembra, conservación y 
mantenimiento de los cultivos microbianos. 
Una técnica esencial en Microbiología es la de obtención de cultivos puros, a partir de 
los cuales podemos realizar estudios sobre las propiedades de los microorganismos. 
Un cultivo puro es aquel que contiene una sola clase de microorganismo. Para poder 
obtenerlo es necesario concurrir a las técnicas conocidas como aislamiento. 
10.1.- SIEMBRA 
Sembrar una bacteria es colocarla en un medio de cultivo, elegido de acuerdo a 
las exigencias vitales del microorganismo, lo que permite su desarrollo y multiplicación, 
si se incuba en condiciones adecuadas y en un tiempo conveniente. Para ello una 
pequeña porción de cultivo o muestra, que se denomina inóculo se transfiere al medio 
con precauciones especiales de asepsia a fin de evitar la introducción de otros 
microorganismos ajenos al inóculo. 
El conjunto de pasos a efectuar para lograr una siembra correcta, se conoce como 
técnica aséptica. 
La toma del inoculo es simple, pero se requiere tener en cuenta lo siguiente: 
 Cultivo de microorganismos: Medios de cultivo y métodos de siembra 
14 
 
a. La siembra siempre debe realizarse al abrigo de las corrientes de aire (cerrar 
bien puertas y ventanas), con movimientos pausados, poco amplios, sin 
brusquedad y sin hablar. 
b. Coloque frente a usted el mechero y la preparación o muestra que contiene los 
microorganismos, así como el resto del material necesario (portaobjetos, tubos, 
placas). Todo ello ha de ser alcanzado con facilidad y sin tropiezos. 
c. Se debe trabajar a una distancia no mayor de 15 cm. de la llama de un mechero. 
d. El asa o aguja de siembra se esteriliza por llameado directo (flaméelo hasta que 
alcance un rojo incandescente) y antes de retirar el inóculo debe facilitarse su 
enfriamiento, a fin de evitar el deterioro del material a sembrar (enfríelo en la 
proximidad de la llama unos 10 segundos). 
e. Una vez realizada la siembra se esteriliza nuevamente el asa o aguja a la llama 
del mechero antes de depositarla sobre la mesada de trabajo. 
b- Nunca debe depositarse un tapón sobre la mesada o gradilla, pues estos 
elementos están cargados de microorganismos. 
c- Cuando esté destapado, mantener el tubo en la forma más horizontal posible 
para evitar que los microorganismos del ambiente, en su caída, tengan acceso 
al interior. 
a. Las bocas de los tubos de donde se toman los cultivos y la de aquellos a donde 
serán transferidos, deben pasarse ligeramente sobre la llama inmediatamente 
antes de que el asa o aguja sea introducida. También se debe flamear la boca 
del tubo antes de taparlo. Este procedimiento fija al vidrio los microorganismos 
que pueden estar en dicha boca y tiende a crear corrientes hacia afuera (el aire 
tiende a salir), disminuyendo así el riesgo de contaminación. 
b. Para retirar el inoculo o sembrar medios de cultivos en capsulas de Petri, 
coloque la placa invertida sobre la mesada de trabajo y levante la parte que 
contiene el medio de cultivo con los microorganismos. Llévela a la proximidad 
de la llama del mechero y tome el inoculo con el asa de siembra. Otro método 
permitido consiste en retirar el inoculo o sembrar, levantando la tapa solo lo 
suficiente para permitir la introducción del asa o aguja, para evitar que los 
microorganismos ambientales se depositen en la superficie del medio. 
c. Si la siembra se realiza con pipeta, ésta debe estar convenientemente 
preparada y esterilizada hasta el momento de su empleo. Una vez utilizada se 
descarta introduciéndola en una solución antiséptica. 
d. Transfiera el inoculo a otro medio de cultivo estéril, tomando las mismas 
precauciones en su manejo (flameando bocas de tubos, trabajando en la 
proximidad de la llama, etc.) 
La finalidad de una siembra puede ser la de realizar una transferencia o un 
aislamiento. La primera se efectúa con cultivos puros (una sola especie bacteriana), ya 
sea con el objeto de renovar el medio de cultivo para perpetuar la especie, o bien para 
conocer alguna de sus propiedades culturales o bioquímicas. El aislamiento, en cambio, 
 Cultivo de microorganismos: Medios de cultivo y métodos de siembra 
15 
 
