Métodos laboratoriais identificação protozoários e helmintos

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AULA PRÁTICA 1 (28/08/20) 
 
MÉTODOS LABORATORIAIS PARA IDENTIFICAÇÃO DE PROTOZOÁRIOS E 
HELMINTOS 
 
Materiais biológicos para pesquisa de parasitos 
 Fezes; 
 Sangue; 
 Tecidos; 
 Secreções... 
 
 
 Pesquisa de enteroparasitos e suas formas evolutivas eliminadas nas fezes (trofozoítos e cistos de 
protozoários; ovos e larvas de helmintos); 
 O correto diagnóstico e identificação dos parasitos depende da amostra entregue ao laboratório. 
 
Coleta e conservação: 
• Coletar pontos alternados do material fecal; 
• Mais adequado: 3 amostras em dias alternados (evita-se períodos falso-negativos); 
• O ideal é o processamento das fezes recém coletadas. 
• Conservação em geladeira (5 a 10oC) – evita putrefação das fezes (até 48hs); 
• Utilizar recipiente seco, limpo e de boca larga previamente identificado com: nome e idade do paciente, data 
e hora da coleta. 
Conservantes mais utilizados 
• 3 partes do conservante para 1 parte de fezes: 
• Formol ou formalina 10%: conserva ovos e larvas de helmintos e cistos e oocistos de protozoários; 
• MIF (Mercúrio cromo, Iodo, Formol): conserva ovos e larvas de helmintos e cistos e oocistos de protozoários; 
• SAF (acetato de sódio, ácido acético e formol): conservam cistos e trofozoítos. 
 
Métodos de processamento de amostras fecais para pesquisa de protozoário e helmintos – Exame 
parasitológico de Fezes (EPF) 
 EXAME MACROSCÓPICO 
Observar a consistência, odor e cor da amostra 
Verificar a presença de MUCO, SANGUE, proglotes de Taenia e vermes adultos 
 EXAME MICROSCÓPICO 
o Métodos Qualitativos (Ausência e Presença): 
 Exame direto a fresco 
 Exame após concentração: Sedimentação espontânea ou por centrifugação e 
flutuação 
 Pesquisa de Larvas 
FEZES 
Carol Seixas 
o Métodos Quantitativos (n° de ovos/g de fezes): 
 Kato-Katz 
 Stoll 
 Simões Barbosa 
 EXAME DIRETO A FRESCO 
o Aplicação: pesquisa de trofozoítos de protozoários que se evidenciam por sua motilidade. Outras 
formas (cistos, ovos e larvas) podem ser detectadas quando presente em grande quantidade. 
o Princípio: diagnóstico rápido nas infecções maciças permitindo observar os trofozoítos vivos. 
o Amostra: colhida de preferência no próprio laboratório, pois devem ser examinadas em, no 
máximo, 30min após a emissão. 
o Técnica: 
 Colocar 1 ou 2 gotas de solução salina em uma lâmina de microscopia; 
 Com um palito de sorvete, pegar uma pequena porção de fezes e diluir na salina; 
 Cobrir a preparação com uma lamínula; 
 Observar ao microscópio óptico. 
• Examinar 3 lâminas em caso negativo; 
• Difícil visualização dos detalhes estruturais  identificação  coloração (hematoxilina 
férrica). 
 
TÉCNICAS DE CONCENTRAÇÃO 
Muitas vezes o número de formas parasitárias eliminadas nas fezes é pequeno  técnicas de enriquecimento 
para concentrá-las  aumenta a sensibilidade; 
 TÉCNICAS SEDIMENTAÇÃO (OU MÉTODO HOFFMANN) 
- Possibilitam o aumento do número de elementos parasitários  recuperação de cistos de 
protozoários, ovos e larvas de helmintos; 
- Este método é recomendado para a pesquisa de ovos pesados, como o do Shistosoma mansoni, 
revelando também ovos e larvas de outros helmintos. Mesmo não sendo ideal para a pesquisa de 
cistos, estes poderão ser observados, especialmente se for corado a preparação. 
- Consiste basicamente na mistura das fezes com água, sua filtração por uma gaze cirúrgica (ou 
parasitofiltro) e manutenção em repouso, formando uma consistente sedimentação dos restos fecais 
ao fundo do cálice. Uma alíquota do sedimento é pipetada sobre lâmina, é feito um esfregaço e 
observado em microscópio. Este método detecta a presença de ovos nas fezes, principalmente os 
pesados, após coloração com lugol. 
Materiais: 
- Cálice de sedimentação 
- Gaze 
- Palito de madeira 
- Frasco de borrel ou copos descartáveis 
- Lâmina e lamínula 
- Pipetas pasteur 
- Lugol 
 TÉCNICAS FLUTUAÇÃO 
Aplicação: Pesquisa de cistos de protozoários e alguns ovos de helmintos considerados leves. 
• Eliminação de detritos fecais. 
• Identificação do parasito mesmo quando presente em pequeno número  maior sensibilidade. 
Princípio: Concentração através da flutuação dos elementos parasitários na superfície de um líquido 
de alta densidade > solução de sulfato de zinco (ZnSO4) a 33% com densidade 1,180 g/ml. 
- São encontrados Schistosoma, larvas de Strongyloides, assim como cistos de protozoários 
 PESQUISA DE LARVAS 
Larvas de Strongyloides stercoralis e de Ancilostomídeos; 
Princípio: Termo-hidrotropismo positivo das larvas associado à ação da gravidade; 
Amostra: Não refrigerar e não utilizar conservantes. 
 
Expressão do Resultado do EPF 
- Todos os parasitos, patogênicos ou não, deverão ser reportados nos seus nomes científicos, dando ênfase ao 
estágio de diagnóstico identificado. 
 Resultado: positivo ou negativo 
 Protozoários: Ausência ou Presença 
 Helmintos: Ausência ou Presença 
 
 
 
• Detecção de protozoários e helmintos sanguíneos  Plasmodium spp. e Trypanosoma cruzi (protozoários), 
Wuchereria bancrofti (helminto); 
 
Métodos: 
- Direto a fresco; 
- Esfregaços corados (camada delgada e gota espessa); 
- Reação em cadeia da polimerase (PCR)... 
 
 
 
• Pesquisa de protozoários (Leishmania spp., Trypanosoma cruzi, Toxoplasma gondii) e helmintos intestinais; 
 
 
 
 
 
SANGUE 
TECIDOS 
 
• Pesquisa de protozoários (Trichomonas vaginalis) e larvas de helmintos em secreções pulmonares; 
• Direto a fresco, esfregaços corados; 
 
SECREÇÕES