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O processo de replicação do DNA é relativamente simples, envolvendo diversas enzimas para que a síntese de uma nova fita de DNA seja realizada.
Com base nas enzimas envolvidas no processo de replicação in vivo, analise as sentenças a seguir: I- A enzima DNA polimerase realiza a adição de novos nucleotídeos à nova fita do DNA que está sendo sintetizada, podendo atuar de modo independente do sentido da fita (3'-5' ou 5'-3'), já que não necessitam de iniciadores. II- As primases são enzimas responsáveis por adicionar primers (iniciadores) à fita de DNA que está sendo sintetizada, pois a DNA polimerase necessita de uma extremidade 3' disponível para a inserção do novo nucleotídeo. III- A enzima helicase, é a responsável por abrir a dupla fita de DNA. Ela vai cortar as pontes de hidrogênio entre os nucleotídeos, permitindo, assim, a separação da fita e síntese de uma nova fita. Assinale a alternativa CORRETA:
A Somente a sentença II está correta.
B Somente a sentença III está correta.
C As sentenças I e II estão corretas.
D As sentenças I, II e III estão corretas.
E As sentenças II e III estão corretas.

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Vamos analisar cada uma das sentenças: I- A enzima DNA polimerase realiza a adição de novos nucleotídeos à nova fita do DNA que está sendo sintetizada, podendo atuar de modo independente do sentido da fita (3'-5' ou 5'-3'), já que não necessitam de iniciadores. Falso. A DNA polimerase só pode adicionar nucleotídeos na direção 5'-3' e necessita de um primer (iniciador) para começar a síntese. II- As primases são enzimas responsáveis por adicionar primers (iniciadores) à fita de DNA que está sendo sintetizada, pois a DNA polimerase necessita de uma extremidade 3' disponível para a inserção do novo nucleotídeo. Verdadeiro. Esta afirmação está correta, pois as primases realmente adicionam primers que fornecem a extremidade 3' necessária para a DNA polimerase. III- A enzima helicase é a responsável por abrir a dupla fita de DNA. Ela vai cortar as pontes de hidrogênio entre os nucleotídeos, permitindo, assim, a separação da fita e síntese de uma nova fita. Verdadeiro. Esta afirmação está correta, pois a helicase realmente separa as fitas de DNA ao romper as ligações de hidrogênio. Com base nas análises: - A sentença I está incorreta. - As sentenças II e III estão corretas. Portanto, a alternativa correta é: E) As sentenças II e III estão corretas.

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Paciente masculino, 55 anos de idade, realiza teste de Hibridização após alteração na linhagem linfóide no hemograma.
De acordo com a imagem, são feitas as seguintes afirmacoes: I.O paciente possui a mutação do BCR-ABL, que ocorre por meio da translocação entre o cromossomo 9 e 22. II.Os genes BCR e ABL são marcados com fluoróforos específicos (verde e vermelho) e a mutação pode ser observada pela fusão dos genes (coloração amarela). III. A marcação por fluoróforos específicos facilita a detecção dos genes procurados na técnica, e quando eles se fundem. É correto o que se afirma em:
A I e III.
B Nenhuma das alternativas está correta.
C I, II e III.
D I e II.
E II e III.

O PCR produz uma série de cópias de um determinado fragmento de DNA ou cDNA de uma maneira bastante rápida e eficiente. No entanto, de acordo com o seu objetivo de pesquisa, a PCR qualitativa ou quantitativa se torna mais eficaz para fornecer os resultados esperados.
De acordo com essas duas técnicas, analise as sentenças: I - A PCR qualitativa indica a presença de um fragmento específico de DNA ou cDNA em uma amostra, mas não indica quanto do gene está expresso na amostra. II - A qPCR é conhecida como PCR em tempo real (quantitativa) e fornece informações precisas relativas à quantidade de expressão de um gene. III - A PCR qualitativa necessita de um termociclador específico capaz de quantificar a amplificação dos fragmentos de DNA ao final de cada ciclo em tempo real. Assinale a alternativa CORRETA:
A As sentenças I, II e III estão corretas.
B Somente a sentença I está correta.
C As sentenças I e II estão corretas.
D As sentenças I e III estão corretas.
E As sentenças II e III estão corretas.

