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[Laboratório Virtual - RT-PCR] As variações da técnica de PCR incluem a RT-PCR como método valioso para inúmeros fins científicos. O ensaio de RT-PCR permite que toda a análise após a amplificação tenha como origem uma molécula de RNA. Isso se torna importante para a detecção de infecções virais, assim como para a identificação e quantificação de RNAs mensageiros de um determinado tecido, fornecendo informações valiosas a respeito da expressão de um determinado gene. Sobre essa técnica, analise as sentenças a seguir:
I- A RT-PCR utiliza um pequeno oligonucleotídeo de fita simples com 18 a 20 timinas.
II- Podem-se utilizar iniciadores ou random primers (iniciadores aleatórios) para servirem de iniciação para a ação da RT para todos os tipos de RNA.
III- Para a realização da técnica de RT-PCR, inicialmente há a necessidade de extrair os RNAs das células e/ou tecidos na amostra biológica.
Assinale a alternativa CORRETA:

A Somente a sentença III está correta.
B Somente a sentença I está correta.
C As sentenças I, II e III estão corretas.
D Somente a sentença II está correta.

Perguntas sobre Metodologia Científica

há 2 anos

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Avaliação Final (Objetiva) - Individual hj

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ano passado

Vamos analisar cada uma das sentenças: I- A RT-PCR utiliza um pequeno oligonucleotídeo de fita simples com 18 a 20 timinas. Falso. A RT-PCR utiliza iniciadores que podem ser de diferentes sequências, e não necessariamente um oligonucleotídeo com 18 a 20 timinas. A quantidade de timinas não é uma característica padrão para todos os iniciadores. II- Podem-se utilizar iniciadores ou random primers (iniciadores aleatórios) para servirem de iniciação para a ação da RT para todos os tipos de RNA. Verdadeiro. Na RT-PCR, é possível usar tanto iniciadores específicos quanto primers aleatórios para a transcrição reversa de RNA. III- Para a realização da técnica de RT-PCR, inicialmente há a necessidade de extrair os RNAs das células e/ou tecidos na amostra biológica. Verdadeiro. A extração de RNA é um passo fundamental antes de realizar a RT-PCR. Com base na análise, a única sentença incorreta é a I. Portanto, as sentenças II e III estão corretas. A alternativa correta é: A Somente a sentença III está correta.

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há 2 anos

Vamos analisar cada afirmativa: I- A RT-PCR utiliza um pequeno oligonucleotídeo de fita simples com 18 a 20 timinas. Falso, na técnica de RT-PCR, o oligonucleotídeo utilizado é uma sequência complementar ao RNA alvo, não necessariamente com 18 a 20 timinas. II- Podem-se utilizar iniciadores ou random primers (iniciadores aleatórios) para servirem de iniciação para a ação da RT para todos os tipos de RNA. Verdadeiro, tanto iniciadores específicos quanto random primers podem ser utilizados na RT-PCR para iniciar a transcrição reversa de todos os tipos de RNA. III- Para a realização da técnica de RT-PCR, inicialmente há a necessidade de extrair os RNAs das células e/ou tecidos na amostra biológica. Verdadeiro, a extração de RNA é um passo fundamental na preparação da amostra para a técnica de RT-PCR. Com base nas análises, as sentenças corretas são a II e III. Portanto, a alternativa correta que contém todas as sentenças verdadeiras é: C) As sentenças I, II e III estão corretas.

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A escolha do gel para a técnica de eletroforese deve-se dar através do tamanho da molécula a ser isolada e do objetivo do isolamento. Com base nas matrizes de agarose e poliacrilamida para a técnica de eletroforese em gel, analise as sentenças a seguir:
I- A poliacrilamida pode separar fragmentos de DNA com até mesmo uma única base nitrogenada de diferença.
II- A agarose, apresenta menor resolução, ou seja, cada banda presente no gel, representa um agrupamento de moléculas de tamanho semelhantes.
III- No gel de poliacrilamida, uma menor faixa de tamanho das moléculas pode se movimentar, enquanto fragmentos maiores de DNA podem migrar facilmente no gel de agarose.
Assinale a alternativa CORRETA:

A Somente a sentença III está correta.
B Somente a sentença II está correta.
C Somente a sentença I está correta.
D As sentenças I, II e III estão corretas.

