AULA PRÁTICA 4 Determinação quantitativa de colesterol total no soro através de metodologia colorimétrica e determinação quantitativa de triacilglicerois no soro através de metodologia colorimétrica

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UNIVERSIDADE FEDERAL DE JUÍZ DE FORA 
CAMPUS AVANÇADO GOVERNADOR VALADARES 
CURSO DE GRADUAÇÃO EM FARMÁCIA 
BIOQUÍMICA XIII PRÁTICA 
 
 
Larissa Lima Torres 
Tainara Soares dos Santos 
 
 
 
 
AULA PRÁTICA 4: Determinação quantitativa de colesterol total no soro através de 
metodologia colorimétrica e determinação quantitativa de triacilglicerois no soro através 
de metodologia colorimétrica 
 
 
 
 
Profª. Maísa Silva 
 
 
 
 
Governador Valadares 
2021 
UNIVERSIDADE FEDERAL DE JUÍZ DE FORA 
CAMPUS AVANÇADO GOVERNADOR VALADARES 
CURSO DE GRADUAÇÃO EM FARMÁCIA 
BIOQUÍMICA XIII PRÁTICA 
 
Larissa Lima Torres 
Tainara Soares dos Santos 
 
 
 
 
AULA PRÁTICA 4: Determinação quantitativa de colesterol total no soro através de 
metodologia colorimétrica e determinação quantitativa de triacilglicerois no soro através 
de metodologia colorimétrica 
 
 
 
 
Atividade desenvolvida na disciplina 
Bioquímica XIII prática como requisito parcial 
para aprovação, a ser entregue no dia 
03/12/2021. 
 
 
 
Governador Valadares 
2021 
Sumário 
1.INTRODUÇÃO ........................................................................................................... 4 
2.OBJETIVOS ................................................................................................................ 6 
3.MATERIAIS, REAGENTES E EQUIPAMENTOS ................................................ 6 
3.1. Triacilgliceróis ......................................................................................................... 6 
3.2. Colesterol .................................................................................................................. 6 
4.PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL .................................................................... 7 
4.1. PROCEDIMENTO: Colesterol .............................................................................. 7 
5.RESULTADOS ............................................................................................................ 7 
5.1. Colesterol .................................................................................................................. 7 
5.2. Triacilglicerois ......................................................................................................... 8 
6. DISCUSSÃO ............................................................................................................... 8 
7.CONCLUSÃO .............................................................................................................. 9 
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS ......................................................................... 9 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
1.INTRODUÇÃO 
 
