Você está realizando um experimento com amostras de fígado em seu laboratório. Neste experimento, você está interessado em saber qual a contribuição da enzima citosólica álcool-desidrogenase (ADH), do sistema microssomal de oxidação do etanol (MEOS – do inglês microsomal ethanol oxidizing system), e da enzima peroxissomal catalase, sobre o metabolismo do etanol (oxidação até acetaldeído).

Na primeira etapa do experimento você processou sua amostra de forma a separá-las (fracionamento celular) em três preparados enriquecidos com:

1.Peroxissomas

2.Microssomas

3.Enzimas citosólica (fração citosólica)

Na segunda etapa do experimento você separa cada uma das frações em dois tubos (tubos A e B), e adiciona em cada tubo uma enzima (enzima X) que degrada rapidamente as moléculas de NAD e NADP presentes nas amostras. Dois minutos depois, você bloqueia a reação da enzima X e, em seguida, adiciona em cada tubo os seguintes reagentes:

Tubos A - NAD+ e NADH (razão [NAD+]/[NADH] elevada favorecendo a redução do NAD+), e etanol.

Tubos B - NADPH e NADP+ (razão [NADPH]/[NADP+] elevada favorecendo a oxidação do NADPH), e etanol.

A leitura dos resultados foi obtida em tempo real (por 30 minutos) através de espectrofotometria, com leitura de absorbância a 340 nm. Lembre-se que os nucleotídeos reduzidos (NADH e NADPH) absorvem luz a 340 nm, mas as formas oxidadas (NAD+ e NADP+) não.

Explique por que a absorbância a 340 nm diminuiu na fração microssomal (Tubo B), aumentou na fração citosólica (Tubo A), mas não se alterou nos demais tubos.