Microscopia: Ampliando o Mundo Microscópico

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MICROSCOPIA 
É o uso de microscópios em todas as suas 
várias formas 
•Marco no estudo dos microrganismos 
 
•Instrumento mais utilizado em um 
laboratório de microbiologia 
 
•Podem ampliar de 100 a centenas de 
milhares de vezes o tamanho original 
Microscópio de Robert Hooke 
Duas categorias de Microscópios 
•Microscópio luminoso ou óptico: usam um 
sistema de lentes para direcionar o caminho 
que um feixe de luz percorre, entre o objeto 
a ser estudado e o olho 
 
•Microscópio eletrônico: em vez de usar uma 
fonte de luz e um conjunto de lentes, utiliza 
um feixe de elétrons controlados por um 
sistema de campo magnético 
MORFOLOGIA 
•TAMANH
O 
 
•FORMA 
 
•ARRANJO 
diplococos 
 
diplococos 
 estreptococos 
 
estreptococos 
 
estafilococos 
 
bacilos 
 
bacilos 
 
espirilos 
 
espiroquetas 
Microscópio Luminoso ou Óptico 
•Produzem uma 
ampliação máxima de 
cerca de 1000 vezes o 
tamanho original 
 
•Existem lentes: 
condensador, objetiva e 
oculares 
A combinação do sistema de lentes da objetiva e o 
sistema de lentes oculares produz as seguintes 
ampliações: 
Designação Ampliação Ampliação Ampliação 
Objetiva Objetiva Ocular Total 
baixo poder 10 10 100 
alto poder 40 10 400 
 imersão 100 10 1000 
Percurso da luz através de um microscópio óptico 
Poder de Resolução 
•É função da luz e da abertura do 
sistema de lentes 
 
•Alto poder de resolução significa uma 
melhor visualização de características 
estruturais específicas das células 
 
•Poder de resolução 0,25 µm 
Brilho 
Foco 
Resolução 
 
 
Contraste 
Modalidades de Observação 
Microscopia de Campo claro 
•Utiliza uma fonte de luz direta semelhante a uma 
lâmpada de luz ou à luz do dia 
•Os raios de luz que incidem em um objeto são 
desviados e então refocalizados pelas lentes 
objetivas 
•É utilizado para observação de materiais corados, 
geralmente entre lâmina e lamínula 
•Ampliação máxima : 
1.000 a 2.000 
 
•Aplicações: 
Determinar características morfológicas 
grosseiras de bactérias, leveduras, bolores, 
algas e protozoários 
Fotomicrografia da levedura S. cerevisiae em 
microscópio óptico de campo claro 
Microscopia de Campo escuro 
•Utiliza um microscópio luminoso equipado com uma 
objetiva e um condensador especial para iluminar os 
microrganismos em uma amostra, contra um fundo 
escuro 
• É utilizada para material de tamanho muito 
pequeno que sejam muito transparentes e 
apresentam pouco contraste para serem observados 
em campo claro 
 
•Ampliação máxima : 
1.000 a 2.000 
 
•Aplicações: 
Determinar microrganismos que exibem 
algumas características morfológicas 
especiais quando vivos e em suspensão 
fluida, por ex. espiroquetas 
Fotomicrografia da levedura S. cerevisiae 
em microscópio óptico de campo escuro 
Microscopia de Fluorescência 
•É utilizado em hospitais e laboratórios clínicos, 
identicam facilmente os microrganismos patogênicos 
•O espécime a ser estudado deve ser previamente 
marcado com algum composto fluorescente. Somente a 
luz emitida pelo objeto é observada, ficando desse 
modo brilhante com fundo negro 
•Técnica do anticorpo fluorescente ou 
imunofluorescência 
•Ampliação máxima : 
1.000 a 2.000 
 
•Aplicações: 
Determinar técnicas de diagnóstico em que o 
corante fluorescente fixado ao organismo 
revela a sua identidade 
Células da bactéria filamentosa corada com 
corante fluorescente 
Microscopia de Contraste de fase 
•Utiliza um microscópio luminoso modificado que 
permite maior contraste entre materiais de 
espessuras ou densidades diferentes 
•Com este método, os materiais mais densos 
aparecem claros, enquanto partes das células que 
têm densidade próxima à da água aparecem 
escuras 
•Ampliação máxima : 
1.000 a 2.000 
 
•Aplicações: 
Exame de estruturas celulares em 
microrganismo maiores e vivos, por ex. 
leveduras, algas, protozoários e algumas 
bactérias 
Fotomicrografia da levedura S. cerevisiae em 
microscópio óptico de contraste de fase 
Microscópio Eletrônico 
•Alto poder de resolução, devido aos feixes de 
elétrons utilizados 
 
•Poder de resolução é centenas de vezes maior que o 
luminoso 
 
•Existem várias técnicas disponíveis para essa 
microscopia, incluindo métodos de coloração que 
utilizam metais pesados e substâncias radioativas 
•Ampliação máxima : 
200.000 a 400.000 
 
•Aplicações: 
Exame de vírus e das ultra-estruturas das 
células microbianas 
Microscopia eletrônica da S. cerevisiae 
Microscopia eletrônica de transmissão (MET) 
•Utilizam corantes, ou cortam os microrganismos em 
seções finas: os feixes de elétrons atravessam o 
espécime e a transmissão destes feixes forma uma 
imagem 
•Os metais pesados podem ser usados como corantes, 
fazendo com que algumas partes das células apareçam 
escuras porque os elétrons não podem atravessá-las 
Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV) 
•Um feixe de elétrons estreito se move para trás e 
para frente da superfície dos microrganismos, 
coberta com um filme fino de metal 
•Os padrões de elétrons são detectados por um 
dispositivo similar a uma câmera de televisão 
fornecendo uma visão tridimensional da superfície 
celular 
Preparo de Microrganismos para Microscopia Luminosa 
Existem dois métodos gerais utilizados para 
preparar espécimes microbiológicos: 
1º utilizar uma suspensão de microrganismo 
vivos em uma gota ou uma camada líquida 
 
2º uma camada fina do espécime é seca e 
corada, assim os microrganismos ficam 
fixados à superfície e apresentam-se 
corados para facilitar a visualização 
Principais Etapas do Preparo de um Espécime 
Microbiano Corado para Exame Microscópio 
 
1. Confeccionar um esfregaço, ou uma camada fina do 
espécime sobre a lâmina de vidro 
2. Fixar o esfregaço seco à lâmina, com o calor, para 
aderir à lâmina 
3. Coloração com um ou mais corantes 
Técnicas 
1)Técnicas entre lâmina e lamínula e gota 
pendente 
- Gota de fluído contendo os 
microrganismos em uma lâmina de vidro 
ou lamínula 
- Aplicação: estudo de morfologia, 
estrutura celular, motilidade ou 
variações celulares 
2) Técnicas de coloração 
*Coloração simples: esfregaço corado com uma solução de 
corante simples – mostra tamanho, forma e arranjo das 
células 
 
*Coloração diferencial: dois ou mais reagentes são 
utilizados no processo – diferença entre as células ou parte 
das células 
 
 **Coloração de Gram: corante principal é aplicado ao 
esfregaço e então tratado com reagente e contracorado, 
caracteriza as bactérias em Gram + ou Gram - 
Coloração com azul de metileno para evidenciar células viáveis de 
leveduras – células azuis estão mortas; células sem coloração são células 
vivas 
Coloração de Gram 
Gram positiva 
 Gram negativa