O colesterol é um dos lipídeos biologicamente mais relevantes, precursor dos 
hormônios esteroidais, ácidos biliares e vitamina D. Como um constituinte das 
membranas celulares, o colesterol atua na sua fluidez e na regulação metabólica. As 
lipoproteínas permitem o transporte dos lipídeos no meio aquoso plasmático e podem 
ser classificadas de acordo com sua densidade, como as lipoproteínas de baixa 
densidade (LDL, do inglês low density lipoprotein) e de alta densidade (HDL, do inglês 
high density lipoprotein) (MALTA, 2019). 
Na década de 1960, estudos na coorte de Framingham Heart apresentaram 
evidências de que valores elevados de colesterol sérico aumentariam o risco de infarto 
do miocárdio nos anos subsequentes do estudo. Posteriormente, outras pesquisas 
confirmaram associações entre níveis altos de colesterol e o aumento do risco para 
doenças cardíacas e acidente vascular cerebral. Estimativas da Organização Mundial da 
Saúde destacam que níveis elevados de colesterol sérico causam cerca de 2,6 milhões de 
mortes e 29,7 milhões de anos de vida perdidos por morte prematura e incapacidades 
(MALTA, 2019). 
Triglicerídeos também designados triacilgliceróis, gorduras ou gorduras neutras 
são ésteres constituídos por três resíduos de ácidos gordos e um resíduo de glicerol. Esta 
é a forma principal de armazenamento celular e transporte dos ácidos gordos. Os 
triglicerídeos são constituídos por moléculas apolares, pois os grupos polares dos seus 
precursores (grupos hidroxilo do glicerol e grupo carbóxilo dos ácidos gordos) foram 
perdidos com a formação da ligação éster. Por esta razão são constituídos por moléculas 
muito hidrofóbicas, insolúveis em água e solúveis em solventes orgânicos, como o 
benzeno (OLIVEIRA,2015). 
Nas células, os triglicerídeos ficam armazenados em gotas lipídicas no citosol. 
Nos vertebrados existem células especializadas para o armazenamento dos 
triglicerídeos, os adipócitos. Esta reserva de energia pode ser mobilizada pela ação de 
lipases, que são enzimas responsáveis pela hidrólise dos triglicerídeos, libertando os 
respetivos ácidos gordos e o glicerol. A oxidação completa de 1 g de triglicerídeos 
fornece cerca de 38 kJ de energia, enquanto as proteínas e carboidratos fornecem 
somente cerca de 17 kJ/g. Para além de constituírem um importante reserva energética, 
os triglicerídeos, nomeadamente o tecido adiposo, funciona como isolante térmico 
ajudando a manter a temperatura corporal) e como proteção contra os choques 
mecânicos protegendo os órgãos internos (OLIVEIRA,2015). 
A dosagem de colesterol total realizada nesta prática foi feita por meio do Kit 
Labtest – CAT. 76 em que se determinou a concentração total da amostra analisada. O 
fundamento bioquímico da determinação do colesterol total realizada neste 
procedimento ocorre de acordo com as seguintes reações: 
1ª) Ésteres do colesterol → colesterol esterase (enzima) → Colesterol + Ácidos graxos 
2ª) Colesterol + O2 → colesterol oxidase → Colest-4-en-ona + H2O2 
3ª) 2 H2O2 + Fenol + 4-Aminoantipirina peroxidase Antipirilquinonimina + 4 H2O 
A enzima colesterol esterase, que catalisa a primeira reação, está presente no 
reagente fornecido pelo Kit Labtest e os ésteres de colesterol estão presentes na amostra. 
Tanto o colesterol livre quanto os ésteres de colesterol participam da segunda reação e, 
pela ação da enzima colesterol oxidase presente no reagente, forma-se Colest-4-en-ona e 
peróxido de hidrogênio. O peróxido de hidrogênio reage com Fenol e 4-
Aminoantipirina por ação da enzima peroxidase e forma água e Antipirilquinonimina 
que possui coloração rosada – avermelhada e que tem absortividade máxima em 500 
nm. A intensidade da cor vermelha formada na reação final é diretamente proporcional 
à concentração do colesterol na amostra, ou seja, quanto maior a concentração de 
colesterol ou ésteres de colesterol presente na amostra, maior é a quantidade de produto 
final (Antipirilquinonimina) formado. 
A dosagem de triacilglicerois realizada nesta prática foi feita por meio do Kit 
Labtest – CAT. 87 em que se determinou a concentração total da amostra analisada. A 
enzima lipoproteína lipase fornecida pelo Kit Labtest promove a hidrólise dos 
triglicérides presentes na amostra liberando glicerol, que é convertido, pela ação da 
enzima glicerol quinase fornecido pelo Kit, em glicerol-3-fosfato. Este é oxidado a 
dihidroxiacetona e peróxido de hidrogênio na presença da glicerolfosfato oxidase 
fornecida pelo reagente. Em seguida, ocorre uma reação de acoplamento entre peróxido 
de hidrogênio, 4-aminoantipirina e 4-clorofenol, catalisada pela enzima peroxidase 
contida no Kit, produzindo uma quinoneimina que tem máximo de absorbância em 505 
nm. A intensidade da cor vermelha formada é diretamente proporcional à concentração 
dos triglicérides na amostra, ou seja, quanto maior a concentração de triacilgliceróis 
presentes na amostra, maior quantidade de produto final (quinoneimina) será formado. 
 
