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Biomedicina Citologia Relatório de Aula Prática Bruna Amorim Cau RA: 2113397 Polo de Matrícula – Éden Sorocaba Aula Prática – UNIP SOROCABA 2021 Introdução ao Microscópio Óptico (Aula-Roteiro1) Introdução O microscópio óptico é um material essencial para exames laboratoriais, utilizado para diagnósticos de diversas amostras. Ele permite o aumento de imagens através da luz que após incidir sobre a amostra (lamina) passa por um conjunto de lentes objetivas (que formam e aumentam a imagem) Sendo assim além de ampliar a imagem de um objeto, o microscópio serve para aumentar o poder de resolução do olho humano. Exploraremos sua composição observando cada parte de um microscópio óptico e sua funcionalidade. Lentes Ocular: Aumenta a imagem do objeto após o aumento já proporcionado pela objetiva. É através dessa lente que observador vê a imagem do objeto (ocular) Toda ocular traz gravado o número de aumentos que proporciona melhor visualização em detalhes como (objetivas). Lentes Objetivas: Elas são responsável pela riqueza dos detalhes da amostra, pois pode ser aumentado 4x (vermelha) 10x (amarela) 40x (azul) ou até 100x (branca e preta) Com aumento da ocular em 10x o aumento real do objeto é de 40 ,100, 400 ou até 1000 vezes. A objetiva 1000 é também chamada objetiva de imersão e é somente utilizada o óleo especial (imersão) o qual permite maior refração de luz para dentro da objetiva, e não perca os feixes de luz na visualização da amostra e melhorar a visão da lâmina. Revólver: Peça encontrada a baixo do canhão, na qual se insere as lentes objetivas. E notada de uma movimento de rotação que permite posicionar as objetivas. Canhão: Parte mais superior do microscópio, contém um conjunto de espelhos, que projeta a imagem em direção as oculares. Platina: É uma placa de metal com um orifício no centro, por onde passam os raios luminosos. Também denominada mesa, é o local (suporte) onde a lâmina é posicionada. A platina pode ser levantada ou baixada para regular o foco Charriot: Associada à platina existe uma peça chamada charriot cuja função é movimentar a lâmina no plano horizontal. Macrométrico e Micrométrico: Macrométrico: Parafuso que permite regular a altura da platina, através de movimentos amplos para um ajuste grosso. Micrométrico: Parafuso que também permite regular a altura da platina, porém é um ajuste fino do foco. Diafragma (filtro de luz): Controla o tamanho efetivo da abertura do condensador, regulando dessa forma a abertura ou fechamento, levando ao controle da passagem total ou parcial da luz. Condensador: De forma circular e situado entre platina e a base, o condensador converge os raios luminosos, provindos da lâmpada, e projeta como um cone de luz. Sobre o material examinado. Fonte de luz: luz artificial emitida por uma lâmpada incluída no próprio microscópio com um interruptor e algumas vezes com um reóstato que permite regular a intensidade da luz. Controle de iluminação: A iluminação usada para a observação do microscópio é muito importante na qualidade da imagem final. RESULTADOS E DISCUSSÃO O objetivo desta aula teórica foi entender como é feito o manuseamento do microscópio foi discutido sobre sua estrutura e para que serve cada departamento, e como se manusear. O resultado final é de suma importância o entendimento de cada função do microscópio pois ele é e será primordial em nossa rotina de trabalho. Células Procarióticas - Eucarióticas - Membrana Plasmática (Aula – Roteiro 2) Introdução Sabemos que as células podem ser divididas em duas classes. Células Eucariontes e células Procariontes. Umas das principais diferenças entre esses dois tipos celulares é a presença de estruturas (organelas) membrana nuclear que é presente na célula Eucariontes e ausente na célula Procariontes. Células Procariontes: As células procariontes em comparação com as outras células são as que possuem as estruturas mais simples essas células não dispõem nem sequer um núcleo para guardar seu DNA. E praticamente não apresenta organelas. Retículo endoplasmático, Liso Rugoso, complexo de GOLGI, mitocôndria, Lisossomo e Vacúolo. Consiste basicamente em um único compartimento fechado delimitado por uma membrana plasmática. https://www.educamaisbrasil.com.br/enem/biologia/celulas-procariontes As bactérias são organismos microscópicos procariontes que fazem parte de todos os habitats. Esses seres vivos