A coleta do Papanicolau é feita utilizando a espátula de Ayre e a escova endocervical. A espátula de Ayre possui uma extremidade fenestrada que é adaptada ao orifício cervical externo, realizando uma rotação de 360º para raspar a junção escamocolunar (JEC). Já a escova endocervical é introduzida nos primeiros 2 cm do canal cervical e rotacionada várias vezes. Em ambas as modalidades de coleta, o material coletado deve ser colocado de forma tênue e contínua em toda a extensão da lâmina, sendo imediatamente fixado com um fixador citológico à base de polietilenoglicol. É importante tomar cuidado para não aplicar o fixador muito próximo da lâmina, pois isso pode resultar em uma lavagem das células ao invés de sua fixação.
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