[Laboratório Virtual - Extração e Purificação de DNA e RNA] Segundo o sumário da aula prática, as amostras contendo o DNA ou RNA purificados devem ser: 1) ressuspensas em um tampão e armazenadas em tubos, ambos “livres” de enzimas que possam degradá-las (como DNAse ou RNAse – nucleases); e 2) mantidas em baixas temperaturas (-20 ºC ou - 80 ºC). Todos os procedimentos devem ser realizados com luvas para evitar a degradação das amostras, devido à presença de nucleases nos fluidos corporais das mãos.
De acordo com o processo de extração de DNA e RNA identificado na prática, associe os itens, utilizando o código a seguir: I- Etapa de Lise. II- Etapa de Ligação. III- Etapa de Lavagem. IV- Etapa de Eluição. ( ) Pipete 25 µl da Proteinase K no tubo Eppendorf. Em seguida, pipete 200 µl da amostra de sangue no mesmo tubo e, por último, pipete 200 µl do tampão lise S no tubo. Tampe o Eppendorf e homogeneíze no Vórtex por 20 segundos. Após esse tempo, incube o Eppendorf por 15 min. ( ) Pipete 210 µl de álcool 96% no Eppendorf e homogeneíze de novo no Vórtex. Em seguida, pipete 640 µl do Eppendorf para o tubo spin e centrifugue a 11.000 rpm por 1 minuto. ( ) Retire o Eppendorf da centrífuga, descarte o tubo de coleta e coloque o tubo spin em um novo tubo de coleta. Em seguida, pipete 500 µl do tampão de lavagem SI no tubo spin e centrifugue novamente. Repita o mesmo processo de troca de tubo de coleta, porém a lavagem utilizará 600 µl do tampão de lavagem SII, e centrifugue novamente. ( ) Retire o Eppendorf da centrífuga, descarte o tubo de coleta e coloque o tubo spin em um novo tubo de coleta. Em seguida, pipete 200 µl do tampão de eluição S no tubo spin, espere 1 minuto e centrifugue a amostra. Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA:
A II - III - IV - I.
B I - II - III - IV.
C IV - II - III - I.
D I - II - IV - III.
E IV - III - II - I.

[Laboratório Virtual - Hibridização] Segundo o sumário da aula prática, a hibridização é uma técnica que tem o princípio da complementariedade das bases nitrogenadas dos ácidos nucleicos como base (adenina com timina e citosina com guanina). Essa técnica consiste, de forma básica, em localizar sequências de interesse no genoma de quaisquer organismos, hibridizando-as ao próprio DNA da espécie.
Considerando a aula prática de hibridização, assinale a alternativa CORRETA:
A A técnica de CGH array é avaliada diretamente no microscópio, sem o uso de scanner.
B Na técnica de FISH, cada sonda é marcada com a mesma cor fluorescente para garantir a identificação de múltiplos genes simultaneamente.
C Ao final da reação é possível visualizar as células marcadas com pontos verdes e vermelho.
D A técnica de FISH é usada exclusivamente para a análise de sequências de RNA, e não para sequências de DNA.
E O reagente DAPI é adicionado logo no início da reação, junto à sonda na técnica de FISH, sem necessidade de incubação.

Para detecção do DNA em bibliotecas de DNA, uma membrana é colocada em contato com as colônias na placa logo após o crescimento das colônias bacterianas em placas de cultivo contendo meio sólido. Algumas células irão se aderir à membrana, formando uma impressão das colônias presentes na placa. Em seguida, as células aderidas sofrem lise celular, a fim de liberar o DNA, que permanece aderido à membrana. Por fim, a membrana é incubada com sondas de hibridização marcadas, complementares à porção do gene de interesse, permitindo a visualização da posição dos clones que contêm o fragmento de interesse.
Sobre a técnica exposta, assinale a alternativa CORRETA:
A Hibridização in situ.
B Western blot.
C Southern-blot.
D Northen-blot.
E Hibridização em colônia.

