Diagnóstico laboratorial de Infecções Parasitárias.

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INSTITUTO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE
CURSO DE FARMÁCIA 
ROTEIRO PARA AULAS PRÁTICAS 
DISCIPLINA: 
Diagnostico laboratorial de Infecções Parasitárias
	Curso: FARMÁCIA
Disciplina: Diagnostico laboratorial de Infecções Parasitárias
Título da Aula: Exame coproparasitológico para pesquisa de protozoários (Sheater ou Faust). 
	AULA
1
Roteiro 1
OBJETIVO: Mostrar ao aluno a técnica de exame de fezes para pesquisa de protozoários. 
Técnica de Sheater: Exame coproparasitológico para pesquisa de protozoários.
Finalidade: Exame coproparasitológico qualitativo com princípio de centrífugo- flutuação para pesquisa de cistos e oocistos de protozoários intestinais.
Procedimento:
1- Utilizar 11 ml de solução B (Solução B corresponde 3 partes de solução A e 1 parte de água- a solução A é constituída por 1 Kg de açúcar em 781, 25 ml de água).
2- Pegar 1 g de fezes. 
3- Homogeneizar aos poucos os 11 ml de solução B no 1 grama de fezes em um copo plástico. 
4- Coar com tamis para outro copo. 
5- Preencher o falcon (tubo de centrífuga), equilibrar o peso de 2 tubos. 
6- Centrifugar por 10 minutos a 1600 rpm. 
7- Flambar a alça bacteriológica. 
8- Esfriar em recipiente com água. 
9-Pegar uma gota da flutuação. 
10- Pingar uma gota na lâmina. 
11- Cobrir a lâmina com lamínula.
12- Levar ao microscópio para leitura de 100x.
Técnica de Faust: 
Procedimento:
1- Pegar 1 g de fezes. 
2- Homogeneizar 1 grama de fezes em 10 ml de água em um copo plástico. 
3-Coar com tamis para outro copo. 
4-Colocar a suspensão no falcon (tubo de centrífuga), equilibrar o peso em 2 tubos. 
5-Centrifugar 3x a 2500 rpm durante 1 minuto, descartar o sobrenadante entre uma centrifugação e outra. 
6-Homogeneizar tudo com 10 ml de sulfato de zinco. 
7-Centrifugar por 1 minuto a 2500 rpm. 
8- Manter o tubo em repouso por 5 minutos. 
9-Coletar 1 gota do sobrenadante com alça bacteriológica. 
10- Colocar em uma lâmina. 
11- Corar com 1 gota de lugol. 
12-Observar no microscópio em aumento de 100 x.
	Materiais
	Quantidade
	Solução B de açúcar [3 partes de A (solução A consta de 1 kg de açúcar para 781,25 ml de água) e 1 parte de água].
	
	Copos descartáveis
	
	Coador (tamis)
	
	Palitos de madeira
	
	Tubo de centrífuga (falcon de 15 ml) e centrífuga.
	
	Alça bacteriológica
	
	Lâminas e lamínulas.
	
	Fezes.
	
	Sulfato de zinco a 33%.
	
	Lugol
	
Descarte do material utilizado conforme Normas Internacionais de Segurança.
	Curso: FARMÁCIA
Disciplina: Diagnostico laboratorial de Infecções Parasitárias
Título da Aula: Identificação de lâminas de protozoários, helmintos e artrópodes em Lâminas (microscópio).
	AULA 
1
Roteiro 2
OBJETIVO: Mostrar ao aluno a identificação dos protozoários em lâminas prontas.
Lâminas de protozoários:
Procedimento:
1-) Colocar a objetiva de menor aumento na direção da luz através de movimento do revólver. 
2-) Colocar a lâmina (com lamínula para cima) na platina. 
3-) Encostar o condensador na lâmina e ligar a luz. 
4-) Movimentar o parafuso macrométrico até focalizar o parasito em imagem nítida. 
5-) Aperfeiçoar o foco com o parafuso micrométrico e observar a imagem com as respectivas estruturas indicadas pelo professor (que podem ser detectados neste aumento). 
6-) Repetir o processo utilizando as outras objetivas até a objetiva de 40X, porém, nesta não utilizar mais o parafuso macrométrico para foco e sim o parafuso micrométrico. 
7-) Ajustar a iluminação se necessário.
	MATERIAS
	QUANTIDADE
	