se realiza a partir de un material que contiene una mezcla de especies bacterianas y su 
objeto es separarlas para obtener cultivos puros. 
10.2.- TOMA DEL INÓCULO 
Si la muestra proviene de un medio líquido, el inoculo se toma agitando el 
suavemente el asa dentro del mismo, quedando la muestra adherida por tensión 
superficial en el extremo del filamento del asa de siembra. 
Si el medio es sólido y se encuentra en superficie la muestra a sembrar (capsula 
de Petri), tome una pequeña porción de cultivo mediante un ligero roce con el asa de 
siembra. Si la muestra se encuentra en la profundidad del agar (tubo con agar en pico 
de flauta), hunda el filamento dentro del medio hasta tomar una pequeña porción de la 
misma. Flamee la boca del tubo antes de taparlo y colóquelo en el soporte necesario. 
10.3.- TRANSFERENCIA 
La técnica que se aplica depende de la consistencia de los medios de cultivo y del tipo 
de recipiente que los contiene. 
Se pueden presentar los siguientes casos: 
a. Siembra de medio líquido a medio líquido: El procedimiento se puede 
realizar con asa en anillo, aguja o pipeta y en tubos de ensayo, matraces 
o frascos. 
b. Siembra de medio sólido a medio líquido: El procedimiento se puede 
realizar con asa en anillo o aguja y en tubo de ensayo, matraces o frascos. 
c. Siembra de medio sólido a medio sólido: El procedimiento se puede 
realizar con asa o aguja y en tubo de ensayo, ya sea en superficie o en 
profundidad o en capsula de Petri, en superficie. 
d. Siembra de medio líquido a medio sólido: El procedimiento se puede 
realizar con asa en anillo, aguja o pipeta y en tubo de ensayo, ya sea en 
superficie o en profundidad o en capsula de Petri, ya sea en superficie o 
por homogenización. 
TÉCNICA DE TRANSFERENCIA EN TUBOS DE ENSAYO. 
TÉCNICA PARA MEDIO LÍQUIDO. 
Los dos tubos, el que contiene el medio de cultivo sin sembrar y el que 
contiene los microorganismos a transferir, se toman con una mano, con las 
bocas colocadas a la misma altura. 
Se sostienen con los dedos índice, medio y anular apoyándolos en el dedo 
meñique, y se los sujeta con el dedo pulgar muy cerca de la base para 
permitir la visualización de toda la superficie del cultivo. 
 Cultivo de microorganismos: Medios de cultivo y métodos de siembra 
16 
 
Con los dedos: pulgar e índice (como un lápiz) de la otra mano, se toma la 
pipeta estéril o el mango de Koll con su aguja o asa en anillo y se esteriliza. 
Se destapan los tubos con los dedos libres de la mano que sujeta el asa, de 
la siguiente manera: el tapón del tubo más alejado del operador (que es el 
que contiene la muestra) entre el dedo meñique y la palma de la mano; el 
tapón del tubo más cercano al operador (que contiene el medio de cultivo 
estéril) entre el meñique y el anular. 
Se flamean las bocas de los tubos, se toma el inoculo; se siembra; se 
flamean nuevamente las bocas de los mismos y se tapan respetando la 
procedencia de los tapones y se quema el asa. 
Como el inoculo procede de un medio líquido, antes de realizar la 
transferencia se debe agitar el tubo para poner en suspensión a los 
microorganismos que pudieran estar depositados. Si la siembra se realiza 
en medio líquido, se agita el tubo sembrado para distribuir homogéneamente 
el inoculo. 
Para realizar la agitación se toma el tubo cerca del extremo superior con los 
dedos índice y pulgar y se golpea suavemente la base del mismo sobre el 
dedo índice de la otra mano con una amplitud de 5 cm. Otra forma consiste 
en hacer rotar los tubos entre las palmas de las manos. 
TÉCNICAS PARA MEDIO SÓLIDO. 
Cuando el medio de cultivo a sembrar es sólido, se puede sembrar en 
superficie, en profundidad o en profundidad y superficie. 
a.- En superficie:Por estría: Introducir el asa en anillo o aguja en el tubo de agar inclinado 
hasta el fondo diluyendo el inoculo en el agua de condensación que se 
acumula en esa parte, luego mover el ansa suavemente sobre la 
superficie del agar con un movimiento en zig-zag ascendiendo desde el 
fondo hasta la parte superior del medio. 
Por trazo: Introducir el asa en anillo o aguja en el tubo de agar inclinado 
y trazar una línea de siembra desde la base del pico de flauta hasta el 
extremo superior, sin ejercer presión para que no se rompa el medio. 
b.- En profundidad: 
 
