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Biologia Molecular

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Sobre essas técnicas, associe os itens, utilizando o código a seguir: I- Biblioteca de cDNA. II- Biblioteca de DNA. III- Hibridização em colônia. ( ) Técnica que detecta os fragmentos do DNA de interesse com sondas específicas em meio de cultivo sólido. ( ) Clonagem de fragmentos aleatórios do DNA, permitindo a sua identificação, isolamento e sequenciamento do genoma. ( ) Clonagem de mRNAs, em que cada célula/tecido pode originar uma biblioteca diferente, considerando o padrão de expressão gênica específico, relacionado sempre a sua função. Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA:

A - Nenhuma das alternativas está correta.
B - I - III - II.
C - I - II - III.
D - III - II - I.
E - II - I - III.

Exercícios Para o Conhecimento

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ATIVIDADE 1 BIOLOGIA MOLECULAR

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Vamos analisar cada item e suas correspondências: I - Biblioteca de cDNA: Clonagem de mRNAs, onde cada célula/tecido pode originar uma biblioteca diferente, considerando o padrão de expressão gênica específico. II - Biblioteca de DNA: Clonagem de fragmentos aleatórios do DNA, permitindo a sua identificação, isolamento e sequenciamento do genoma. III - Hibridização em colônia: Técnica que detecta os fragmentos do DNA de interesse com sondas específicas em meio de cultivo sólido. Agora, vamos correlacionar as descrições: 1. ( ) Técnica que detecta os fragmentos do DNA de interesse com sondas específicas em meio de cultivo sólido. → III - Hibridização em colônia. 2. ( ) Clonagem de fragmentos aleatórios do DNA, permitindo a sua identificação, isolamento e sequenciamento do genoma. → II - Biblioteca de DNA. 3. ( ) Clonagem de mRNAs, em que cada célula/tecido pode originar uma biblioteca diferente, considerando o padrão de expressão gênica específico, relacionado sempre a sua função. → I - Biblioteca de cDNA. Portanto, a sequência correta é: III - II - I. Assim, a alternativa correta é: D - III - II - I.

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Sobre as principais diferenças entre essas técnicas, destacando os objetivos de cada uma delas, analise as sentenças a seguir: I- As Bibliotecas de DNA ou cDNA são grandes coleções de material genético mantidas em colônias de bactérias, nas quais um fragmento específico de DNA ou um gene podem ser procurados. II- Uma biblioteca de DNA é formada por fragmentos originados a partir de um DNA genômico. Já uma biblioteca de cDNA é formada por sequências codificantes dos genes que estavam expressos na forma de mRNA em uma determinada amostra. III- A formação das bibliotecas de DNA e cDNA permite que fragmentos clonados sejam mantidos e replicados por tempo indeterminado. Assinale a alternativa CORRETA:

A As sentenças II e III estão corretas.
B Somente a sentença III está correta.
C As sentenças I, II e III estão corretas.
D Somente a sentença II está correta.
E Somente a sentença I está correta.

Com base nas enzimas envolvidas no processo de replicação in vivo, analise as sentenças a seguir: I- A enzima DNA polimerase realiza a adição de novos nucleotídeos à nova fita do DNA que está sendo sintetizada, podendo atuar de modo independente do sentido da fita (3'-5' ou 5'-3'), já que não necessitam de iniciadores. II- As primases são enzimas responsáveis por adicionar primers (iniciadores) à fita de DNA que está sendo sintetizada, pois a DNA polimerase necessita de uma extremidade 3' disponível para a inserção do novo nucleotídeo. III- A enzima helicase, é a responsável por abrir a dupla fita de DNA. Ela vai cortar as pontes de hidrogênio entre os nucleotídeos, permitindo, assim, a separação da fita e síntese de uma nova fita. Assinale a alternativa CORRETA:

A Somente a sentença II está correta.
B As sentenças I, II e III estão corretas.
C As sentenças I e II estão corretas.
D Somente a sentença III está correta.
E As sentenças II e III estão corretas.

