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Sangue & Hemácias Composição do sangue; O sangue é composto pelo plasma – o componente líquido – e pelos componentes celulares. O plasma constitui cerca de 55% do volume sanguíneo, enquanto as hemácias ocupam cerca de 42 a 47% e os leucócitos, cerca de 1%. Avaliação histológica do sangue; O sangue é avaliado histologicamente através da técnica do esfregaço sanguíneo, em que uma amostra de sangue é depositada em um lado de uma lâmina de vidro com uma pipeta ou tubo capilar e um espalhador é utilizado para espalhar o sangue. A lâmina é seca, rotulada e corada com HE. 1. Eritrócitos Também chamados de glóbulos vermelhos (RBC) ou hemácias, são os componentes funcionais do sangue, responsáveis pelo transporte de gases. Possuem forma bicôncava e discoide, e não apresenta núcleo.. Seu citoesqueleto diferenciado mantém sua Sangue Plasma Células Eritrócitos Plaquetas Leucócitos Granulócitos Agranulócitos Neutrófilos, basófilos e eosinófilos Monócitos e linfócitos Esfregaço de sangue (0.3X) Corpo do esfregaço – células muito próximas Franja do esfregaço Zona de melhor morfologia – transição entre o corpo e a franja do esfregaço. Sangue & Hemácias forma e é composto por espectrina, actina, proteína 4.1 e anquirina, permitindo a integridade estrutural e maleabilidade da célula. O transporte de sangue é feito pelas moléculas de hemoglobina, formadas por duas cadeias de α-globulina e duas cadeias de β-globulina, além de quatro grupamentos de porfirina denominados grupos heme. Os grupos heme também possuem átomos de ferro, que auxiliam no transporte. A produção dos eritrócitos – eritropoiese – é o processo de formação de novas hemácias, englobado pela hematopoiese, que é a produção de novas células sanguíneas em geral. Ambos os processos ocorrem na medula óssea, através de células-tronco hematopoiéticas multipotentes. A regulação é feita por fatores de sinalização específicos, como eritropoietina, interleucina (IL-2, IL-3, IL-6, IL-7), e uma variedade de fatores estimulantes dessas células. Na formação de uma hemácia, uma célula mieloide sofre ação da eritropoietina, ocorrendo: - Diminuição do volume celular; - Diminuição do núcleo e condensação da cromatina; - Expulsão do núcleo; Esfregaço de sangue (40X) Grupamentos de hemácias Leucócitos Esfregaço de sangue (60X) Região central menos corada pela menor concentração de hemoglobina Citoplasma acidófilo, corado em rosa ou alaranjado pela eosina. Formato bicôncavo e ausência de núcleo Sangue & Hemácias - Acúmulo de hemoglobina; - Diminuição de organelas; A destruição de hemácias envelhecidas é feita no baço, no fígado e na medula óssea, e é chamada de hemocaterese. Esse processo dá origem ao pigmento bilirrubina. OBS.: Particularidades entre as espécies domésticas Hemácias de cão (BACHA & BACHA) Hemácias de caprino (BACHA & BACHA) Pode haver diferença no tamanho dos eritrócitos entre as espécies, a menor sendo a do caprino e a maior sendo a do cão. O nº de hemácias do caprino é maior. Hemácias de equino podem apresentar fragmentos nucleares ou união entre os eritrócitos. Corpos de Howell-Jolly (BACHA & BACHA) Anel de Cabot (BACHA & BACHA) Formação de rouleaux (BACHA & BACHA) Hemácias de suíno (BACHA & BACHA) Hemácias de suíno podem possuir forma estrelada ou arredondada (crenação) Hemácias de bovino (BACHA & BACHA) Hemácias de bovino apresentam anisocitose (hemácias de tamanhos distintos), o que pode ser considerado uma patologia em outras espécies, porém não neste caso. Sangue & Hemácias 2. Plaquetas As plaquetas são fragmentos celulares pequenos e anucleados. Derivam de megacariócitos da medula óssea, dos quais herdam suas