curva de calibracao de beta caroteno-espectrofotometro

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Ana Emylli 2012
Carotenoídes totais
Metodologia:
1) Preparação das Amostras:
Pesar a amostra em balão volumetrico de 50 ml. Diluir a amostra (ver nota 01)contendo os Carotenóides em hexano até 100 ml. 
Nota 01: ocorre mudanças de diluição na concentração.
Buriti
Concentração de β-caroteno (amazonoil).
30mg/100g de polpa
118mg/100g de óleo
Pesar 2,1g de óleo extraído da polpa em balão volumétrico de 50 ml, diluir a amostra em 50 ml de Hexano.
2) Curva de Calibração: 
2.1 Primeira Curva de Calibração
Solução padrão: 20mg /100ml de Hexano
Solução mãe: 10 mg β-caroteno/50ml hexano
	Fator de Diluição
	Concentração
mg/ml
	Volume da solução-mãe ml
	1
	0,2
	10
	
	0,1
	5
	
	0,05
	2,5
	
	0,033
	1,7
	
	0,025
	1,25
	
	0,02
	1
 
OBS.: Não foi possível fazer a curva de calibração, pois os valores de absorbância não variaram nesse sistema. Para tanto deve-se fazer outras diluições.
2.2 Segunda Curva de Calibração
Solução padrão: 40mg /100ml de Hexano
	Fator de Diluição
	Concentração
mg/ml
	Volume da solução-mãe ml
	1
	0,4
	50
	
	0,2
	25
	
	0,04
	5
	
	0,00016
	2
	
	0,008
	1
	
	0,004
	0,5
	
	0,003
	0,3
	
	0,002
	0,25
3) Leitura no Espectofotômetro:
Fazer a Leitura a 450 nm, região de maior absorbância para a amostra diluída neste solvente ( DAVIES, 1976) em espectrofotômetro UV/visível. Calcular a concentração de Carotenoídes totais em termos de β-Caroteno, utilizando uma curva padrão, preparada com 40 mg de β-Caroteno/Sigma, 95% de pureza, diluída em 100 ml de hexano. Dessa solução serão tomadas alíquotas para seis concentrações diferentes, e suas absorbâncias lidas a 450 nm. O teor de Carotenoídes totais ( CT ), em m/g será obtido mediante a equação:
Sendo V, o volume total (ml) m, a massa de amostra (g),, a curva absortividade, obtida da curva padrão, d, o fator de diluição da amostra extraída para leitura.
A = Absorbância, d = fator de diluição, ε = curva de calibração.
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