trabalho de bacteriologia

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UNIVERSIDADE DA AMAZÔNIA 
 CURSO DE BIOMEDICINA
 LARISSA MARTINS REZENDE DE SOUZA
 JAQUELINE DE MOURA FERREIRA 
 TRABALHO DE BACTERIOLOGIA 
 BELÉM-PA 2022
MEIOS DE CULTURA 
Definição 
A respeito dos meios de cultura, podemos dizer que são manipulações química, realizandas em um ambiente adequado, visto que , é necessário que o laboratórios forneça materiais excepcionais, tais como ; nutrientes para o crescimento e desenvolvimento de microrganismos fora do seu habitat natural, como por exemplo os fungos e as bactérias ( será estudado especialmente as bactérias ). 
De acordo, com a determinação de cada função desejada e cada microorganismo específico é indicado um tipo de meio de cultura. Pois, alguns tem a função de nutrir e estimular o crescimento, outros inibem determinado microrganismo e conseguem indicar seu potencial hidrogeniônico,não sendo somente necessário os nutrientes e condições ambientais favoráveis para esse cultivo, podemos somar muitos critérios que devem ser considerados, como a abundância de diferentes microorganismos existentes que demandam de diversas necessidades, levando em consideração suas especificidades e peculiaridades, por esse motivo, o meio de cultura deve ser adaptado para sanar essas particularidades. Somando a isso, podemos dizer que , deve ser considerado o pH e a quantidade de oxigênio ou mesmo a sua ausência.Existe uma enorme multiplicidade dos meios e eles são usados em análises laboratoriais e estudos científicos em diversas áreas, principalmente em alimentos, água, cosméticos e microbiologia clínica. 
Os meios de cultura são classificados de acordo com seu estado físico, podendo ser sólido, quando possui agentes solidificantes como o ágar; semissólido, quando a consistência de ágar e/ou gelatina é intermediária, ou líquido, quando não possui solidificantes, caracterizando-se como caldo.
	Uma grande variedade de processo e preparações de nutrientes são utilizados para induzir o crescimento e as reproduções de microrganismos.
	
	
	
	 Meios de cultura 
Associação equilibrada de agentes químicos (nutrientes, pH, etc.) e físicos (temperatura, viscosidade, atmosfera, etc) que permitem o cultivo de microorganismos fora de seu “habitat” natural. Logo, não existe um meio de cultura universal para o crescimento de todos os microrganismos. São preparados com finalidade de cultura e isolamento de microrganismos em sua grande diversidade. 
	 
CLASSIFICAÇÃO DOS MEIOS DE CULTURA, QUANTO À ORIGEM DOS CONSTITUINTES ( NATURAIS OU COMPLEXOS ) 
	
	
	
	 NATURAIS OU COMPLEXOS 
Contém substâncias de origem biológica, como extrato de carne, de malte. portanto de composição química muitas vezes não definidas. Logo, esse meio é aquele no qual a exata constituição não é conhecida e podem conter extratos moídos ou digeridos de animais, peixes, leveduras e vegetais, que fornecem os nutrientes, as vitaminas e os minerais necessários. Sendo assim , podemos dizer que são substâncias assim como elas se apresentam na natureza ou com pequenas modificações. Ex: leite, batata, suco de tomate.
	
CLASSIFICAÇÃO DOS MEIOS DE CULTURA, QUANTO À ORIGEM DOS CONSTITUINTES ( SINTÉTICO ) 
	
	
	
	 SINTÉTICOS 
São classificados como meio de cultura sintético o ambiente nutritivo onde se sabe exatamente qual é a composição química.Ou seja, onde se tem a composição química exata. Logo esse método é muito comum em análises de laboratório, pois esse meio acaba suprindo as exigências nutritivas do organismo, permitindo o seu crescimento espontâneo.
	