organelas. Participam da cascata de coagulação, respostas inflamatórias e homeostase do sistema vascular. Plaquetas apresentam três tipos principais de grânulos: α, β e δ. Os grânulos α são abundantes e grandes, possuindo uma coloração densa central chamada de nucleoide. Os grânulos β são representados pelas mitocôndrias, e menos abundantes. Por último, os grânulos δ são grânulos densos e estão presentes em menores quantidades. As plaquetas podem exocitar esses grânulos em resposta a sinais como colágeno, trombina ou tromboxano A2. As plaquetas também possuem um sistema canalicular de transporte. Plaquetas se originam de megacariócitos, que sofrem alterações em um processo denominado trombopoiese e regulado pela trombopoietina. Os megacariócitos são células grandes, com núcleo bem amplo e lobulado, e se localizam na superfície externa de capilares sinusoides na medula óssea. Fatores como a expressão de fosfatidilserina e desglicosilação das proteínas da membrana sinalizam a degradação das plaquetas no baço e no fígado. Esfregaço de sangue (60X) Plaquetas – fragmentos de célula basófilos M.E. de plaqueta α-granulômeros β-granulômeros (mitocôndria) Canalículo Sangue & Hemácias 3. Leucócitos Os leucócitos são células do sistema imune do organismo, também chamados de células brancas. São formadas na medula óssea e amadurecem ali mesmo ou nos órgãos linfoides. a. Granulócitos ou polimorfonucleares: caracterizados pelos grânulos citoplasmáticos e pelas diferentes organizações nucleares. - Neutrófilos: - Citoplasma róseo, levemente corado - Núcleo lobulado, com cerca de 3 a 5 lóbulos - Núcleo denso e fortemente basófilo - Pode apresentar o corpúsculo de Barr, em fêmeas. M.E. de plaqueta Canalículo Hialômeros (pequenos filamentos de microtúbulos) Membrana rica em glicocálix (impede que a plaqueta grude no endotélio) Δ-granulômeros: facilita a adesão da plaqueta no tecido que necessita de cicatrização Sistemas tubulares, contendo cálcio Leucócitos Granulócitos Agranulócitos Neutrófilos, basófilos e eosinófilos Monócitos e linfócitos Sangue & Hemácias Os grânulos citoplasmáticos dos neutrófilos são divididos em: azurófilos ou grânulos primários, mais densos e de maior tamanho, que aparecem na fase de promielócito; os específicos ou grânulos secundários, menores, menos densos e mais abundantes, que aparecem na fase de mielócito e promielócito; os de gelatinase ou grânulos terciários, que aparecem na etapa de banda e só podem ser diferenciados pelos marcadores; e as vesículas secretoras. Os neutrófilos são a primeira linha de defesa contra patógenos e invasores, possuindo capacidade fagocitária, podendo ampliar a inflamação. Em peixes, aves, répteis e alguns mamíferos como o peixe boi, coelhos e porquinhos da índia, o equivalente do neutrófilo é o heterófilo, cujos grânulos possuem forma ovalada. M.E. de neutrófilo Azurófilos Específcos Possuem proteínas antimicrobianas, enzimas bactericidas, enzimas lisossômicas, mieloperoxidase e se fundem com fagossomos, podendo também ser secretados. Possuem proteínas antimicrobianas, enzimas bactericidas, enzimas degradantes da matriz extracelular, NADPH oxidase e se fundem com fagossomos, podendo também ser excretados. Neutrófilo Citoplasma levemente corado Núcleo com quatro lóbulos e fortemente basofílico Sangue periférico (60X) Sangue & Hemácias - Eosinófilos: - Núcleo bem denso, bi ou trilobulado - Grãos específicos eosinofilicos - Responsáveis pela reação alérgica, asma, e combate a helmintos Harvey, 2012 Cão Vaca Cavalo Harvey, 2012 Heterófilo de coelho Heterófilo de papagaio Grânulos ovalados e mais eosinofílicos Sangue periférico (60X) Grânulos eosinofílicos no citoplasma