2.OBJETIVOS 
 
2.1. Determinar a concentração de colesterol total na amostra analisada. 
2.2. Determinar a concentração de triacilgliceróis na amostra analisada. 
 
3.MATERIAIS, REAGENTES E EQUIPAMENTOS 
3.1. Triacilgliceróis 
Materiais 
Espectrofotômetro;Tubos e pipetas; Cronômetro; banho maria. 
Reagentes 
Componentes do kit: 
Padrão - Contém triglicérides 200 mg/dL e azida sódica 0,045%. Após o manuseio 
armazenar bem vedado para evitar evaporação. 
Reagente - Contém tampão 50 mmol/L, pH 7,0; íons magnésio 4 mmol/L; 4-clorofenol 
2,70 mmol/L; 4-aminoantipirina 300 mol/L; ATP 1,8 mmol/L; lipoproteína lipase 1400 
U/L; glicerolquinase 1000 U/L; glicerolfosfato oxidase 1500 U/L; peroxidase 900 U/L e 
azida sódica 0,095%. 
3.2. Colesterol 
Materiais 
Espectrofotômetro; Tubos e pipetas; Cronômetro; banho maria. 
Reagentes 
Componentes do kit: 
Padrão de 200 mg/dL - Contém azida sódica 15 mmol/L. Após o manuseio sugere-se 
armazenar bem vedado para evitar evaporação. 
 Reagente - Contém tampão 50 mmol/L, pH 7,0; fenol 24 mmol/L; colato de sódio 500 
mol/L; azida sódica 15 mmol/L; 4-aminoantipirina 500 mol/L; colesterol esterase 250 
U/L, colesterol oxidase 250 U/L e peroxidase 1000 U/L. 
4.PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL 
4.1. PROCEDIMENTO: Colesterol 
• Identificou-se três tubos de ensaio com “Branco”, “Amostra” e “Padrão”; 
• Adicionou-se nos três tubos 1mL de reagente de cor. Após o uso deixou-se a pipeta 
sobre um papel, no centro da bancada; 
• No tubo identificado como “Padrão” adicionou-se 10 µL da solução de colesterol 
com a concentração conhecida, ou seja, o Padrão que compõe o kit; 
• No tubo identificado como “Amostra” adicionou-se 10 µL de amostra; 
• Homogeneizou-se as soluções dos três tubos e incubou-se em banho-maria por 10 
minutos; 
• Realizou-se leituras fotométricas do Padrão e da Amostra, zerou-se o aparelho com 
o Branco em 500nm. Anotou-se os resultados. 
 
5.RESULTADOS 
5.1. Colesterol 
A partir da verificação do rótulo, na embalagem da solução padrão (colesterol), 
observou-se que a concentração dessa solução, em uso, era igual a 200 mg/dL. 
E, a partir da leitura, no espectrofotômetro, das soluções preparadas, obteve-se 
os seguintes valores de absorbância: 
Solução Absorbância 
Branco 0,000 
Amostra 0,310 
Padrão 0,381 
Fonte: Autoral (2021). 
 O cálculo realizado para obtenção da concentração de colesterol presente na 
amostra a partir dos dados obtidos no espectrofotômetro de acordo com a tabela anterior 
foi: 
0,381 abs → 200 mg/dl » padrão 
0,310 abs → X 
X = 162,73 mg/dl » concentração do colesterol da amostra 
 
5.2. Triacilglicerois 
A partir da verificação do rótulo, na embalagem da solução padrão 
(Triacilglicerois), observou-se que a concentração dessa solução, em uso, era igual a 
200 mg/dL. 
E, a partir da leitura, no espectrofotômetro, das soluções preparadas, obteve-se 
os seguintes valores de absorbância: 
Solução Absorbância 
Branco 0,000 
Amostra 0,310 
Padrão 0,381 
Fonte: Autoral (2021). 
 