O objetivo primário dos testes pré-natais e neonatais é a investigação de doenças ou condições tratáveis, cuja detecção precoce contribua para o aumento da eficácia do tratamento e, consequentemente, da qualidade de vida do paciente. Sobre o exposto, avalie as asserções a seguir e a relação proposta entre elas:
I- A aplicação de testes pré-natais e neonatais é uma ferramenta importante, pois, com eles, diversas doenças podem ser detectadas, inclusive, antes de apresentarem seus primeiros sintomas clínicos.
PORQUE
II- Uma série de doenças e condições pode representar potencial risco à sobrevivência e/ou ao desenvolvimento de um feto ou recém-nascido.
Assinale a alternativa CORRETA:

A As asserções I e II são proposições verdadeiras, mas a II não é uma justificativa da I.
B A asserção I é uma proposição falsa, e a II é uma proposição verdadeira.
C As asserções I e II são proposições verdadeiras, e a II é uma justificativa da I.
D As asserções I e II são proposições falsas.

[Laboratório Virtual - Hibridização] A técnica de FISH baseia-se no uso de uma sequência de bases nitrogenadas (a qual chamamos de sonda ou, em inglês, probe), que é complementar ao DNA-alvo que se pretende analisar. Considerando essa técnica, analise as sentenças a seguir:
I- A hibridização ocorre com o uso de sondas com sequências conhecidas de nucleotídeos, que são complementares ao DNA analisado.
II- A técnica de hibridização só é possível através da técnica de FISH, já que métodos como CGH utilizam como base a PCR.
III- A hibridização por FISH utiliza sondas com corantes fluorescentes, que indicam a presença ou a ausência de determinada mutação.
Assinale a alternativa CORRETA:

A As sentenças I e III estão corretas.
B As sentenças I e II estão corretas.
C Somente a sentença III está correta.
D As sentenças II e III estão corretas.

O método de coleta utilizado no teste do pezinho, em que somente uma pequena quantidade de amostra em papel-filtro é coletada, associado à grande vantagem do diagnóstico precoce de doenças potencialmente graves e ao tratamento também precoce, com significativa melhora na condição do paciente, alavancou a descoberta e implementação de novos testes baseados em uma extensa gama de técnicas e metodologias de avaliação que pudessem ser incluídas na triagem pré-natal. Com base no teste do pezinho, também conhecido como teste da triagem neonatal, analise as sentenças a seguir:
I- A triagem Neonatal é ofertada de forma gratuita em inúmeros países, sendo que cada país determina quais testes serão oferecidos. No entanto, laboratórios privados disponibilizam testes ampliados para mais de cem doenças ou condições.
II- No Brasil, a triagem neonatal é realiza para 6 doenças, sendo elas a fenilcetonúria, a deficiência da biotinidase, a anemia falciforme, a hiperplasia adrenal congênita, o hipotireoidismo congênito e a fibrose cística.
III- É importante ressaltar que muitos dos resultados obtidos por esses testes indicam a possibilidade da doença em investigação, mas não o diagnóstico em si, embora os testes sejam bastante específicos.
Assinale a alternativa CORRETA:

A Somente a sentença III está correta.
B As sentenças I, II e III estão corretas.
C Somente a sentença II está correta.
D Somente a sentença I está correta.

Por meio do Projeto Genoma Humano, criou-se dois grandes grupos de trabalho independentes, formados por 5.000 cientistas em um consórcio público e da iniciativa privada da empresa Celera Genomics, respectivamente. O intuito foi patentear os genes sequenciados. Com base nas técnicas utilizadas para o sequenciamento, analise as sentenças a seguir
I- O shotgun hierárquico sequenciava através da fragmentação do DNA total, que era clonado a partir de diferentes tamanhos de fragmentos de 2 mil, 10 mil e 130 mil pares de base.
II- O shotgun hierárquico utilizava como vetor plasmídeos bacterianos comuns, a fim de sequenciar diferentes tamanhos de fragmentos do genoma completo.
III- O shotgun de genoma inteiro formava três bibliotecas de DNA, com diferentes tamanhos de fragmentos.
Assinale a alternativa CORRETA:

A Somente a sentença III está correta.
B Somente a sentença II está correta.
C As sentenças I e II estão corretas.
D As sentenças I e III estão corretas.