unicelulares podem ser encontrados na forma isolado ou agregados em colônias. Quanto à morfologia das células, as bactérias recebem as seguintes classificações: - Cocos: forma esférica; - Bacilos: forma de bastonete; - Espiral: forma de espiral - Vibrião: forma de vírgula. Célula Eucariontes Em termos gerais as células Eucarióticas são maiores e com um nível de organização superior os das células Procariontes, pois possuem núcleo e além disso tem a presença de várias membranas internas (organelas) que subdividem as células em compartimento, as formas de vida dos eucariontes também são variadas, alguns são seres unicelulares como é o caso da ameba e outros formam seres multicelulares com o nível de complexidade variado desde fungos as seres humanos. https://www.educamaisbrasil.com.br/enem/biologia/celulas-eucariontes Estruturas e funções das células Eucariontes: Núcleo é nele que a molécula de DNA é mantida, Retículo Endoplasmático produz e envia lipídeos e proteínas, Complexo de golgi modifica moléculas e transporta matérias, Lisossomos função na digestão celular, Peroxissomas tem enzimas transformadoras, Nucléolo onde ocorre síntese de ribossomos ( organela que a Procariontes possui) Mitocôndrias Libera energia de moléculas de glicose, Vacúolos armazenam substancias, Plastos (somente em célula vegetal) Realizam fotossíntese e armazenamento. Protozoários Os protozoários são formados por uma única célula, que tem a capacidade de exercer funções vitais, como alimentação, crescimento, reprodução e excreção, Muitos deles são capazes até de se locomover por meio de cílios, flagelos. Doenças causadas por protozoários. - Giardíase - Amebíase - Malária Membrana Plasmática As membranas celulares são formadas basicamente por bicamadas de lipídios e proteínas que é mantida principalmente interações hidrofóbicas. Essas membranas apresentam duas porções uma hidrofóbica e hidrofóbicas, a organização desta membrana faz com que as partes hidrofóbicas fiquem voltadas para o exterior da bicamada enquanto as partes hidrofóbicas ficam de certa forma escondidas no interior da bicamada. https://brasilescola.uol.com.br/o-que-e/biologia/o-que-e-membrana-plasmatica.htm Transportes Membrana Plasmática - Difusão simples: A difusão simples é o processo no qual moléculas e íons são transportados, de forma natural, do local onde estão em maior concentração para o local onde se encontram em menor concentração e sem gasto de energia. - Osmose: A osmose é um tipo de transporte passivo, que ocorre a favor de um gradiente de concentração, portanto, sem gasto de energia. Nesse tipo de transporte, a água atravessa a membrana plasmática no sentido do meio menos concentrado (hipotônico) para o meio mais concentrado (hipertônico). - Difusão Facilitada: A difusão facilitada é um tipo de transporte passivo, sem gasto de energia, que conta com a ajuda de uma proteína da membrana que atua como carregador. O transporte ocorre a favor do gradiente de concentração. - Transporte Ativo: O transporte ativo ocorre com gasto de energia e, assim como na difusão facilitada, com a ajuda de uma proteína transportadora. Entretanto, ela acontece contra o gradiente de concentração. RESULTADOS E DISCUSSÃO: Após o estudo sobre ascélulas e suas estruturas e organizações ficou fácil perceber como algumas reações acontecem no organismo do ser vivo. São seres organizados, trabalham em conjunto, onde todos seguem um ritmo. No fim da discussão percebi que para melhor compreender o mundo e as coisas que nele existe devemos primeiro nos atendar para as partes menores que em conjunto formam o todo. Microscópio na Prática (Aula - Roteiro 3 Prática) Introdução Na prática tomamos conhecimento de tudo que foi abordado em aula teórica, e aplicamos conhecendo e revisando parte por parte de cada departamento, funcionalidade e manuseando o microscópio de forma cuidadosa, pois se trata de uma estrutura delicada que exige normas para que se coloque em prática o trabalho. Lâmina com Tinta Observamos a estrutura da lâmina e lamínula com suas partes foscas em sua lateral aprendemos introduzir (Lâmina) de forma correta no microscópio, para que tenhamos uma visualização ampla no reagente de tinta. Visualizamos o reagente de tinta cor (Azul) inicialmente com a objetiva vermelha 4x e assim consequentemente fomos alterando para Amarela 10x e azul 40x. Lâmina (número 52) Esôfago e Traqueia (Camundongo) CHE52 Para a segunda