O cálculo realizado para obtenção da concentração de triacilglicerois presente na 
amostra a partir dos dados obtidos no espectrofotômetro de acordo com a tabela anterior 
foi: 
 
0,212 abs → 200 mg/dl » padrão 
0,162 abs → X 
X= 152,83 mg/dl » concentração de triacilglicerois da amostra 
 
6. DISCUSSÃO 
 
Os valores de referência de colesterol total e triacilglicerois para um ser humano 
adulto são desejáveis quando se apresentam < 200 mg/dl e < 150 mg/dl, 
respectivamente. O valor de colesterol total obtido para a amostra no procedimento 
realizado em aula foi de 162,73 mg/dl, o que enquadra dentro do valor de referência e 
do que é desejável para um adulto. Já o valor de triacilgricerois obtido para a amostra 
foi de 152,83 mg/dl, estando pouco acima do valor de referência desejável. 
A alteração dos níveis séricos dos lipídeos é chamada dislipidemia. Essas 
alterações podem ocorrer em quaisquer valores dentro do perfil lipídico do indivíduo: 
colesterol total alto, triglicerídeos (TG) alto, colesterol de lipoproteína de alta densidade 
baixo (HDL-c) e níveis elevados de colesterol de lipoproteína de baixa densidade (LDL-
c). As dislipidemias podem ser classificadas de acordo com o tipo de alteração dos 
níveis séricos de lipídeos em: hipercolesterolemia isolada, hipertrigliceridemia isolada, 
hiperlipidemia mista e HDL-C baixo. 
O valor de triacilglicerois da amostra obtido nesta prática aponta para uma 
hipertrigliceridemia não podendo caracterizá-la como isolada ou não uma vez que se 
desconhecem os outros valores séricos de lipídeos do mesmo paciente. 
 
7.CONCLUSÃO 
 
O objetivo da prática foi alcançado de maneira satisfatória e os conceitos 
teóricos puderam ser melhor compreendidos a partir da realização dos procedimentos, 
uma vez que foi possível determinar os valores das concentrações de colesterol total e 
de triacilglicerois pelo método da espectrofotometria e com um recurso matemático 
básico. A dosagem de colesterol total e triacilglierois tem grande importância no 
diagnóstico e controle das dislipidemias uma vez que essa é uma doença muito comum 
na população e um dos principais determinantes para a ocorrência de doenças 
cardiovasculares e cerebrovasculares, como a aterosclerose, infarto agudo do miocárdio, 
doença isquêmica do coração e acidente vascular cerebral. 
 
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS 
 
OLIVEIRA, E., Triglicerídeos, Rev. Ciência Elem., V3(2):134. 2015. 
MALTA, D. C.; SZWARCWALDI, C. L.; et al. Prevalência de colesterol total e frações 
alterados na população adulta brasileira: Pesquisa Nacional de Saúde. Rev Bras 
Epidemiol. 2019. 
ANVISA. Boletim Saúde e Economia: Dislipidemia, nº 6, ano III. Disponível em: 
http://anvisa.gov.br >>Regulação de Mercado>>Avaliação de Novas Tecnologias para a 
Saúde - ATS >>Boletim Saúde e Economia 
LABTEST. COLESTEROL Liquiform. Ref.:76 MS 10009010068. Disponível em: 
https://labtest.com.br/wp-content/uploads/2016/09/Colesterol_Liquiform_76_Port.pdf 
LABTESTE. TRIGLICÉRIDES Liquiform. Ref.:87 MS 10009010070. Disponível em: 
https://labtest.com.br/wp-
content/uploads/2016/09/Ref_87_RevJulho2014_Ref260117_Port.pdf 
https://labtest.com.br/wp-content/uploads/2016/09/Colesterol_Liquiform_76_Port.pdf