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Biologia Molecular

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Após completar a extração do DNA de uma amostra de sangue, não há como saber se a extração foi devidamente realizada a não ser que se faça um controle de qualidade do material extraído. Com relação ao controle de qualidade, podemos afirmar que:

É composto por três etapas: quantificação, coloração e validação.
Deve ser realizado a partir da observação, estabelecimento de hipóteses, análise, conclusões e divulgação de um relatório final.
A etapa de quantificação apenas pode ser realizada com o uso da técnica de fluorometria.
A espectrofotometria mede a quantidade de luz, na faixa de 260 nm, absorvida pelo DNA e RNA, desta forma é capaz de quantificar e identificar a pureza da amostra.
A eletroforese é feita para medir a integridade do extraído e tem como princípio diferenciar a solubilidade de cada componente.

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O controle de qualidade do DNA extraído é fundamental para garantir que a extração foi bem-sucedida. A afirmação correta sobre o controle de qualidade é: A espectrofotometria mede a quantidade de luz, na faixa de 260 nm, absorvida pelo DNA e RNA, desta forma é capaz de quantificar e identificar a pureza da amostra. As outras opções apresentadas têm imprecisões ou não são totalmente corretas. A quantificação pode ser realizada por diferentes métodos, não apenas fluorometria, e a eletroforese é utilizada para avaliar a integridade do DNA, mas não se baseia apenas na solubilidade dos componentes.

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Na extração de RNA, todos os cuidados citados abaixo devem ser tomados, exceto:
Uso de solução fenol/clorofórmio em pH ácido.
Todo o material deve ser RNAse free e lavado com soluções neutralizadoras de RNAses.
É preferível o uso de um aparelho sonicador para a quebra das membranas celulares, ao invés do uso de detergentes.
Na extração de RNA, usamos acetato de amônio para auxiliar a separação entre a fase orgânica e a aquosa.
O RNA deve ser rapidamente congelado em nitrogênio líquido.

a) Uso de solução fenol/clorofórmio em pH ácido.
b) É preferível o uso de um aparelho sonicador para a quebra das membranas celulares, ao invés do uso de detergentes.
c) Na extração de RNA, usamos acetato de amônio para auxiliar a separação entre a fase orgânica e a aquosa.

Com relação à coleta, transporte, armazenamento e processamento de amostras de sangue para posterior extração de DNA, avalie as sentenças e assinale a alternativa INCORRETA:

A amostra de sangue não precisa ser resfriada e pode ser transportada em temperatura ambiente por até 2 dias.
A amostra de sangue fresca deve ser imediatamente resfriada e mantida a 2–8°C até a extração do DNA.
O agente anticoagulante preferencialmente utilizado é o EDTA ao invés da heparina.
Tubos de vidro devem ser evitados.
O rompimento das hemácias pode liberar o grupamento heme, este é um contaminante prejudicial. Portanto, devemos separar o plasma.

Você foi contratado por uma empresa de coleta de DNA para realizar testes de ancestralidade, a coleta é feita com swab pelo próprio cliente e o tubo chega em suas mãos. Leia as alternativas e marque a incorreta.

A amostra coletada pode ficar por até uma semana em temperatura ambiente.
O kit utilizado para a coleta de DNA deve possuir informações claras e objetivas. A coleta pode ser realizada, sem a necessidade de ir ao laboratório.
O swab utilizado deve estar limpo, sem detritos, caso tenha marcas de batom ou restos de comida o cliente deve repetir o procedimento.
O tubo deve conter apenas o swab limpo dentro dele.
É importante checar se tem dupla identificação através de um código de barras ou código numérico, além do nome do cliente.

Hoje em dia, o trabalho com material genético tornou-se rotineiro. Para uma correta extração de ácidos nucleicos, é importante a escolha adequada de protocolos e reagentes para aquele material que se quer extrair e para que fim se destina. Em um protocolo de extração de DNA ou RNA, não se deve usar como reagente:

Sais
Proteases
Tampão
Álcool
Nucleases

O papel do detergente nessa extração de DNA é:

Aglomerar o DNA em solução para que se torne visível.
Promover lise mecânica do tecido para obtenção de DNA.
Emulsificar a mistura para promover a precipitação do DNA.
Promover atividades enzimáticas para acelerar a extração do DNA.
Romper as membranas celulares para liberação do DNA em solução.

Esta técnica de amostragem denomina-se amostragem:

Sistemática
Por etapas
Probabilística
Não-probabilística
Aleatória simples