Por punción: El medio de cultivo que se emplea está solidificado en tubo 
en forma vertical y la siembra se realiza con aguja, la que se introduce con 
el inoculo rápidamente en el seno del medio y se retira de la misma forma. 
La punción se realiza en el centro del medio o excéntricamente. 
 Cultivo de microorganismos: Medios de cultivo y métodos de siembra 
17 
 
 
c.- En profundidad y superficie: 
 
Por punción y estría: Se utilizan para la siembra tubos con agar inclinado 
pero con mucho fondo. Se introduce la aguja en el tubo de agar inclinado, 
se punza el fondo, se retira y se realiza un trazo o estría en el pico de 
flauta. 
 
TÉCNICA DE TRANSFERENCIA EN CAJA DE PETRI. 
 
La siembra en capsula de Petri, puede hacerse: 
 
a.- En superficie. 
 
Por estría central: Se levanta la tapa lo suficiente como para permitir la 
introducción del asa con la carga de microorganismos, iniciándose la 
estría en el borde del medio más alejado del operador y se la extiende 
hasta llegar al centro de la placa, luego se gira ésta 180 º y se continúa 
realizando otra estría de la misma manera. Esta división evita el obstáculo 
del borde de la placa 
 
Por estría en cuadrantes: Se divide la caja en cuatro sectores y se 
siembra en estría cada uno de ellos, partiendo del borde de la caja hacia 
el centro. El cuadrante a sembrar debe ser el más alejado del operador y 
el inoculo en cada caso puede ser el mismo (la misma especie) o distinto 
(diferente especie) para cada cuadrante. 
 
Por diseminación con espátula de Drigalsky: Se deposita sobre el 
medio sólido contenido en la placa, una asada o una gota con pipeta del 
material a sembrar, que luego se extenderá por toda la superficie del 
medio con una espátula de DRIGALSKY. 
La espátula se introduce inmediatamente después de su uso en un 
recipiente para su esterilización en autoclave o en formaldehído al 5 %. 
Por diseminación con hisopo: Se sumerge en el caldo de cultivo, se 
escurre el exceso de líquido sobre la pared interior del tubo y se estrían 
ambas mitades de la capsula de Petri, partiendo de los bordes hacia el 
centro, luego se gira 90º y se estrían nuevamente ambas mitades, 
finalmente se gira 45º y se estrían ambas mitades. 
b.- Por homogeneización: 
Técnica de la siembra en tubo para volcar en placa: El inoculo se 
introduce con el ansa o pipeta en un tubo con el medio de cultivo fundido 
 Cultivo de microorganismos: Medios de cultivo y métodos de siembra 
18 
 
y enfriado a 45 ºC en cantidad suficiente para cubrir la placa de Petri. Se 
homogeniza por rotación y se vuelca en la placa previo flameado de la 
boca del tubo. 
Técnica del agar volcado: Se deposita el inoculo con pipeta en el centro 
de la caja de Petri y luego se vuelca sobre el mismo el medio de cultivo 
fundido y enfriado a 45ºC. Se homogeneiza por rotación para lo cual se le 
imprime a la caja movimientos circulares, en sentido horario y en sentido 
antihorario y movimientos rectilíneos, horizontales y verticales. 
 
Se debe tener en cuenta que de las cajas de Petri preparadas con medio 
de cultivo para sembrar, debe eliminarse el agua de sinéresis (condensación) 
antes de efectuar dicha operación. Para tal fin es aconsejable preparar las 
placas con 24 hs. de anticipación y dejarlas invertidas a temperatura 
ambiente. 
 
10.4.- AISLAMIENTO 
 
El objeto es obtener cultivos en estado puro, operación imprescindible y 
previa al estudio e identificación de una especie bacteriana. Se pueden realizar 
aislamientos por métodos generales y por métodos especiales. 
 
MÉTODOS GENERALES DE AISLAMIENTO. 
 
Estos métodos utilizan medios de cultivos sólidos en caja de Petri. 
 
Por diluciones sucesivas: Se homogeniza la muestra y se carga el asa por 
única vez. Luego se pasa el asa de un tubo a otro. Estos tubos contienen agar 
a 45 ºC. De esta manera el primer tubo contendrá mayor concentración de 
microorganismos que el último. Luego se pasa el contenido de los tubos a las 
cajas de Petri y de allí a los tubos con agar en pico de flauta. 
 
