Relatório prática_ Biologia Molecular_01

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RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS - EaD 
 
Biologia 
Molecular 
 
 
DATA: 
 
18/11/2021 
VERSÃO:01 
 
RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS: Biologia Molecular 
NOME:Ailton Gomes de Miranda MATRÍCULA:28293105 
CURSO:Farmácia POLO:itaqua SP 
PROFESSOR(A) ORIENTADOR(A):Juliana Gonçalves 
 
TEMA DE AULA: EXTRAÇÃO DE DNA 
 
 
EXTRAÇÃO DE DNA DE MORANGO 
Descrever detalhadamente o que ocorreu em cada etapa da extração 
Extraindo DNA do morango: 
A atividade prática de extrair o DNA de morango é bastante comum nas aulas 
de biologia quando vamos falar de genética, mas o que essa atividade de fato 
pode ajudar no ensino? 
Materiais utilizado 
1 saco plástico tipo “zip loc” 
3 morango (fresco ou congelado) 
30 ml de solução de extração de DNA (veja como fazer abaixo) 
Aparato filtrante: 1 filtro de papel com funil ou 1 filtro de pano ou gaze 
Álcool etílico gelado (pode ser álcool 70º g.l.) 
1 tubo de ensaio limpo1 bastão de vidro ou 1 palito de madeira (tipo pau-de-
laranjeira, para manicure, encontrado em drogarias) 
O saquinho tipo “zip loc” deve ser bem espesso. 
Quanto mais espesso mais resistente e geralmente os saquinhos utilizados 
para embalar comidas no freezer são apropriados. 
 
 
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18/11/2021 
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Os morangos podem ser frescos ou congelados.) 
15 gramas de NaCl (sal de cozinha) = 2 colheres de chá 
150 ml de água (H2O), de preferência mineral 
50 ml de detergente sem corantes) 
O álcool etílico (etanol) deve ser de, no mínimo, 70º g.l. e deve estar gelado. 
Coloque um morango, previamente lavado e sem as sépalas (as folhinhas 
verdes) em um saco zip loc. 
Esmague o morango com o punho por, no mínimo, 2 minutos. 
Adicione a solução de extração ao conteúdo do saco.Misture tudo, apertando 
com as mãos, por 1 minuto. 
Derrame o extrato no aparato filtrante e deixe filtrar diretamente dentro do 
tubo. 
Não encha totalmente o tubo (encha somente até 1/8 do seu volume total). 
Derrame devagar o álcool gelado no tubo, até que o mesmo esteja cheio pela 
metade. 
Mergulhe o bastão de vidro ou o pau-de-laranjeira dentro do tubo no local onde 
a camada de álcool faz contato com a camada de extrato. 
Mantenha o tubo ao nível dos olhos para ver o que está acontecendo. 
. 
O DNA está no núcleo da célula 
E as membranas celulares são formadas por uma dupla camada lipídica. 
Todos os organismos vivos armazenam todas as suas informações genéticas 
codificadas e contidas nos ácidos nucleicos (DNA, ácido dioxirribonucleico e 
RNA ácido ribonucleico). 
A molécula de DNA é conhecida como a molécula da hereditariedade. 
https://pontobiologia.com.br/como-funciona-o-teste-de-paternidade/
 
 
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Pois dentro dela estão contidas todas as informações genéticas das quais o 
novo indivíduo necessita para ser formado. 
Na molécula de DNA existem duas longas fitas de nucleotídeos que se enrolam 
formando uma estrutura de dupla hélice. 
Essa molécula se auto-reproduz e sintetiza o RNA que é uma fita simples que 
atua na síntese de proteínas. 
Cada nucleotídeo é composto por um açúcar, uma base e um fosfato, o açúcar 
é uma pentose do tipo desoxirribose no DNA e ribose no RNA. 
As bases são de 4 tipos A (adenina), C (citosina), T (timina ), G (guanina) para o 
DNA.No RNA a base T(timina) é substituída pela base U (uracila). 
Para as duas fitas se ligarem e enrolarem formando uma dupla hélice, as bases 
se conectam através de ligações formando pontes de hidrogênio entre as 
bases complementares (A e T, G e C no caso do DNA e no caso do RNA A e U). 
Quando ocorre a duplicação do DNA uma enzima separa as duas fitas da dupla 
hélice. 
E a informação contida no DNA é transferida para uma molécula de RNA, essa 
molécula é muito semelhante ao DNA. 
Porém é constituída de um único filamento e sua função é reproduzir a 
sequência de um dos filamentos do DNA, atuando como intermediário na 
construção de uma proteína. 
Cada uma das hélices do DNA serve como molde para a construção do novo 
DNA. 
Por que utilizamos o morango para extrair o DNA 
Uma das razões de se trabalhar com morangos é que por serem muito macios 
e fáceis de homogeneizar, são mais eficientes para se extrair o DNA. 
Morangos maduros também produzem pectinases e celulases – enzimas que 
degradam a pectina e a celulose (respectivamente), presentes nas paredes 
celulares das células vegetais. 
Além disso, os morangos possuem muito DNA. 
 