Gestante 42 anos, realiza teste de Hibridização in situ para investigação da trissomia do cromossomo 21. O cromossomo 21 ficou marcado em verde, e pode ser observado nos painéis A e B.
De acordo com a imagem acima, são feitas as afirmações abaixo: I- O painel A compreende um resultado normal, com 2 cromossomos 21. Já o painel B, apresenta 3 cromossomos 21, compatível com um quadro de trissomia do cromossomo 21, ou síndrome de Down. PORQUÊ II- A técnica utiliza como principio o uso de sondas de DNA, específicas para a mutação/cromossomo pesquisado. Uma vez que a sonda detecta a mutação/cromossomo, a sonda emite fluorescência. A respeito dessas asserções, assinale a opção correta:
A A asserção I é uma proposição falsa e a II é uma proposição verdadeira.
B As asserções I e II são verdadeiras, mas a II não é uma justificativa correta da I.
C As asserções I e II são verdadeiras, e a II é uma justificativa correta da I.
D A asserção I é uma proposição verdadeira e a II é uma proposição falsa.
E As asserções I e II são falsas.

O advento das técnicas de biologia molecular possibilitou o estudo genético de diversos organismos, incluindo os seres humanos. Esses estudos têm trazido ganhos significativos no entendimento de doenças, síndromes e mecanismos de ação de substâncias.
De acordo com a importância das técnicas de clonagem do DNA e construção de bibliotecas genômicas, analise as sentenças: I - As enzimas de restrição são utilizadas na construção de bibliotecas de DNA, com o objetivo de fragmentar o DNA genômico, já que podem ser conhecidas como tesouras moleculares. II - Os vetores são essenciais na técnica de clonagem e são utilizados tanto na construção de bibliotecas de DNA, quanto de cDNA, uma vez que carregam os fragmentos de DNA ou o cDNA extraído. III - As bibliotecas de cDNA são construídas a partir da extração do DNA de células ou tecidos, que posteriormente é submetido à clonagem do DNA. IV- O mRNA é convertido em cDNA pela transcrição reversa, para então serem introduzidos em vetores e submetidos ao processo de clonagem para originar as bibliotecas de cDNA. Assinale a alternativa CORRETA:
A As sentenças I, II e IV estão corretas.
B As sentenças I, II, III e IV estão corretas.
C As sentenças III e IV estão corretas.
D As sentenças II e IV estão corretas.
E As sentenças I e IV estão corretas.

O uso de bibliotecas de DNA ou cDNA permitem a manutenção e replicação do material genético em grandes coleções mantidas em colônias de bactérias, nas quais um fragmento específico de DNA ou um gene podem ser procurados.
Sobre as bibliotecas de DNA e cDNA, avalie as asserções a seguir e a relação proposta entre elas: I- A bactéria E. coli é a principal célula hospedeira utilizada no processo de clonagem em vetores, inclusive na construção de bibliotecas de DNA e cDNA, em que cada bactéria irá internalizar apenas um vetor. PORQUE II- Assim que o vetor é inserido, em condições adequadas de diluição e meio de cultivo, em poucas horas corre a formação de diversos clones dos fragmentos inseridos, sendo cada um encontrado em uma colônia diferente de crescimento bacteriano. Assinale a alternativa CORRETA:
A A asserção I é uma proposição verdadeira e a II é uma proposição falsa.
B As asserções I e II são falsas.
C As asserções I e II são verdadeiras, mas a II não é uma justificativa correta da I.
D As asserções I e II são verdadeiras, e a II é uma justificativa correta da I.
E A asserção I é uma proposição falsa e a II é uma proposição verdadeira.

O mais recente avanço no campo de sequenciamento de DNA foi o desenvolvimento de plataformas portáteis capazes de sequenciar grandes moléculas de DNA em pequenos equipamentos. Um exemplo dessas plataformas é a MinION.
Sobre a plataforma MinION, avalie as asserções a seguir e a relação proposta entre elas: I- Para que seja realizado o sequenciamento por meio da plataforma MinION, as amostras a serem sequenciadas são ligadas a enzimas de processamento. Essas enzimas induzem o fragmento de DNA a passar pelo nano poro, onde as variações da corrente elétrica são detectadas. PORQUE II- Sendo conhecidas as variações características de cada nucleotídeo, a sequência de nucleotídeos é formada rapidamente. Assinale a alternativa CORRETA:
A As asserções I e II são verdadeiras, e a II é uma justificativa correta da I.
B As asserções I e II são verdadeiras, mas a II não é uma justificativa correta da I.
C A asserção I é uma proposição falsa e a II é uma proposição verdadeira.
D A asserção I é uma proposição verdadeira e a II é uma proposição falsa.
E As asserções I e II são falsas.