visualização no microscópio, antes iniciamos desenhando no papel a morfologia do Esôfago e Traqueia. E sua coloração de H&E (Hematoxilina e Eosina). (Desenho morfológico do esôfago e tranqueia) Introduzimos a lâmina no microscópio para a visualização de suas partes epiteliais e consequentemente fomos alternando sua objetivas para melhor visualizar suas camadas. Para cada objetiva 40x 100x 400x colocamos no papel em (desenho) sua camadas. Objetiva (vermelha) 40x Objetiva (amarela) 100x Objetiva (azul) 400x RESULTADOS E DISCUSSÃO O objetivo desta aula prática experimental foi entender como é feita a manipulação com microscópio e conhecer um pouco sobre suas lentes. Com persistência conseguimos visualizar as camadas de tinta e principalmente as camadas epiteliais (Esôfago e tranqueia) Matérias usados: Microscópio, lâmina de tinta, lâmina de Esôfago e Tranqueia, lamínula, lamínula. Biópsia e Coloração H&E (Hematoxilina e Eosina) (Aula -Roteiro 4) Introdução A biópsia é um procedimento cirúrgico no qual se colhe amostra de tecidos ou células para posterior estudo em laboratório, tal como a evolução de determinada doença crônica. O material removido deve ser enviado para a análise microscópica. A técnica de coloração de Hematoxilina e Eosina é utilizada para aumentar o contraste nas estruturas em uma imagem microscópica de cortes histológicos e preparados de células. Hematoxilina e Eosina é a principal coloração histológica utilizada na rotina laboratorial. A Hematoxilina é um corante basofílico que vai reagir com estruturas acidas cora bem a DNA\RNA no núcleos e ribossomos em tons azul e roxo, já a Eosina é um corante acidofílico com PH ácido vai reagir com estruturas básicas que cora estruturas eusofílicas em tons de rosa. Estruturas eosinofílicas são geralmente compostas de proteínas extracelulares no citoplasma de células ou de proteínas extracelulares como colágeno que vai ser corado com as mesmas cores. Tipos de biópsia Incisional: remove uma pequena parte da lesão Excisional: para lesões grandes, que estejam em regiões de risco quando o diagnóstico definitivo é requerido antes de planejar a remoção completa ou outros tipos de tratamentos. PAAF: realizada com uma pequena agulha Peças cirúrgicas: Órgão ex: braço, perna, estomago. Citologia: Papanicolau, material de superfície. Observação: O material precisa estar em um frasco apropriado e fixado em substancia química (formol 10%) (volume de formol 20x mais do que o volume do tecido) Com uma requisição do material com nome completo, data da biópsia, idade...] Etapas da técnica histológica de rotina 1- Seleção do material 4 -Desidratação do material (da peça) 2- Anestesia e obtenção do material 5 - Diafanização 3- Fixação do material (fragmento de órgão) 6- Impregnação 7 - Emblocamento ou inclusão 9- Desparafinação e coloração 8 - Microtomia e banho-maria 10 - Montagem da lâmina. Observação: Finalizamos simulando (pescaria) a peça já preparada e pronta para lâmina, com uma letra de jornal sobre a superfície da água, inserindo a lâmina em 45 graus, para que a letra fixe na lâmina e tenhamos uma visualização completa do material no microscópio. RESULTADOS E DISCUSSÃO: As analises tem excelentes resultados quando feitos com boas técnicas e bons equipamentos, os métodos precisam ser seguidos para uma indicação satisfatória das células, a coloração é fundamental através da coloração é possível observar as diversas células. Tivemos como objetivo aprender a técnica da coloração H&E. Material usado – Lamina, lamínula, folha de jornal, recipiente com água. Equipamento – Microscópio Células Sanguíneas (Aula- Roteiro 5) Introdução: O sangue é um tecido conjuntivo liquido, que flui pelas veias, artérias e capilares sanguíneos dos animais É responsável pelo transporte de substancias como nutrientes, oxigênio, gás carbônico e toxinas. As células do sangue são glóbulos vermelhos (eritrócitos ou hemácias) os glóbulos brancos leucócitos e as plaquetas. Células do sangue Glóbulos vermelhos: (eritrócitos ou hemácias são células sanguíneas que carregam hemoglobina. Eles são responsável pelo transporte de oxigênio dos pulmões. Glóbulos brancos: (Leucócitos) são responsáveis pela defesa do nosso organismo contra agentes infecciosos como vírus ou bactérias. Plaquetas: São fragmentos de grandes células que compõem o sistema de coagulação do sangue e age na prevenção de hemorragias. Coleta dos tubos a Vácuo 1. Azul (citrato de sódio) O Citrato de Sódio Tamponado é utilizado para prova de coagulação em amostras. 