 
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Eles possuem 8 cópias de cada conjunto de cromossomos, o que facilita a 
extração. 
A solução para extrair DNA também conhecida como solução de lise, é assim 
denominada devido a sua função de rompimento da membrana plasmática e 
outras membranas. 
Quanto mais os morangos forem macerados maior será sua superfície de 
contato com a solução de lise e melhor a ação da solução sobre as células. 
Isto permitirá a liberação de uma maior quantidade de moléculas de DNA e, 
portanto, um bom rendimento. 
As células são fragmentadas e o DNA é separado do conteúdo lipídico das 
membranas da célula e dos organitos. 
Em seguida o DNA é separado das proteínas. 
O detergente/ permite a desestruturação das moléculas de lipídios das 
membranas. 
Com a ruptura das membranas o conteúdo celular, incluindo as proteínas e o 
DNA, soltam-se e dispersam-se na solução. 
A adição do sal (NaCl) proporciona ao DNA um ambiente favorável para a 
extração de DNA. 
O sal contribui com íons positivos que neutralizam a carga negativa do DNA. 
Numerosas moléculas de DNA podem coexistir nessa solução. 
E o álcool gelado torna possível a visualização das moléculas, que se agrupam 
formando um monte de filamentos muito finos tipo fios de algodão. 
Isso ocorre devido ao fato de a proteína ser insolúvel em álcool, ou seja, ela 
não se dissolve no álcool. 
O DNA é menos denso que a água e a mistura aquosa dos restos celulares. 
O DNA do morango que vemos é igual a representação de dupla hélice de 
DNA. 
E que a molécula de DNA pode ser extremamente longa, mas seu diâmetro é 
de apenas 2 nanômetros. 
 
 
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Outro aspecto que precisa de muita atenção é para não confundir a pectina 
com o DNA. 
O morango é muito rico em pectina, e por isso não propicia uma extração de 
DNA tão limpa quanto outros vegetais, 
A pectina apresenta consistência de geleia quando retirada com um bastão de 
vidro, pipeta Pasteur ou palito de dente, além de apresentar bolhas. 
O DNA forma filamentos finíssimos. 
Anexar uma foto após conclusão do procedimento 
 
Foto do DNA de morango 
EXTRAÇÃO DE DNA DE HUMANO OU PLASMIDIAL 
As bactérias são seres procariontes que possuem plasmídeo e uma parede 
celular diferente para cada tipo de bactéria. As bactérias Gram positivas 
possuem maior quantidade de peptidoglicano em suas paredes celulares, 
tornando a parede mais espessa. As Gram negativas possuem menor 
quantidade de peptidoglicano tornando-as mais frágeis. Os plasmídeos são 
muito utilizados na engenharia genética como vetores de clonagem, assim os 
avanços na utilização do DNA plasmidial tem aumentado a necessidade de se 
obter um DNA puro e de qualidade. O objetivo deste trabalho é comparar a 
extração do DNA plasmidial de bactérias Gram positivas e Gram negativas. O 
trabalho foi realizado através de culturas de bactérias Gram positivas 
Staphylococcus saprophyticus e Staphylococcus epidermidis e Gram 
 
