A ordem correta de colocação dos reagentes na técnica de ELISA indireto é: I- Antígeno conhecido. III- Soro de paciente. IV- Anticorpo secundário. II- Substrato. O antígeno conhecido é fixado em uma placa, em seguida, o soro do paciente é adicionado, se houver anticorpos específicos no soro, eles se ligarão ao antígeno. Depois, o anticorpo secundário é adicionado, que se liga aos anticorpos do paciente. Por fim, o substrato é adicionado, que reage com o anticorpo secundário e produz um sinal detectável.
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