2. Amarelo/vermelho (ativador de coágulo) Contém ativador de coágulo jateado na parede do tubo que faz com que o processo de coagulação seja acelerado e gel separador, para obtenção de um soro com melhor qualidade 3. Verde (heparina) Estes aditivos são anticoagulantes que ativam as enzimas antiplaquetárias, bloqueando a cascata de coagulação 4. Lilás/roxo (EDTA) Possui EDTA jateado na parede do tubo e são utilizados em bancos de sangue 5. Cinza (fluoreto de sódio/EDTA). Utilizados na dosagem de glicose, lactato e hemoglobina glicada no plasma. https://kasvi.com.br/tubos-de-coleta-vacuo-analise-sangue-cores-beneficios/ RESULTADOS E DISCUSSÃO Pode- se concluir que o sangue é uma estrutura diversificada, para cada tipo de célula a um componente diversificado. É o principal meio de transporte, portanto o sangue é um tipo especial de tecido conjuntivo que pode ser dividido em duas partes: plasma (parte liquida) e células sanguíneas (elementos figurados do sangue) Claramente vimos também a importância de cada tubo e suas cores para cada tipo coleta laboratorial especificada. Coloração H&E (AULA -Roteiro 6) Introdução A técnica de coloração histológica permitem que cortes transparentes fiquem visíveis na microscopia óptica de luz e que estruturas celulares especificas fiquem evidenciadas. Assim uma boa lamina histológica é essencial para o atendimento das estruturas teciduais e celulares. 1- Seleção do material 4 -Desidratação do material (da peça) 2- Anestesia e obtenção do material 5 - Diafanização 3- Fixação do material (fragmento de órgão) 6- Impregnação 7 - Emblocamento ou inclusão 9- Desparafinação e coloração 8 - Microtomiae banho-maria 10 - Montagem da lâmina. Ex: Papanicolau A coloração de Papanicolau é uma técnica de coloração citológica para diferenciar células em esfregaços. Ela é usada principalmente em amostras citológicas de secreções corporais. A coloração deve exibir tons de todo espectro de cores vermelho, laranja, amarelo, verde, azul e violeta. Os padrões de cromatina se tornam bem visíveis e as células ficam transparentes, permitindo os espécimes mais grossos e com células sobrepostas. Os núcleos ficam com coloração azulada, e as células com queratina ou glicogênio ficam amareladas. RESULTADOS E DISCUSSÃO: Colocamos em discussão o qual importante seja a fixação do material, para que possa ser mantido a estrutura celular com o mínimo de alterações, evitando danos extrínsecos (microrganismos) Epitélio da Língua (Aula- Roteiro 7) Introdução: A superfície dorsal da língua é revestida por um epitélio pavimentoso estratificado queratinizado, apoiado sobre uma lâmina própria bastante vascularizada, constituída de tecido conjuntivo denso, A face da língua é caracterizada por apresentar um epitélio pavimentoso estratificado não queratinizado, apoiado em lâmina própria conjuntiva rica em vasos sanguíneos mais calibrosos. Epitélio da Língua: Introduzimos a lâmina no microscópio para visualizar cada estrutura para melhor cada camada epitelial. Visualizamos suas papilas línguais, tecido muscular estriado esquelético (objetiva 40x) (objetiva 100x) (objetiva 400x) mastócitos, que são encontrados em grande quantidade na língua. RESULTADOS E DISCUSSÃO: O objetivo desta aula foi esclarecer e visualizar cada camada do Epitélio da Língua, desenhando para que possamos gravar cada estrutura visualizada. Discutimos o quanto o epitélio é vascularizado e calibroso. Leucócitos (Glóbulo Branco) (Aula – Roteiro 8) Introdução Os leucócitos são células arredondadas e nucleadas do tamanho de 7 a 20 micrometros tituladas como glóbulos branco, pois ao contrário das hemácias ( glóbulos vermelhos) não possui pigmentos considerados unidades moveis do sistema protetor do corpo são formados em parte na medula óssea (Granulócitos, monócitos, linfócitos) e também no tecido linfático ( linfócitos e plasmáticos) uma vez formados são transportados pelo sangue para diversas ares do corpo de acordo com a necessidade individual de cada um. Granulócitos Eosinófilos: Possuem núcleo bi lobulado grânulos acidófilos, respondem a estímulos quimiotáticos, possuem ação semelhante aos neutrófilos, importantes nos processos alérgicos e parasitários - Basófilo: Possui forma esférica, tem tamanho de aproximadamente 10-15 µm, seu núcleo geralmente bi lobulado, raramente com três ou mais