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Biologia Molecular

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A hibridização in situ é uma ferramenta diagnóstica de doenças genéticas, como a distrofia muscular de Duchenne, e infecciosas, como a infecção por papilomavírus humano (HPV) em colo uterino.
Sobre as técnicas de hibridização in situ, é incorreto afirmar que:
Utilizam sondas de anticorpos, A capazes de reconhecer a sequência- alvo;
São feitas em tecidos e células fixadas e permeabilizadas, para preservação das estruturas celulares e entrada das sondas, respectivamente;
As sondas podem ser marcadas com c enzimas, fluoróforos e radioatividade;
Permite a identificação com precisão D do local na célula ou tecido em que a sequência-alvo está;
Exigem leitura através de E microscópios especializados.

Questões para Estudantes

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Tema 5 Sequenciamento, Clonagem e Técnicas de Hibridização

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ESTÁCIO

Respostas

Ed

há 2 meses

Vamos analisar cada uma das alternativas para identificar qual delas é incorreta em relação às técnicas de hibridização in situ: A) Utilizam sondas de anticorpos, capazes de reconhecer a sequência-alvo. - Esta afirmação é incorreta, pois a hibridização in situ utiliza sondas de ácidos nucleicos (DNA ou RNA) e não sondas de anticorpos. Anticorpos são usados em técnicas como a imunohistoquímica. B) São feitas em tecidos e células fixadas e permeabilizadas, para preservação das estruturas celulares e entrada das sondas, respectivamente. - Esta afirmação está correta. C) As sondas podem ser marcadas com enzimas, fluoróforos e radioatividade. - Esta afirmação está correta. D) Permite a identificação com precisão do local na célula ou tecido em que a sequência-alvo está. - Esta afirmação está correta. E) Exigem leitura através de microscópios especializados. - Esta afirmação está correta. Portanto, a alternativa incorreta é a) Utilizam sondas de anticorpos, capazes de reconhecer a sequência-alvo.

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Sequenciamento de DNA revolucionou nosso conhecimento sobre material genético e revelou que a maior parte dele não codifica nenhuma proteína.
Com relação ao sequenciamento de DNA, assinale a alternativa correta.
Os métodos de sequenciamento têm base na produção de fragmentos de DNA de comprimento crescente, que A começam em um ponto comum e possuem todos os quatro tipos de nucleotídeos nas respectivas extremidades.
Após a etapa de desnaturação do DNA, é colocado um primer na extremidade 5' de uma das cadeias e, com ajuda de uma DNA polimerase, sintetiza-se a cadeia complementar por completo.
Após término da reação de sequenciamento, ela é submetida à eletroforese capilar.
Todos os fragmentos recém-sintetizados, cada c um terminado em um nucleotídeo diferente e cada um marcado com um diferente fluoróforo, são separados pelas respectivas cores.
Os nucleotídeos empregados nessa técnica são quimicamente modificados de forma que não D apresentam um terminal hidroxila (3'- impedindo a inserção de um novo nucleotídeo pela DNA polimerase.
método de Sanger revolucionou o sequenciamento de DNA pela não utilização de substâncias radioativas E marcando os ddNTPs, e ficou conhecido como sequenciamento da segunda geração.

O desenvolvimento da engenharia genética permitiu a retirada de genes de uma espécie e a posterior introdução deles em outro indivíduo de espécie diferente.
Com base nos conceitos de organismos geneticamente modificados (OGMs), assinale a alternativa correta.
Os OGMs, na respectiva totalidade, A são considerados transgênicos.
Organismos que tiveram genes alterados apenas quanto à respectiva posição ou expressão são transgênicos.
Os transgênicos são produzidos através da alteração de genes em organismos adultos, sendo a c modificação genética transmitida de uma célula a outra através de transformação.
setor da saúde não apresenta qualquer tipo de questionamento em D relação ao uso dos OGMs, considerando os inúmeros benefícios trazidos por eles para setor.
Os OGMs são organismos cujo E material genético (RNA ou DNA) tenha sido modificado por qualquer técnica.

As técnicas de sequenciamento de Nova Geração (NGS) baseiam-se em uma amplificação clonal antes da reação de sequenciamento em si.
Sobre estas técnicas, assinale a opção correta.
A Uma das técnicas utilizadas é a PCR em ponte, na qual as fitas de DNA são dispersas em uma placa, aleatoriamente, e a PCR é realizada através de pareamento de bases com fitas de DNA presentes nesta placa; esta técnica é utilizada na metodologia do sequenciador 454 (pirosequenciamento).
B A PCR em emulsão é uma técnica utilizada na metodologia do sequenciador 454 (pirosequenciamento) e consiste em uma emulsão de água, em uma fase oleosa, formando gotículas de água que contêm os reagentes de PCR, uma fita de DNA a ser sequenciada e uma 'bead' para sua ancoragem.
C Uma das técnicas utilizadas é a PCR em ponte, na qual as fitas de DNA são dispersas em uma placa aleatoriamente e a PCR é realizada através de pareamento de bases com fitas de DNA presentes nesta placa; esta técnica é utilizada na metodologia do sequenciador Sanger.
D A PCR em emulsão é uma técnica utilizada na metodologia do sequenciador Sanger e consiste em uma emulsão de água em uma fase oleosa, formando gotículas de óleo que contêm os reagentes de PCR, uma fita de DNA a ser sequenciada e uma 'bead' para sua ancoragem.
E A PCR em emulsão é uma técnica utilizada na metodologia do sequenciador Illumina e consiste em uma emulsão de água em uma fase oleosa, formando gotículas de água que contêm os reagentes de PCR, uma fita de DNA a ser sequenciada e uma 'bead' para sua ancoragem.

Alguns processos biotecnológicos podem ser empregados na produção de bioderivados, como é caso dos ensaios de hibridização.
Qual nome é dado para processo de hibridização em que DNA é fixado e transferido para uma membrana de nitrocelulose ou nylon?
A Hibridização in situ
Hibridização por microarray
Southern Blot
Western Blot
Northern Blot