Por agotamiento en superficie en una sola caja: Es el método más utilizado. 
Se prepara una caja de Petri con el medio de cultivo a la que se le elimina el 
exceso de humedad según se indicó anteriormente. 
 
a. Se marca la parte exterior de la contratapa de acuerdo al esquema. 
b. Se carga el asa con la muestra 
c. Se deposita en un punto de la superficie del sector (I) cercano al 
borde, y se extiende en el mismo con estrías próximas y paralelas. A 
continuación se quema el asa y se deja enfriar. 
 Cultivo de microorganismos: Medios de cultivo y métodos de siembra 
19 
 
d. Se gira la caja 90 º, se pasa el asa una vez sobre la última estría de 
la región ya inoculada y se arrastra al sector (II) efectuando sobre él 
la siembra sin superponer las estrías con las realizadas antes. 
e. Se quema nuevamente el asa y de la misma manera se estría el 
sector (III). 
f. Luego de quemar el asa, en el sector (IV) se realizan estrías con el 
material que se arrastra de (III), más amplias y que terminan en el 
centro de la caja. 
Cualquiera sea el método empleado, si se realiza correctamente, podrán 
obtenerse colonias aisladas. Estas pueden pertenecer a distintas especies 
bacterianas, las que generalmente se diferencian macroscópicamente. 
 
En general cada colonia se considera formada a partir de una célula 
bacteriana, aunque esto no es del todo cierto pues puede darse el caso de que 
dos o más células den origen a una colonia. Si todas pertenecen a una misma 
especie, la colonia resultante será pura. Caso contrario, la finalidad del trabajo 
no se habrá cumplido, no lográndose el aislamiento. 
MÉTODOS ESPECIALES DE AISLAMIENTO. 
Métodos derivados de las propiedades de las bacterias: Consisten en hacer 
desarrollar la mezcla bacteriana, en un medio de cultivo especial, donde una 
especie puede dar lugar a colonias de un color que la identifiquen (ya sea por 
cambios de pH o por precipitación de elementos del medio). Un ejemplo, es el 
aislamiento en el llamado agar- lactosa- verde- brillante- bilis, donde las 
bacterias coliformes dan colonias color rojo intenso en el centro con un halo 
rosado que destacan del fondo azul del medio. 
Métodos biofísicos: Se basan en el empleo de condiciones físicas 
determinadas que afectan a ciertos microorganismos y no a otros. 
a) Empleo de temperaturas disgenésicas: La mayoría de las bacterias 
desarrollan bien a 37ªC. Sin embargo hay especies que lo hacen hasta 40 
ºC -42ªC y aún más, otras por debajo de 35 ªC. Estas características se 
pueden usar para la separación de especies. 
b) Termorresistencia de las bacterias esporuladas: Los esporos de las 
bacterias son formas de resistencia que toleran temperaturas que resultan 
letales para las formas vegetativas. Este comportamiento se aprovecha 
para la separación de las especies que tienen la capacidad de esporular. 
c) Movilidad del microorganismo: Las bacterias móviles desarrollan en 
gran parte de la superficie del medio, mientras que las inmóviles lo hacen 
solo en el punto de siembra. 
 Cultivo de microorganismos: Medios de cultivo y métodos de siembra 
20 
 
Métodos biológicos: Estos métodos utilizan la propiedad que tienen ciertos 
animales de laboratorio de ser receptivos a algunos microorganismos. 
 
 
CARACTERÍSTICAS DE CULTIVO:OBSERVACIÓN, DESCRIPICIÓN E INTERPRETACIÓN 
DE LOS CULTIVOS 
 
MORFOLOGÍA COLONIAL Y CARACTERÍSTICAS FENOTÍPICAS 
DE LOS MICROORGANISMOS 
 
I. OBJETIVO 
 
1. Definir la morfología colonial de los microorganismos cultivados por sus 
características de tamaño, forma, color, producción de pigmento y de hemólisis 
mediante examen visual. 
2. Describir los medios de cultivo rutinarios utilizados en el diagnostico 
microbiológico de muestras clínicas. (Agar sangre, Agar McConkey y Agar 
manitol salado). 
3. Describir las características de crecimiento de los microorganismos en Agar 
Sangre, Agar McConkey y Agar Manitol Salado). 
4. Reconocer como separar una mezcla de microorganismos por la técnica de 
siembra de dilución por estría en placa de agar para obtener un cultivo axénico 
o puro. 
 