 
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negativas Salmonella e Escherichia coli. O DNA foi extraído e revelado em gel 
de agarose a 1,2%. Foi verificado que a extração de DNA é mais eficiente com 
as bactérias Gram negativas devido a sua parede celularser mais fina, 
conferindo maior facilidade na lise celular. 2. INTRODUÇÃO Sabe-se que as 
bactérias são seres unicelulares e foram identificadas inicialmente por volta de 
1970 por Van Leeuwenhoek, mas só a partir do século XIX, foi observada sua 
capacidade de causar infecções1 . São organismos procariontes e além de não 
possuírem núcleo típico, o cromossomo bacteriano difere do cromossomo 
humano. Possuem plasmídeo e uma parede celular característica para cada 
tipo de bactéria. As bactérias Gram positivas possuem uma maior quantidade 
de peptidoglicano em sua parede celular, dando espessura a parede. A camada 
de peptidoglicano da parede celular das bactérias Gram negativas 
correspondem a somente 10% do peso da parede celular e são mais 
complexas, pois possuem uma membrana externamente à camada de 
peptidoglicano, ou seja, entre a membrana citoplasmática e a membrana 
externa2 . Os plasmídeos são constituídos por DNA circular e se encontram 
separados do DNA cromossômico da célula. São muito utilizados na 
engenharia genética como vetores de clonagem, por serem considerados 
agentes de transferência de genes entre bactérias, assim, os plasmídeos fazem 
transporte de genes ou fragmentos de DNA que serão clonados para dentro da 
célula hospedeira3 . Os avanços na utilização do DNA plasmidial tem 
aumentado a necessidade de se obter um DNA puro e de qualidade. O 
isolamento de DNA cromossômico ou plasmidial é um procedimento 
fundamental para a clonagem molecular. 3. OBJETIVO O objetivo deste 
trabalho é comparar a extração do DNA plasmidial de bactérias Gram positivas 
e Gram negativas. 4. METODOLOGIA Para a realização deste trabalho foram 
utilizadas bactérias Gram positivas Staphylococcus saprophyticus e 
Staphylococcus epidermidis e Gram negativas Escherichia coli e Salmonella. 
As bactérias foram cultivadas em meio de cultura TSB e mantidas overnight 
em estufa a 37°C. Para a extração do DNA as culturas foram centrifugadas e ao 
pellet foi adicionado 200 µl da solução I de TRIS 25 mM, EDTA 10 Mm e Glicose 
50 mM, as amostras foram homogeneizadas. Foi adicionado 400 µl da solução 
II composta por NaOH 200 mM e SDS 1%. Finalmente, foi adicionada a terceira 
solução composta por acetato de potássio 3 M pH 5,5 e ácido acético glacial. 
Após isso centrifugou-se à 10.000 RPM por 10 minutos. O DNA foi precipitado 
com 600 µl de Isopropanol e foi adicionado 1 mL de ETOH 70% para lavagem 
de sais. A eletroforese para verificação do DNA obtido foi realizada em gel de 
agarose a 1,2%. 5. DESENVOLVIMENTO O trabalho foi realizado com duas 
culturas de bactérias Gram positivas e duas de Gram negativas em meio 
líquido para a preparação de pellets bacterianos utilizados para a extração do 
DNA. Foi utilizado um controle de DNA genômico para comparação entre o 
DNA genômico e plasmidial a ser extraído. Por último o DNA foi visualizado em 
gel de agarose a 1,2%. 6. RESULTADOS PRELIMINARES De acordo com os 
resultados obtidos até o momento permitiu-se observar que foi possível a 
 
 
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extração do DNA plasmidial, obtendo uma maior eficiência de extração com as 
bactérias Gram negativas. Segundo Baratto e Megiolaro 2012, em estudo 
comparando diversos protocolos para extração de DNA usando bactérias 
Gram positivas e Gram negativas, obtiveram resultados semelhantes, onde foi 
possível uma melhor extração com as bactérias Gram negativas, mostrando 
que, devido a menor espessura da parede celular existe uma maior facilidade 
em romper a parede e liberar o DNA4 . Com base nos resultados obtidos 
podemos deduzir que a menor quantidade de DNA das bactérias Gram 
positivas deveu-se ao fato de que as mesmas possuem uma camada mais 
espessa de peptidoglicano em suas paredes celulares, esta característica 
dificulta a lise da parede, o que mostra a necessidade de padronização de 
metodologias mais elaboradas. Já nas Gram negativas a camada de 
peptidoglicano é mais fina, o que consequentemente confere uma maior 
fragilidade na quebra e permite-se obter um DNA em maior quantidade