Embora popularmente conhecido como teste de paternidade em virtude da sua maior aplicação para a confirmação de paternidade, este teste pode também ser aplicado para a determinação de maternidade. Considerando que cada indivíduo recebe 50% do seu DNA da sua mãe e os outros 50% do seu pai, por meio da avaliação do seu material genético com o do(a) suspeito(a) pai ou mãe, é possível confirmar com uma segurança bastante elevada, próxima a 100%, a suspeita em questão. De acordo com o teste de paternidade, ou teste de DNA, classifique V para as sentenças verdadeiras e F para as falsas:
( ) A técnica aplicada é o sequenciamento NGS, pois diversos fragmentos são amplificados simultaneamente. Após a amplificação, o material é submetido à eletroforese e o padrão de bandas apresentado para cada STR na amostra do filho é comparado com o padrão de bandas do pai.
( ) São avaliadas dezenas de variações, sendo comumente utilizados os polimorfismos do tipo STR, conhecidos como microssatélites, que quando comparada com as regiões do DNA que contenham esses marcadores, espera-se que o padrão de repetição em cada um dos cromossomos homólogos seja herdado dos pais.
( ) Além do DNA do suposto pai, utiliza-se o DNA proveniente da mãe, pois, assim, pode-se identificar a parte do conteúdo genético do filho herdado da mãe, simplificando a comparação com o suposto pai e tornando o resultado ainda mais confiável.
Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA:

A F - F - V.
B F - F - F.
C F - V - V.
D V - F - V.

A respeito das etapas para do método da transcriptoma RNA-seq, ordene os itens a seguir:
I- Isolar e fragmentar o RNA a ser sequenciado e convertê-lo em cDNA.
II- Fragmentar as moléculas por ação de enzimas de restrição, sonicação ou nebulização, formando fragmentos que serão ligados a adaptadores (pequenas sequências de nucleotídeos que indicam onde o sequenciamento deve ser iniciado em cada molécula).
III- Aplicar métodos de sequenciamento para sequenciar pequenas porções, compostas por 30 a 200 pb (pares de bases), de cada um dos fragmentos.

A) I - II - III.
B) II - III - I.
C) II - I - III.
D) I - III - II.

Sobre as técnicas de bibliotecas de DNA e cDNA, associe os itens, utilizando o código a seguir:
I- Biblioteca de cDNA.
II- Biblioteca de DNA.
III- Hibridização em colônia.

( ) Técnica que detecta os fragmentos do DNA de interesse com sondas específicas em meio de cultivo sólido.
( ) Clonagem de fragmentos aleatórios do DNA, permitindo a sua identificação, isolamento e sequenciamento do genoma.
( ) Clonagem de mRNAs, em que cada célula/tecido pode originar uma biblioteca diferente, considerando o padrão de expressão gênica específico, relacionado sempre a sua função.

A) I - III - II.
B) I - II - III.
C) II - I - III.
D) III - II - I.

Mitocôndrias são organelas citoplasmáticas responsáveis pela produção de energia química, em forma de adenosina trifosfato (ATP), a partir de nutrientes como a glicose, por exemplo. As doenças que afetam essas organelas apresentam variação de condições clínicas associadas, as quais, de maneira geral, envolvem o prejuízo na produção energética mitocondrial. De acordo com as doenças que afetam a função mitocondrial, classifique V para as sentenças verdadeiras e F para as falsas:
( ) Mutações diretas no DNA mitocondrial podem ser transmitidas somente através da herança materna, para ambos os sexos.
( ) O DNA mitocondrial pode ser mutado pelo processo de recombinação, sendo distribuídas de modo uniforme no desenvolvimento do embrião.
( ) Nem sempre uma doença mitocondrial está ligada à hereditariedade, podendo ser relacionada a novas mutações, ou até mesmo, mutações no DNA nuclear, que acarretam em alteração na atividade mitocondrial.

A) V - F - V.
B) V - F - F.
C) F - F - V.
D) V - V - F.

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