Eosinófilo Núcleo bilobulado e denso Sangue & Hemácias Possuem três tipos de grânulos: os grânulos específicos, os grânulos primários e os pequenos grânulos densos. Os grânulos específicos possuem regiões bem delimitadas, com uma região interna (ou cristaloide) onde se encontraa proteína básica principal (MBP – principal proteína contra helmintos, além de bactericida e citotóxica) e citocinas; além de uma região externa (ou matriz) que acumula outras enzimas lisossômicas bactericidas e contra agentes virais, como a peroxidase eosinofílica. Os grânulos variam muito no formato entre espécies.. M.E. de eosinófilo Grânulo específico Região cristaloide Matriz Lowrie D., 2020 Weiss D. e Wardrop K., 2006 Ser humano Gato Harvey, 2012 Gato Cão Cavalo Vaca Sangue & Hemácias - Basófilos: - Núcleo bi ou trilobulado, porém com lobulação pouco evidente - Grânulos corados metacromaticamente com forte basofilia - Membrana com muitos receptores para IgE Seus grânulos possuem histamina, uma substância que auxilia na dilatação vascular durante o processo inflamatório; e heparina, um anticoagulante, responsável pela coloração metacromática dos grânulos. Harvey, 2012 Heterófilo Em aves e répteis, os eosinófilos possuem grânulos arroxeados e arredondados. Papagaio Basófilo Núcleo amplo, encobrido pelos grânulos Citoplasma fortemente basófilo Sangue periférico (60X) Sangue & Hemácias Também possuem variedades importantes entre as espécies. b. Agranulócitos ou mononucleares: não possuem grânulos evidentes. - Monócitos: - Núcleo volumoso, em formato de rim, feijão, etc. - Citoplasma abundante com basofilia discreta - Possuem grânulos azurófilos Vesículas secretoras Grânulo de histamina Grânulo de heparina M.E. de basófilo Harvey, 2012 Cão Gato Vaca Bode Cavalo Sangue periférico (60X) Monócito Núcleo não lobulado Citoplasma discretamente corado Sangue & Hemácias Os monócitos permanecem então na corrente sanguínea, até migrarem para os tecidos e se transformarem em macrófagos ou fagócitos. Podem ser chamados de vários nomes a depender do órgão ou tecido em que se encontram, como macrófago alveolar no pulmão, célula de Kupffer no fígado, osteoclastos no osso, macrófago esplênico no baço, micróglia no sistema nervoso, etc. - Linfócitos: - Advêm da linhagem linfoide - Núcleo amplo e denso, esferoidal ou ovalado - Citoplasma levemente basófilo - Possuem grânulos inespecíficos azurófilos Sangue periférico (60X) Linfócito Citoplasma basófilo Núcleo ovoide M.E. de linfócito Mitocôndrias Núcleo denso Sangue & Hemácias Podem se tornar linfócitos B, que ativados pelo antígeno tornam-se em plasmócitos; ou linfócitos T, que ativados pelas células apresentadoras de antígeno tornam-se células T efetoras (citotóxicas, auxiliares ou reguladoras). 4. Medula óssea Localizada entre as trabéculas dos ossos esponjosos, no canal medular de ossos longos (principalmente esterno, vértebras, costelas e íleo), é responsável pelos processos de hemocitopoiese (formação de células sanguíneas), hemocaterese (destruição de eritrócitos senis por macrófagos) e armazenamento de ferro na forma de ferritina e hemossiderina no citoplasma dos macrófagos. Medula óssea Vermelha (hematógena) Amarela Parênquima: tecido hematopoiético Estroma: células e fibras colágenas reticulares, capilares sinusoides, adipócitos e macrófagos Estroma: células e fibras colágenas reticulares, capilares sinusoides, adipócitos e macrófagos Parênquima: células tronco Corte de medula óssea vermelha (10X) Tecido adiposo (imagem negativa) Megacariócitos Tecido hemocitopoiético Capilares sinusoides Sangue & Hemácias a. Hemocitopoiese Hemocitopoiese é o processo de formação de novas células sanguíneas. O início