Atividade de Eletroforese, alguém consegue me ajudar?

Áreas como a da ciência forense, de testes diagnósticos e de pesquisa biomédica básica empregam, para fins variados, métodos de separação de macromoléculas como DNA, RNA e proteínas de acordo com as suas propriedades. Essa separação pode ser uma etapa necessária para uma série de outras técnicas de biologia molecular. A eletroforese é um dos métodos de separação de macromoléculas mais utilizados: ela tira proveito da carga líquida presente em moléculas biológicas para que, quando aplicado um campo elétrico, essas moléculas migrem com velocidade proporcional a determinadas características químicas e moleculares.

No laboratório em que trabalha, você precisa analisar fragmentos de DNA de amostras de pacientes para genotipagem. As variantes do gene de interesse apresentam inserções de diferentes extensões de pares de bases (pb) na região codificadora. Para analisá-las, o DNA foi clivado em regiões específicas de forma que:

- A variante 1 dá origem a um fragmento de 102 pb.

- A variante 2 dá origem a um fragmento de 110 pb.

- A variante 3 dá origem a um fragmento de 128 pb.

- A variante 4 dá origem a um fragmento de 145 pb.

Sendo assim, você precisa separar por eletroforese os fragmentos das amostras dos pacientes na faixa de 100 a 150 pb com resolução suficiente para identificar as quatro bandas distintas relativas às quatro variantes do gene.

Para isso, você testa as diferentes matrizes de migração disponíveis, os géis de agarose e de poliacrilamida, em uma eletroforese de fragmentos de DNA padrão, com comprimentos definidos de 50 a 500 pb.

Após 1 hora de eletroforese em uma diferença de potencial fixa, você tem o seguinte resultado de bandas nos géis testados:

Resultado da eletroforese de fragmentos de DNA com tamanho molecular padrão sob diferentes condições de gel: agarose 1%, agarose 2%, agarose 3% e poliacrilamida 10%.

Em todos os casos, a eletroforese foi realizada durante 1 hora, com o mesmo padrão de DNA (o número de pares de bases das bandas-referência está indicado à direita dos géis). O sentido da migração é de cima para baixo, como indicado.

Com base nisso, quais estratégias você poderia adotar para analisar os fragmentos na faixa de 100 a 150 pb? Explique os seguintes questionamentos:

a) Qual opção de gel oferece a melhor resolução nessas condições? Agarose 1%, 2%, 3% ou poliacrilamida 10%?

b) Quais alterações você poderia fazer no tempo de eletroforese para tentar utilizar as demais opções de gel?