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Protocolo: 1) Pipetar 300 µl de sangue total em um microtubo; 2) Adicionar 900 µl do reagente Cell Lysis solution; 3) Misturar por inversão lentame...

Protocolo: 1) Pipetar 300 µl de sangue total em um microtubo; 2) Adicionar 900 µl do reagente Cell Lysis solution; 3) Misturar por inversão lentamente 10 vezes; 4) Adicionar 3 µl de Rnase; 5) Incubar por 10 minutos a 37 °C; 6) Centrifugar a 14 000 g por 20 segundos; 7) Descartar o sobrenadante; 8) Vortexar o pellet; 9) Adicionar 300 µl do reagente Nucleic Lysis solution; 10) Misturar por inversão lentamente 10 vezes; 11) Adicionar 100 µl o reagente precipitation solution; 12) Vortexar por 20 segundos; 13) Centrifugar a 14 000 g por 3 minutos; 14) Transferir o sobrenadante para um novo microtubo; 15) Adicionar 300 µl de isopropanol; 16) Misturar por inversão 5 vezes; 17) Incubar a -20°C durante 10 minutos; 18) Centrifugar 14 000 g por 1 minuto; 19) Descartar o sobrenadante; 20) Adicionar 300 µl solução de álcool 70%; 21) Centrifugar 14 000 g por 1 minuto; 22) Descartar o sobrenadante e secar o microtubo em estufa a 37°C; 23) Adicionar 50 µl do reagente DNA Rehydration solution; 24) Incubar a 37 °C por 24 horas; Analisando os passos acima, referente a um protocolo de extração de DNA total com Kit comercial, responda a seguinte questão: a) Considerando que o processo de extração de DNA possui 4 principais etapas (Lise celular, separação de compostos orgânicos e proteínas, precipitação de DNA e eluição), indique no protocolo quais passos referem-se a cada etapa.

Respostas

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De acordo com o protocolo apresentado, os passos que correspondem a cada etapa da extração de DNA são: 1. Lise celular: Passos 1 a 6 2. Separação de compostos orgânicos e proteínas: Passos 7 a 9 3. Precipitação de DNA: Passos 10 a 18 4. Eluição: Passos 19 a 24 Portanto, os passos 1 a 6 correspondem à lise celular, os passos 7 a 9 correspondem à separação de compostos orgânicos e proteínas, os passos 10 a 18 correspondem à precipitação de DNA e os passos 19 a 24 correspondem à eluição.

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