Anotaçoes de aula PARASITOLOGIA

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‘Métodos de colheita, preservação e processamento das amostras
Prof. Dra. Rosângela Maria Rodrigues
Aula introdutória: DIA 25/10/21
Principais parasitas que acometem o homem
· Exame parasitológico das fezes
· Artefatos presentes nas fezes que se assemelham a certas espécies de parasitas.
Estágios usuais de diagnostico
· Ovos e larvas de helmintos
· Cistos 
· Trofozoítos de protozoários (Amebas são caracterizada de acordo com a quantidade de núcleos)
· Oocistos – cryplosporidium – Toxoplasma gondii 
Colheita e Preservação da amostra Fecal
· Identificação dos parasitos
· Critérios morfológicos
· Colheita bem feita
· Preservação dos espécimes fecais
· Bolo fecal – Composto de fezes – mas pode ser encontrado (Sangue, Muco, Tecido morto) 
· Colheita Tipo de recipiente (boca larga) – volume (20 a 30 g) – Idade da amostra – Compostos químicos - Realização do exame -> tudo isso pode interferir na realização do diagnóstico.
· Identificação - vedação hermética - Prevenir derrame e preservação da umidade.
· Recomendações: 
· NÃO PEGAR A AMOSTRA NO VASO SANITÁRIO (pode destruir os trofozoítos) 
· NÃO PEGAR AMOSTRAS DIRETAMENTE DO SOLO (parasitas de vida livre)
· INDIVÍDUOS HIV (identificar com etiqueta vermelha ou HIV positivo)
· Pesquisa parasitológica
· Restrições
· Exames Radiológicos (Contraste)
· Amostras excretadas (Bário e bismuto)
· Substâncias cristalinas – destruir trofozoítos
· Colheita
· Exame macro e microscópico
· Antibióticos (tetraciclinas) podem afetar a flora intestinal diminuindo a flora intestinal e promovendo a diminuição ou ausência de organismos nas fezes
· Uso de laxantes: Amebíase - Giardíase - Estrongiloidíase 
· Amostras múltiplas 
· Estabilidade da amostra - preservação da amostra
· Tempo de colheita das amostras - identificação dos parasitas
· Fixadores 
· Preservar a morfologia dos protozoários e prevenir um contínuo desenvolvimento de ovos e larvas de helmintos
· Amostras não preservadas: temporária 3 a 5°C em recipiente fechado
· Preservação permanente de cistos, ovos e larvas
· Preservadores
· MIF – Formalina, mertiolato-iodo-formaldeido
· SAF
· PAF
· 
Exame Macroscópico
· Amostra fecais não preservadas – macroscopicamente
· Consistência
· Fezes formadas
· Semi-formadas
· Pastosas 
· líquidas 
· Odor, cor
· Presença ou ausência de sangue, muco, proglotes
· Vermes adultos ou outras condições anormais
· Exame macroscópico: anteceder o microscópico
Exame microscópico
· Ovos, larvas, e pequenos adultos de helmintos
· Exame direto a fresco sem fixadores
· Leitura das lâminas
AULA DO DIA 27/10/21
MÉTODOS QUALITATIVOS DE DIAGNOSTICO PARASITOLÓGICO EM AMOSTRA DE FEZES HUMANAS
Prof: Dra. Rosângela Maria Rodrigues
Objetivo: 
· Diagnosticar parasitos intestinais
· Possibilidades de pesquisa de diferentes formas parasitológicas eliminadas nas fezes (comensais e parasitos)
Exames macroscópico
· Consistência das fezes e odor
· Presença de elementos anormais – Muco, Sangue, vermes adultos ou parte deles
Exames microscópicos
· Visualização e identificação das estruturas dos parasitos (Ovos ou larvas de helmintos, cistos, trofozoítos ou oocisto de protozoário)
Métodos 
· Qualitativos: permite e identificação - larvas, ovos cistos e etc.
· Quantitativos: permite a identificação juntamente com a carga parasitária
Métodos qualitativos 
· Demonstram a presença da forma parasitária nas lâminas
· Mais utilizado sem quantificar
· Pode-se enriquecer para concentrar 
Escolha do método
· As formas parasitárias podem varias
· nem todos os métodos demostram todas as formas parasitárias
· Métodos gerais: Permite o diagnóstico de vários parasitas
· Métodos específicos: Permitem a identificação de certos parasitos
· Qualidade do EPF (exame parasitológico de fezes) depende
· Técnica empregada
· Número de amostras: amostras múltiplas 
· Eliminação irregular de ovos, cistos
Técnicas de concentração: são procedimentos de rotina, com tentativa de aglomerar a quantidade de parasitos – almentar o numero de cistos, oocistos, larvas. Não só mais também elimina a maioria dos detritos fecais e facilitando a identificação dos parasitos
· Flutuação
· Flutuação Simples
· Centrifugo-flutuação
· Sedimentação
· Sedimentação Simples
· Centrifugo sedimentação
Flutuação espontâneas (Willis): É baseado na dupla propriedades dos ovos flutuarem em uma solução de densidade elevada, aderindo à superfície inferior de uma lâmina
· Identificação de ovos de densidades específicas básicas
· Não é muito recomendado pra pesquisa de cistos de protozoário devido alterarem o formato dos cistos
· Não é recomendado para ovos pesados em geral
· A maioria das densidades dos ovos, cistos e oocistos e desconhecida devido a isso e conveniente o uso de diferentes concentrações
· Amostra fecal deve ser fresca + reagente + 10 a 20 min de tempo de análise do material
· Observações:
· Homogeneização deve ser completa
· a solução pode ser substituída por uma solução saturada de açúcar
· Vantagem: Técnica simples com uma remoção seletiva de ovos e cistos reduzindo a quantidade no bolo fecal, resultando em uma grande quantidade de organismos de certas aps.
