ELISA e avidez da IgG

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ELISA e avidez da IgG. 
INTRODUÇÃO 
O imunoensaio enzimático (ELISA) é usado no 
diagnóstico laboratorial de doenças inflamatórias, 
sendo infecciosas ou não. 
Se baseia: 
 Na fixação (imobilização) do antígeno ou 
anticorpo na fase sólida. 
 Conjugado: Ac + enzima. 
 Substrato. 
AMOSTRAS E CUIDADOS 
Amostra: soro ou plasma. 
Amostra ideal: límpida, sem hemólise e não 
lipêmica. 
Se conservar, no máximo até 7 dias conservada 
entre 2 e 8 graus Celsius ou congelar a – 20 graus 
Celsius. 
As amostras não devem passar por congelamento 
e descongelamento frequentes. 
ELISA INDIRETO 
 
Após colocar a amostra do paciente, realiza-se a 
lavagem para remoção do excesso de anticorpos 
primários (caso haja). Após a aplicação da 
solução também faz a lavagem para remoção do 
excesso de conjugado (anticorpos secundários 
associados a enzima). 
O substrato se ligará a enzima do conjugado, 
havendo mudança de coloração. 
Se o paciente não possuir o anticorpo que está 
sendo buscado, não haverá ligação com antígeno 
e o anticorpo secundário também não se ligará ao 
anticorpo primário devido sua ausência. 
Consequentemente, também não haverá ligação 
do substrato a enzima. 
ELISA SANDUÍCHE 
 
No ELISA sanduíche, haverá um antígeno fixado 
a fase móvel. 
O antígeno do paciente (caso haja) vai se ligar ao 
antígeno fixado a fase móvel. E o conjugado vai 
se ligar também ao antígeno. Posteriormente, o 
substrato se ligará a enzima. 
Nesse caso, ocorre a lavagem para a remoção do 
excesso de antígenos e posteriormente para 
lavagem do excesso de conjugado. 
TESTE DE AVIDEZ DA IGG 
Afinidade – força de ligação do epítopo ao 
anticorpo. 
Avidez – estabilidade da ligação do antígeno-
anticorpo. 
Baixa avidez – infecção aguda. 
Alta avidez – infecção passada. 
O teste de avidez da IgG se baseia no ELISA 
indireto, em que se realizam dois testes. 
TESTE 1 – ELISA indireto fazendo a lavagem 
com uma solução salina tamponada. 
TESTE 2 – ELISA indireto fazendo a lavagem 
com solução dissociante. Exemplo: 
dietanolamina. 
Se no teste 2 houver o desligamento do anticorpo, 
significa que a IgG é de baixa ou média avidez. 
 
O teste de avidez da IgG é importante para 
detecção de toxoplasmose em gestantes, pois em 
uma pesquisa de anticorpos totais, não dá para 
diferenciar IgG e IgM. Além disso, a IgM tende a 
ficar em alta concentração por algum tempo, não 
sabendo se a infecção é recente ou passada. 
Nos casos de T. gondii: 
Alta avidez – infecção passada. 
Média avidez – repetir o exame após duas 
semanas. 
Baixa avidez – infecção recente.