Teste de Coombs Direto e Indireto

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Teste de Coombs Direto 
 
Método : Hemaglutinação direta. 
 
Procedimento: 
 
➢ Preparar uma suspensão à 5% das hemácias a testar, em soro fisiológico. 
➢ Colocar em um tubo de ensaio, uma gota (50 ul) da suspensão à 5% do 
sangue a testar. 
➢ Colocar soro fisiológico no tubo (até um cm da borda), centrifugar por 2 
minutos a 3.000 rpm, desprezar o sobrenadante. Repetir este 
procedimento por pelo menos três vezes. 
➢ Após a última lavagem, decantar completamente o sobrenadante, 
invertendo o tubo e enxugando a borda do tubo com papel absorvente. 
➢ Adicionar ao sedimento de hemácias, duas gotas de soro de Coombs. 
➢ Agitar levemente para misturar, e centrifugar imediatamente por 15 
segundos 3.400 rpm ou um minuto 1.000 rpm. 
➢ Resuspender o botão de hemácias, agitando delicadamente o tubo, e 
observar presença, ou ausência de aglutinação. 
 
 
OBS: No caso de se tratar de sangue de cordão, torna-se necessário lavar no 
mínimo 7 vezes a amostra com soro fisiológico, e em seguida proceder à 
partir do item nº 1. 
 
 
Interpretação dos resultados: 
 
Presença de aglutinação: Teste de Coombs Direto positivo. 
Ausência de aglutinação: Teste de Coombs Direto negativo. 
 
 
 
OBS : A cada tubo que não houve aglutinação, adicionar uma gota de 
Controle de Coombs (hemácias comerciais sensibilizadas com IgG – 
CONTROCEL). Centrifugar e fazer a leitura. Nessa fase todos os tubos 
devem apresentar aglutinação, caso contrário o teste deverá ser repetido. 
O CONTROCEL, é utilizado, para se ter um controle de qualidade da 
técnica de lavagem, e da atividade da antiglobulina humana utilizada. 
 
 
 
 
Teste de Coombs Indireto 
 
Método: Hemaglutinação direta 
 
Procedimento: 
 
➢ Lavar hemácias humanas O Rh positivo, três vezes em solução salina 
fisiológica por dois minutos a 3.000 rpm. 
➢ Preparar uma solução da hemácia a 5% em solução salina fisiológica. 
➢ Em um tubo de ensaio (12x75 mm), colocar duas gotas de soro a 
examinar. 
➢ Acrescentar a esse tubo uma gota da suspensão de hemácias à 5%. 
➢ Incubar por uma hora em banho-maria a 37ºC. 
➢ Lavar três vezes com solução salina fisiológica de um a dois minutos a 
3.000 rpm. 
➢ Após a última lavagem, decantar completamente o sobrenadante, 
invertendo o tubo e enxugando a borda do tubo com papel absorvente. 
➢ Adicionar ao sedimento de hemácias duas gotas de soro de Coombs. 
➢ Agitar levemente para misturar e centrifugar imediatamente, por 15 
segundos 3.400 rpm. 
➢ Resuspender o botão de hemácias agitando delicadamente o tubo, e 
observar a presença ou ausência de aglutinação. 
 
Interpretação dos resultados: 
 
Presença de aglutinação: teste de Coombs Indireto positivo. 
Ausência de aglutinação: teste de Coombs Indireto negativo. 
 
OBS : Quando ocorrer aglutinação nesta fase, repetir o teste fazendo 
diluições seriadas da amostra em solução salina fisiológica, na razão de 2 
(ex: 1/2, 1/4, 1/8, etc). 
O resultado será dado pelo título da última diluição que apresentar 
aglutinação. 
 
 
OBS : A cada tubo que não houve aglutinação, adicionar uma gota de 
Controle de Coombs (hemácias comerciais sensibilizadas com IgG – 
CONTROCEL). Centrifugar e fazer a leitura. Nessa fase todos os tubos 
devem apresentar aglutinação, caso contrário o teste deverá ser repetido. 
O CONTROCEL, é utilizado, para se ter um controle de qualidade da 
técnica de lavagem, e da atividade da antiglobulina humana utilizada.