· Desvantagens: densidade das reações podem distorcer a parede dos cistos promovendo uma dificuldade da sua identificação
Centrifugo-flutuação: em solução de sulfato de zinco (Faust)
· Baseado nas diferenças de densidades específicas, promovendo a flutuação de certos organismos: ovos leves e cistos de protozoários e helmintos
· Solução de sulfato de zinco a 33%
Técnicas de Sedimentação: procedimento de concentração que pode ser de forma espontanea ou forçada
· Objetivo: aumentar o nùmero de ovos, larva, cistos e etc.
· Baseado na separação de gordura e óleos - gravidade e centrifugação
· Possuem uma ação inversa da sedimentação 
Sedimentação espontânea ou método de Hoffman ou método de Lutz
· Baseado no princípio da gravidade
· O ideal e esperar 24h para analisar o material para obtenção de um diagnóstico mais fidedeigno/confiável
· Vantagem: Baixo custo e simples de se fazer – fezes frescas ou conservadas
· Desvantagem: dificulta o preparo e exame da lâmina
Sedimentação por centrifugação: blagg, MIFC, ritchie
· Utilização de centrifuga e alguns fixadores
· Vantagem: utilização de fixadores e corantes facilitando a identificação das estruturas
Métodos de Bearmann-Morais
· técnica de concentração baseada no hidro e termotropismo positivo das larvas de nematoide
· Migram para água de 45°C
· Utilização da gravidade
· Vantagem: técnica simples e rápida execução
· Desvantagens: risco de contaminação
03/11/21
MÉTODOS QUANTITATIVOS DE DIAGNÓSTICO PARASITOLÓGICO DEM AMOSTRAS DE FEZES HUMANAS
· Permitem a identificação e a quantificação - quantidade de ovos e etc
· Qual o objetivo de quantificar a carga parasitária: 
· para determinar a quantidade da infecção -
· decidir a medicação e avaliar a eficácia
 METODOS QUANTITATIVOS
· Ovos por grama de fezes (OPG) -
· índice de densidade dos ovos nas fezes –
· ovo por dia (OPD) x peso total (g) do material fecal –
· ovos por dia por femea (OPDPF) - 
· OPD/n° fêmeas albergadas no hospedeiro
Métodos mais utilizados
Kato – katz
· Simples, eficiente 
· Dá para identificar ovos pesados - 
· utilização de amostra frescas ou conservadas
· Substituição da lamínula de vidro por um papel de celafone
· Solução de verde malaquita glicerinada
· Amostra positiva:
· calcular o número de ovos presentes no material fecal. Multiplicar pelo fator 23 ou 24 – resulta, aproximadamente no número total de ovos por gramas de fezes
· Vantagem do kato-katz
· Simples e sensível
· Pequena quantidade de fezes
· sem métodos de concentração
· Permite que a lâmina seja estocada para leitura
· Identificação de ovos mais pesados
Aula do dia 08/11/21
Métodos de isolamento e cultura de hematoide
Pra que que isso existe?
Estrongiloides stercoralis – larvas nas fezes (rabditoide e filarioide)
Ovos somente quando está com hiper infecção ou uso de lachantes.
FINALINADDE:
· Revelar a pressença de larvas que não sao identificadas pelas tecnicas de concentração
· Estabelecer se a infecção é por stercoralisou ancilostomídeo
· Características morfológicas das larvas
Desenhar as principais diferenças entre as larvas rabditoides e filarioide
Visualisação dos ovos dos ancilostomídeos - ancylostoma sp - vestíbulo bucal é bem profundo
COPROCULTURA (métodos de cultura fecal)
· Detecção de infecções discretas
· Asnilostomídeos
· Astrnongiloides
· Trichostrofylus
· Objetivo
· Obtenção de um n° maior de larvas
MÉTODO DE BERMAANN – MORAIS
· Método de concentração
· Hidro e termotropismo positivos das larvas de nematoides
· Migram para água a 45°C
· Material
· Fezes frescas não preservadas – 8 a 10g