	
	Lâminas dos parasitas (laminário UNIP)
	
	Microscópio
	
	Lenços de papel
	
	Curso FARMÁCIA
Disciplina: Diagnostico laboratorial de Infecções Parasitárias
Título da Aula: Exame coproparasitológico para pesquisa de helmintos I (Willis). 
	AULA
2
Roteiro 1
OBJETIVO: Mostrar ao aluno a técnica de exame de fezes para a pesquisa de ovos de helmintos. 
Técnica de Willis Moolay: Exame coproparasitológico para pesquisa de ovos de helmintos.
Finalidade: Exame coproparasitológico qualitativo com princípio de flutuação para pesquisa de ovos de helmintos.
Procedimento:
1-) Pegar 3,0 gramas de fezes.
2-) Homogeneizar 3,0 gramas de fezes em 40 ml de solução saturada de NaCl (35%) em um copo plástico. 
3-) Coar com tamis e gaze para outro copo.
4-) Sobre uma placa de Petri, preencher um borel (tubo plástico de filme) com a suspensão de fezes coado, até formar um menisco convexo (solução deve ultrapassar levemente a parte superior do borel) na borda do borel. 
5-) Colocar a lamínula sobre o menisco, com cuidado para não formar bolhas. 
6-) Deixar a lamínula em repouso de 10 a 15 minutos. 
7-) Arrastar a lamínula para cima da lâmina. 
8-) levar ao microscópio para leitura de 10x e 40x
	Materiais
	Quantidade
	Solução hipersaturada de cloreto de sódio (35%, sendo 350g de sal para 1 litro de água).- Usar 40 ml aproximadamente. 
	
	Copos descartáveis.
	
	Coador (tamis).
	
	Gaze.
	
	Palitos de madeira.
	
	Borel.
	
	Placa de Petri.
	
	Lâminas e Lamínulas.
	
	Fezes
	
Descarte do material utilizado conforme Normas Internacionais de Segurança.
Atividade de Fixação
1 – Discutir sobre as técnicas utilizadas nesta aula, seus princípios de diagnóstico e quais ovos de parasitas podemos identificar.
2 – Estabeleça uma orientação ao paciente como deve ser coletada a amostra de fezes e o encaminhamento dela até a laboratório.
	Curso: FARMÁCIA
Disciplina: Diagnostico laboratorial de Infecções Parasitárias
Título da Aula: Exame coproparasitológico direto a fresco 
	AULA
3
Roteiro 1
OBJETIVO: Mostrar ao aluno a identificação de trofozoítos, cistos e oocistos de protozoários e de ovos e larvas de helmintos.
Procedimento:
1-Colocar duas a três gotas de salina a 0,85% em uma lâmina de vidro.
2-Tocar com a ponta de um palito em vários pontos das fezes, transferindo uma pequena porção para a lâmina de microscopia.
3- Espalhar as fezes, fazendo um esfregaço, colocar uma lamínula e examinar ao microscópio. OBS: A espessura do esfregaço não deve impedir a passagem de luz. 
4- Colocar a objetiva de menor aumento na direção da luz através de movimento do revólver. 
5-Colocar a lâmina (com lamínula para cima) na platina. 
6-Encostar o condensador na lâmina e ligar a luz. 
7-Movimentar o parafuso macrométrico até focalizar o parasito em imagem nítida. 
8- Aperfeiçoar o foco com o parafuso micrométrico e observar a imagem das respectivas estruturas indicadas pelo professor (que podem ser detectados neste aumento). 
9- Ajustar a iluminação.
	MATERIAS
	QUANTIDADE
	Fezes
	