dessa produção ocorre na 3ª semana de gestação, fase conhecida como primeira fase ou fase do saco vitelínico, em que forma-se no saco vitelino as ilhotas sanguíneas, conglomerados de células sanguíneas. A segunda fase ou fase hepática tem início por volta do segundo mês, em que surgem centros hemocitopoiéticos no fígado e, por volta do terceiro mês, no baço. Por fim, a terceira fase ou fase medular tem início no segundo trimestre gestacional e permanece até a fase adulta do indivíduo. A hemocitopoiese é subdividida em trombocitopoiese – a formação de plaquetas; eritropoiese – a formação de hemácias; e leucopoiese – a formação de leucócitos. A trombocitopoiese se dá através de uma célula indiferenciada mieloide, que se converte em megacarioblasto, em promegacariócito e, posteriormente, em megacariócito. Os megacariócitos se projetam junto aos capilares sinusoides da medula óssea e se fragmentam, dando origem às plaquetas. Corte de medula óssea amarela – Anatpat UNICAMP Acúmulo de tecido adiposo Trabécula óssea Esfregaço de medula óssea (40X) Fragmentos de megacariócito – plaquetas Sangue & Hemácias A eritropoiese é o processo de formação de novas hemácias, também a partir de células indiferenciadas mieloides. Ela ocorre através da ação do hormônio eritropoietina, produzida pelas células intersticiais do córtex renal, que previne a apoptose das células precursoras, estimula a diferenciação e síntese de hemoglobina. O processo começa quando a célula progenitora mieloide dá origem a unidades formadoras de colônia de eritroides. Surge então o proeritroblasto, uma célula ampla de citoplasma reduzido, que dará lugar ao eritroblasto basofílico, em que há a redução do volume celular e a redução discreta do núcleo. Logo depois surge o eritroblasto policromático, já que a deposição de hemoglobina pelos macrófagos traz uma acidofilia ao citoplasma, e o núcleo continua a reduzir, tornando-se picnótico. O próximo estágio é o de eritroblasto ortocromático ou normoblasto, em que a cromatina torna-se muito condensada e o núcleo migra para a periferia, pronto para ser expulso. Quando isso ocorre, forma-se o reticulócito, de citoplasma já bastante acidófilo e sem núcleo, porém pode conter restos de materiais genéticos e não apresentam formato bicôncavo. Megacariócito Esfregaço de medula óssea (40X) Esfregaço de medula óssea (40X) Proeritroblasto O acúmulo de ribossomos causa a cor azulada do citoplasma Esfregaço de medula óssea (40X) Eritroblasto basofílico Basofilia mais intensa e núcleo mais reduzido Sangue & Hemácias Esfregaço de medula óssea (20X) Eritroblasto policromático Inicia-se o acúmulo de hemoglobina, e o citoplasma torna-se mais acidófilo. Esfregaço de medula óssea (40X) Eritroblasto policromático O citoplasma fica ainda mais acidófilo e o núcleo é extremamente picnótico Esfregaço de medula óssea (40X) Reticulócitos O núcleo é expulso, mas permanecem restos de material genético. Se assemelham muito a hemácias maduras. Sangue & Hemácias A leucopoiese pode se iniciar a partir de células indiferenciadas da linhagem mieloide ou linfoide. Neutrófilos, eosinófilos, basófilos e monócitos se originam de células da linhagem mieloide, enquanto linfócitos se originam da linhagem linfoide. Granulócitos: Esfregaço de medula óssea (40X) Banda neutrofílica (neutrófilo imaturo) Neutrófilo maduro Esfregaço de medula óssea (40X) Banda eosinofílica (eosinófilo imaturo) Eosinófilo maduro Esfregaço de medula óssea (40X) Basófilo maduro Sangue & Hemácias Agranulócitos: Esfregaço de medula óssea (40X) Monócitos maduros Linfócitos maduros Esfregaço de medula óssea (40X) Sangue & Hemácias
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