 
II. INTRODUCCIÓN 
 
La evaluación de las características macroscópicas de las colonias se lleva a 
cabo con el examen visual del desarrollo en la superficie de las placas de agar. 
 
La inspección de los cultivos se realiza sosteniendo la placa con una mano y 
observando la superficie del agar para comprobar la presencia de desarrollo bacteriano. 
Se debe estudiar con cuidado cada placa debido a que las bacterias aisladas 
inicialmente a partir de muestras, constituyen a menudo cultivos mixtos y puede haber 
una gran variedad de colonias de diversos tipos. 
 
Si se toma un asa bacteriológica cargada con una muestra que contenga 
bacterias y se van haciendo estrías de ésta sobre una placa de agar nutritivo de tal 
 Cultivo de microorganismos: Medios de cultivo y métodos de siembra 
21 
 
manera que el material se vaya “diluyendo” sobre la superficie (Fig. 12.1), llegará un 
momento en que las bacterias depositadas en la estría estén bien separadas unas de 
otras, reproduciéndose cada una en progresión geométrica (1, 2, 4, 8, 16, 32, 64, etc.). 
 
Dependiendo del tiempo de generación, que varía según la especie bacteriana, 
después de cierto tiempo, cada una se habrá multiplicado muchas veces, formando 
sobre la superficie del medio un pequeño promontorio constituido por células 
bacterianas llamado Colonia, que se obtiene generalmente en unas 24-48 horas. 
 
Las colonias puntiformes constituidas por bacterias de desarrollo lento, pueden 
pasar inadvertidas entre las de mayor tamaño, principalmente si hay una tendencia a la 
dispersión del desarrollo por toda la superficie de la placa. 
 
Durante el examen las placas se deben inclinar en distintas direcciones con 
iluminación brillante directa, de modo que la luz sea reflejada desde diversos ángulos. 
 
En algunos casos, se utiliza una lupa o un microscopio de disección para la mejor 
detección de colonias minúsculas o inmaduras y así observar mejor sus características 
en el agar. 
 
Las colonias de cada especie bacteriana son diferentes ya sea en tamaño, color, 
consistencia etc., y pueden ser diferenciadas sobre estas bases. 
Cada colonia aislada está constituida de un solo tipo de bacterias, ya que se 
supone que es la descendencia de una sola célula y por tanto, un cultivo puro. 
Para estudiar las características físicas, químicas, fisiológicas, etc., de una 
bacteria, se necesita que ésta sea aislada en cultivo puro y el aislamiento en cápsula 
de Petri es el primer paso para ello, siendo el segundo paso la siembra de una porción 
de una colonia en un medio de cultivo en tubo, verificando su pureza después de la 
incubación apropiada, mediante observación al microscopio. 
 
III. MORFOLOGÍA COLONIAL 
 
La morfología de las colonias es importante por lo anteriormente expuesto y debe 
familiarizarse el alumno con ella. La terminología mencionada a continuación sobre 
algunas de las características más constantes de una colonia bacteriana es muy útil: 
 
FORMA: Punt iforme, circular, irregular, alargada, fusiforme, filamentosa, 
rizoide, etc. 
TAMAÑO: Estimar el diámetro en mm. 
SUPERFICIE: Lisa, rugosa, cerebriforme, en anillos concéntricos, etc. 
 Cultivo de microorganismos: Medios de cultivo y métodos de siembra 
22 
 
SUPERFICIE (LUZ REFLEJADA): Brillante, mate, etc. 
ELEVACION: Aplanada, elevada, pulvinada, convexa, umbonada, umblicada, 
etc. 
BORDE O MARGEN: Continuo, ondulado, lobulado, erosionado, festoneado, 
filamentoso, rizado, aserrado, etc. 
ESTRUCTURA INTERNA: Amorfa o granulosa. 
COLOR: Según sea observado por la luz reflejada o por la luz transmitida, puede 
ser de color blanco, amarillo, rojo ladrillo, anaranjado, etc. 
DENSIDAD: Transparente, opaca, translucida, etc. 
CONSISTENCIA: Dura, viscosa, butirosa, membranosa, gelatinosa, mucosa, 
quebradiza, etc. Usar el asa bacteriológica para determinar la consistencia. 
 