lóbulos. Citoplasma carregando de grânulos que contem histamina (vasodilatação) Constituem de 1% dos leucócitos, sobrevida de 1 a 2 anos. - Neutrófilos: São polimorfo nucleares possuem núcleo formados por 2 ou 5 lóbulos A célula jovem tem núcleo – não segmentado chamado de bastonete, na mulher o núcleo possui um pequeno apêndice, cromatina sexual. E os neutrófilos são importantes nos processos inflamatórios. Agranulócitos - Linfócitos: São células esféricas, possui o citoplasma azul pálido, núcleo ocupa quase toda célula, são as principais células do sistema imunológico - Monócito: São moveis e fagócitos são precursores dos Macrófagos, o macrófago é uma importante célula do sistema imunitário. Permanecem pouco tempo na circulação respondem a estímulos quimiotáticos. São células apresentadoras de antígenos (APC) RESULTADOS E DISCUSSÃO: Mitose e Meiose (Aula -Roteiro 9) Introdução Eventualmente as células necessitam se duplicar para dá origem a novas células: através da mitose e meiose. Podemos entender que a mitose a célula de duplica para dar origem a duas novas células estas são conhecidas como células filhas. E são idênticas uma da outra, todas são divididas por ciclos celulares. Mitose Ocorre nas células somáticas Uma divisão cromossômica e citoplasmática Resultam duas células filhas com 2n cromossomos Cel- filhas geneticamente idênticas a cel- mãe Ocorre em todas as fases. Interfase: Durante um tempo, acreditava-se que nada acontecia na célula entre o surgimento da célula e sua divisão. No entanto, nessa fase, a célula encontra-se em intensa atividade metabólica, sendo observado também o seu crescimento. A interfase é a fase mais longa do ciclo celular e dividi-se em três estapas: G1, S e G2 G1: nessa etapa, conhecida como “primeiro intervalo” S: nessa etapa, conhecida como “síntese”, ocorre a divisão do material genético G2: nessa etapa, conhecida como “segundo intervalo”, ocorre a síntese de proteínas, como a tubulina, que formará os micro túbulos do fuso mitótico, e RNA. Prófase - A prófase é a primeira fase da mitose e da meiose Metáfase - Nessa etapa, os cromossomos condensam-se em seu grau máximo Anáfase - Ocorre o rompimento dos centrômeros e as cromátides migram para os polos da célula em virtude do encurtamento das fibras do fuso Telófase - A telófase é a última fase da mitose, onde ocorre descondensação dos cromossomos, reorganização do nucléolo e reconstituição das organelas celulares. https://www.biologianet.com/biologia-celular/mitose.htm Meiose Ocorre nas células germinativas Uma divisão cromossômica Duas divisões citoplasmáticas Resultam 4 células filhas com n cromossomos Cel- filha geneticamente diferentes a cel- mãe É uma divisão reducional ou seja, uma diploide ira se dividir em quatro células haploides. Ela só pode ser dividida em meiose I e meiose II. Ela é dividida nas seguintes fases – prófase, metáfase, anáfase e telófase Meiose I Prófase I. Essa etapa pode ser dividida em cinco etapas. Metáfase I. Nesse momento, há cromossomos muito condensados e presos às fibras do fuso que se formaram durante a prófase I Telófase I. Os cromossomos começam a se descondensar, a membrana nuclear é refeita e os nucléolos reorganizam-se. Meiose II É muito semelhante a meiose, com a diferença de possuir apenas um lote de cromossomos duplicados. Prófase II. Nesse momento, os cromossomos se condensam e é formado o fuso Metáfase II, os cromossomos atingem seu maior grau de condensação. Eles prendem-se às fibras do fuso pelos centrômeros e alinham-se no plano equatorial da célula. Anáfase II, as cromátides irmãs são levadas para os polos. Vale destacar que nessa etapa ocorre a separação dos centrômeros. Telófase II, os cromossomos desespiralizam-se, os nucléolos surgem novamente e a carioteca reorganiza-se. Por fim, ocorre a citocinese II e a formação das células-filhas https://www.educamaisbrasil.com.br/enem/biologia/meiose RESULTADOS E DISCUSSÃO Vimos que na mitose as células se dividem e formam copias idênticas que passam por quatro fases prófase, metáfase, anáfase e telófase. Na meiose as células diploides através de duas divisões consecutivas geram quatro células filhas haploide, que vai ter dos cromossomos da célula mãe. O objetivo foi entender que este processo faz parte do ciclo celular que através desde processo as células unicelulares se reproduzem e se multicelulares se multiplicam.
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