Sobre o método de Sanger, assinale a alternativa CORRETA:

A Os didesoxinucleotídeos são similares aos primers ou iniciadores, já que iniciam a reação em diferentes terminações 3'.
B São utilizados iniciadores (primers), fitas de DNA réplicas da mesma fita molde, ou seja, com a mesma extremidade 5' e diferentes terminações 3', devido à inserção dos didesoxinucleotídeos, que são nucleotídeos terminadores de cadeia (ddNTP: ddATP, ddTTP, ddCTP e ddGTP).
C Nenhuma das alternativas é correta.
D A técnica de Sanger, utiliza terminadores de sequência em réplicas de DNA de uma fita molde diferenciada.
E Os didesoxinucleotídeos são ineficazes para a técnicas de Sanger, sendo utilizados somente os primers e diversas fitas de DNA réplicas da mesma fita molde, com a mesma extremidade 5'.

Sobre esses fatores, analise as opções a seguir: I- Temperatura de fusão. II- pH alto para produzir condições de hibridização. III- Concentração de cátions monovalentes. IV- Presença de solventes orgânicos. Assinale a alternativa CORRETA:

A As sentenças II, III e IV estão corretas.
B As sentenças I, II, III e IV estão corretas.
C Somente a sentença II está correta.
D Somente a sentença I está correta.
E Somente a sentença III está correta.

De acordo com as técnicas empregadas para o sequenciamento de DNA, analise as sentenças: I- Os didesoxinucleotídeos (ddNTP) são utilizados para o sequenciamento com o método de Sanger, em que, posteriormente, faz-se a identificação da sequência com eletroforese. II - O pirosequenciamento tem como base a formação de pirofosfato a cada novo nucleotídeo adicionado à nova fita. III - O método empregado na plataforma Illumina foi a base para o desenvolvimento dos testes de sequenciamento que conhecemos atualmente, sendo a primeira geração de sequenciamento de DNA. Assinale a alternativa CORRETA:

A As sentenças I e II estão corretas.
B As sentenças I e III estão corretas.
C Somente a sentença I está correta.
D As sentenças I, II e III estão corretas.
E Somente a sentença II está correta.

Com base nas matrizes de agarose e poliacrilamida para a técnica de eletroforese em gel, analise as sentenças a seguir: I- A poliacrilamida pode separar fragmentos de DNA com até mesmo uma única base nitrogenada de diferença. II- A agarose, apresenta menor resolução, ou seja, cada banda presente no gel, representa um agrupamento de moléculas de tamanho semelhantes. III- No gel de poliacrilamida, uma menor faixa de tamanho das moléculas pode se movimentar, enquanto fragmentos maiores de DNA podem migrar facilmente no gel de agarose. Assinale a alternativa CORRETA:

A As sentenças I, II e III estão corretas.
B Somente a sentença I está correta.
C As sentenças II e III estão corretas.
D Somente a sentença II está correta.
E Somente a sentença III está correta.

De acordo com a interpretação do gráfico, analise as sentenças: I - A amostra A possui maior quantidade do gene avaliado, uma vez que possui menor Ct. II A amostra C possui maior quantidade de amostra, pois quanto maior o Ct, maior a quantidade de material disponível para iniciar a amplificação do gene de interesse. III - A amostra B ultrapassou o Threshold após o ciclo 20, apresentando uma quantidade intermediária de amostra, quando comparadas às amostras A e C. Assinale a alternativa CORRETA:

A - As sentenças II e III estão corretas.
B - As sentenças I e II estão corretas.
C - Somente a sentença II está correta.
D - As sentenças I e III estão corretas.
E - As sentenças I, II e III estão corretas.

Sobre os parâmetros para quantificação do qPCR, avalie as asserções a seguir e a relação proposta entre elas: I- O threshold, também conhecido como linha de corte, demonstra o momento em que a fluorescência apresentada está livre de ruídos, sendo essencialmente a representação da amplificação da amostra teste. PORQUE II- O equipamento é capaz de determinar em que momento a fluorescência detectada é proveniente apenas das amostras que estão sendo amplificadas e, assim, determinar a linha de corte. Assinale a alternativa CORRETA:

A - As asserções I e II são falsas.
B - A asserção I é uma proposição verdadeira e a II é uma proposição falsa.
C - A asserção I é uma proposição falsa e a II é uma proposição verdadeira.
D - As asserções I e II são verdadeiras, e a II é uma justificativa correta da I.
E - As asserções I e II são verdadeiras, mas a II não é uma justificativa correta da I.