 
 
 Cultivo de microorganismos: Medios de cultivo y métodos de siembra 
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 Cultivo de microorganismos: Medios de cultivo y métodos de siembra 
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 Cultivo de microorganismos: Medios de cultivo y métodos de siembra 
25 
 
IV. RE ACCIONES EN MEDIOS DE AGAR, USADOS EN LA IDENTIFICACIÓN DE 
BACTERIAS 
1.- Hemólisis en agar sangre (se pueden distinguir tres tipos de hemólisis): 
• Alfa: aclaramiento parcial de la sangre alrededor de las colonias, con 
coloración verde del medio. 
• Beta: zona de aclaramiento completa de la sangre alrededor de las colonias, 
debida a la lisis de los eritrocitos. 
• Gamma: no hay cambio en el medio que rodea a la colonia, no hay lisis de 
los eritrocitos. 
• Doble zona: halo de lisis completa inmediatamente alrededor de las colonias, 
con una segunda zona de hemólisis parcial ubicada en la periferia. 
 
2.- Producción de pigmentos en medios de agar: 
• Pigmentos hidrosolubles que colorean el medio. 
• Piocianinas. 
• Pigmentos fluorocrómicos (fluoresceína). 
• Pigmentos no difusibles, confinados a las colonias. 
 
3.- Cambios en medios diferenciales: en los medios diferenciales se incluyen 
diversos colorantes, indicadores de pH y otros componentes, que actúan 
como indicadores de las actividades enzimáticas y ayudan a identificar las 
bacterias aisladas, por ejemplo, Agar McConkey y Manitol Sal Agar, 
 
4.- Olor: Si bien son difíciles de describir específicamente los olores producidos 
por acción de ciertas bacterias, tanto en medios sólidos como líquidos, éstos 
pueden ser útiles para la identificación tentativa de los microorganismos, 
ejemplos: 
 
 Pseudomonas spp. Zumo de uvas 
 Proteus spp. Chocolate quemado 
 Streptomyces spp. Sótano enmohecido 
 Clostridium spp. Fétido, nauseabundo 
 
Evaluando las características descritas de las colonias y la acción sobre los 
medios, se puede realizar una identificación preliminar de las bacterias aisladas por 
cultivo primario. Dichas características son útiles en la selección de otros medios y 
pruebas diferenciales apropiadas para completar la identificación de los aislamientos 
una vez obtenidos los cultivos puros o axénicos. 
 
 Cultivo de microorganismos: Medios de cultivo y métodos de siembra 
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MEDIOS PARA AISLAMIENTO PRIMARIO 
 
Agar McConkey 
Es un medio diferencial utilizado para la detección, aislamiento y enumeración 
de bacterias coliformes y patógenas intestinales en agua, productos lácteos y muestras 
biológicas. Su acción diferencial radica en que las bacterias con la capacidad de 
fermentar la lactosa provocan un descenso de pH, junto con una absorción del indicador 
de pH (colorante), surgiendo en la colonia el color rojo. Las colonias de bacterias que 
no fermentan la lactosa quedan incoloras. 
En cuanto a su composición por litro observamos 17 g de pancreático digestivo 
de gelatina; 1.5 g de pancreático digestivo de caseína, 1.5 de peptona de tejido animal; 
10 g de lactosa; 1.5 g de sales biliares; 5 g de cloruro Sódico; 0.03 g de rojo Neutro; 
0.001g de cristal Violeta; 13.5 g de agar; y un pH de 7.1 (+ - 0.2º a 25º) 
 
Agar Nutritivo 
 
 Es un medio con fines generales para la siembra y el crecimiento de la mayoría 
de los microorganismos poco exigentes. Su composición esta a base de 3 g de extractode Carne de buey, 5 g de peptona trípsica de gelatina, 15 g de agar, y cloruro sódico, 
glucosa y agua destilada hasta 1000 ml 
 
Agar Manitol Sal 
Es un medio elegido para la detección de Staphylococcus patógenos en 
muestras de alimentos y muestras clínicas. En su composición observamos extracto de 
carne de 1g, peptona trípsica de caseína de 5g, peptona de carne de 5g, cloruro sódico 
de 75g, D-manitol de 15g, rojo fenol de 25g y agar de 15g. 
 
Agar Sangre 
Medio de cultivo con fines generales para una gran cantidad de microorganismos 
circunscribiendo los exigentes. Con el añadido de sangre, viene bien en el empleo de 
las reacciones hemolíticas. Este medio está libre de azucares reductores. En su 
composición por litro se le observa 15 g de digestivo pancreático, 5 g de peptona de 
soja, 5 de cloruro sódico y 15 g de agar 
 Cultivo de microorganismos: Medios de cultivo y métodos de siembra 
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