	Lâminas e lamínulas
	
	Microscópio
	
	Lenços de papel
	
	Solução salina a 0,85%
	
	Pipetas Pasteur ou palitos de madeira
	
Descarte do material utilizado conforme Normas Internacionais de Segurança.
	Curso: FARMÁCIA
Disciplina: Diagnostico laboratorial de Infecções Parasitárias
Título da Aula: Exame coproparasitológico para pesquisa de helmintos (Hoffman).
	AULA 
3
Roteiro 2
OBJETIVO: Proporcionar a realização da técnica de exame de fezes para pesquisa de ovos “pesados” de helmintos, em especial da classe Cestoda e Trematoda.
Técnica de Hoffman: Exame coproparasitológico para pesquisa de ovos “pesados” de helmintos.
Finalidade: Exame coproparasitológico qualitativo com princípio de sedimentação para pesquisa de ovos de helmintos. 
Procedimento:
1- Pegar 5 a 10g de fezes. 
2-Homogeneizar estas fezes em 250 a 300 ml de água. 
3-Filtrar a suspensão de fezes para um cálice de sedimentação e aguardar cerca de 25 minutos. 
4-Desprezar 2/3 do sobrenadante. 
5- Acrescentar água até a borda do cálice. 
6- Aguardar cerda de 25 minutos. 
7-Repetir o procedimento, até a solução ficar “limpa”. 
8-Pipetar o sedimento para uma lâmina. 
9-Cobrir a mesma com lamínula. 
10- Observar no microscópio com aumento de 40x.
	Materiais
	Quantidade
	Água.
	
	Copos descartáveis.
	
	Coador (tamis)
	
	Gaze.
	
	Palitos de madeira.
	
	Cálice de sedimentação.
	
	Pipeta Pasteur.
	
	Lâminas e Lamínulas.
	
	Fezes.
	
	Microscópio.
	
Descarte do materialutilizado conforme Normas Internacionais de Segurança.
	Curso: FARMÁCIA
Disciplina: Diagnostico laboratorial de Infecções Parasitárias
Título da Aula: Exame coproparasitológico para pesquisa de larvas.
	AULA
4
 Roteiro 1
 
OBJETIVO: Mostrar ao aluno a identificação de larvas de parasitas intestinais utilizando a técnica de Rugai.
Procedimento:
1- Retirar a tampa do recipiente que acondiciona as fezes e envolvê-lo em ter gazes, fazendo uma pequena “trouxa”. 
2- Colocar o material assim preparado, (trouxa) com a abertura voltada para cima, num cálice de sedimentação, preso por um barbante e um palito atravessado no copo de sedimentação contendo água aquecida (45ºC), em quantidade suficiente para entrar em contato com as fezes somente na parte de baixo da “trouxinha.”
 3- Deixar em repouso por uma hora
 4- Pegar o sedimento no fundo do cálice, com ajuda de uma pipeta.
 5- Colocar 1 gota deste sedimento em uma lâmina de vidro, acrescentar 1 gota de lugol e recobrir com uma lamínula
 6- Colocar a objetiva de menor aumento na direção da luz através de movimento do revólver. 
7- Colocar a lâmina (com lamínula para cima) na mesa de platina do microscópio 
8- Encostar o condensador na lâmina e ligar a luz. 
9- Movimentar o parafuso macrométrico até focalizar o parasito em imagem nítida. 
10-Aperfeiçoar o foco com o parafuso micrométrico e observar a imagem das respectivas estruturas (larvas) indicadas pelo professor. 
11- Ajustar a iluminação se necessário.
	MATERIAS
	QUANTIDADE
	
	
	Lâminas e lamínulas de vidro
	
	Microscópio
	
	Lenços de papel
	
	Cálices de sedimentação
	
	Pipetas Pasteur descartável
	
	Gaze
	
	Fezes ou terra fresca e úmida de jardim
	
	Barbante
	
	Água aquecida exatamente a 45ºC
	
	Lugol 
	
Descarte do material utilizado conforme Normas Internacionais de Segurança.
Atividade de Fixação
1- Sobre a Técnica de Rugai realizada nesta aula prática, qual seria a melhor forma de orientar a paciente sobre a coleta da amostra biológica.
2- Correlacione estas técnicas realizadas em aula prática e quais parasitas podemos identificar em cada uma delas, baseado no ciclo de vida do parasita.
3- Elabore um laudo clínico laboratorial padrão para descrever os parasitas humanos diagnosticados por todas as técnicas vistas em nossas aulas práticas.