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O GRAM é direcionado para bactérias que possuem parede de peptidoglicano (Eubactérias GRAM+ possuem 50%, enquanto as Eubactérias GRAM- possuem 5 a 10% com presença de uma membrana externa). A diferenciação na coloração dessas bactérias se dá pela presença ou não dessa membrana presente na GRAM-.
As bactérias álcool-ácido resistentes possuem na parede celular alto teor de lipídeos, cerca de 60%, principalmente compostas por ácido micólico.
Por isso não é recomendado o uso do GRAM nessas bactérias. Quando acontece a etapa de descoloração com etanol, este não penetra na parede das bactérias resistentes, apresentando um resultado errado.
Para essas bactérias é utilizado o método Ziehl-Neelsen, no qual é usada a característica de possuírem parede celular de lipídeo, cujo corante Fuccina fenicada irá fornecer coloração vermelha à bactéria, e persistirá à descoloração por álcool-ácido forte.
Espero ter ajudado! Qualquer outra dúvida, se eu puder esclarecer, estarei à disposição.
Como as células normalmente têm paredes celulares carregadas negativamente, os cromóforos positivos em corantes básicos tendem a aderir às paredes das células, tornando-as positivas. Assim, os corantes básicos vulgarmente utilizados, tais como fucsina básica , violeta de cristal , verde de malaquite , azul de metileno e safranina, tipicamente servem como manchas positivas.
Por outro lado, os cromóforos carregados negativamente em corantes ácidos são repelidos por paredes celulares carregadas negativamente, tornando-as negativas. Corantes ácidos comumente usados incluem fucsina ácida , eosina e rosa bengala.
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