CLASSIFICAÇÃO DOS MEIOS DE CULTURA ( Seletivo e diferencial ) 
	
	
	
	 Meio seletivo e diferencial 
Meio Seletivo: são exemplos o Ágar Manitol Salgado e Agar SS, utilizados para selecionar as espécies que serão isoladas e impedir o crescimento de germes. Meio Diferencial: promove uma mudança na coloração das colônias de bactérias, possibilitando a distinção de vários gêneros e espécies de microrganismos.
Principais etapas no desenvolvimento de um meio de cultura
- FORMULAÇÃO: realização da dosagem de cada matéria-prima para composição do caldo nutritivo (meio de cultura, propriamente dito).
- ESTERILIZAÇÃO: Feita para garantir a ausência de outros microorganismos no meio, exceto os desejáveis.
Os agentes de esterilização podem ser físicos ou químicos. Os agentes físicos são a temperatura, luz, pressão, corrente elétrica, filtração; e os agentes químicos empregam substâncias químicas.
O calor é o mais eficaz agente esterilizante ◊ desnaturação da célula.
O congelamento mata algumas células, mas não é um processo de esterilização, pois existem microorganismos insensíveis e moderadamente resistentes que sobrevivem a temperatura de congelamento.
O calor pode ser empregado de várias formas:
• A seco – flambagem em chama direta ◊ esterilizar a alça de platina, tubos, ampolas.
• Ar quente (forno Pasteur – 170 a 180 o C por 1 hora)
• A úmido – temperatura baixa (50 a 70oC por tempo longo – Pasteurização – leite, cerveja)
• 100oC - água fervente (imersão do material em água fervente – instrumentos cirúrgicos, seringas)
 
• >100oC – vapor d’agua sob pressão (autoclave 108 – 110oC por 15 – 20 min – recipiente fechado em que a água é aquecida e o vapor d ́água fica retido sob pressão).
• INOCULAÇÃO: Etapa onde se coloca o microorganismo no reator.
• INCUBAÇÃO: Fornecimento da temperatura e tempo ideal para o crescimento.
Especialização: 
classificação funcional para os diferentes meios de cultura, que podem ser para:
- Pré-enriquecimento: para amostras que sofreram algum processo físico ou químico (Ex.: caldo lactosado);
- Enriquecimento: desenvolvimento de bactérias gerais (Ex.: Caldo Tetrationato);
- Seletivo: inibem o crescimento de alguns microrganismos e propiciam o desenvolvimento de outros ( Ex.: Manitol e MacConkey);
- Diferencial: permite a diferenciação de microrganismos parecidos (Ex.: Ágar sangue e MacConkey);
- Triagem: avalia as atividades metabólicas, permitindo a identificação de vários microganismos. (Ex.: Tríplice açúcar e ferro);
- Identificação: para realização de provas bioquímicas e funções fisiológicas do organismo a ser identificado (Ex.: Ágar citrato, Caldo nitrato);
- Dosagem: determinações de aminoácidos, vitaminas e antibióticos;
- Contagem: determinação quantitativa da população microbiana (Ex.: Ágar de Contagem em Placas, Ágar Baird-Parker)
- Manutenção: conserva os microrganismos em laboratório (Ex.: Ágar Sabouraud).
 Meio de cultura 
 UROCULTURA
Definição do meio de cultura ( urocultura ) 
	As infecções do trato urinário (ITU) são considerados um dos cenários mais frequentes entre as infecções humanas e compreendem várias síndromes, definida pela presença de micro-organismos no trato urinário e por serem frequentemente acompanhadas de resposta inflamatória aguda e sintomática. Há várias opções de meios para urocultura. Eventualmente,são recomendáveis e preferíveis a utilização do meio de cultura denominado como “ágar sangue” e um meio seletivo para bacilos Gram-negativos. Podendo ser usado o ágar MacConkey (MAC) ou eosina azul de metileno (EMB), Tendo em vista a diminuição dos gastos, o ágar cystine lactose electrolyte deficient (CLED) é o meio mais usado na maioria dos laboratórios brasileiros, pois possibilita a detecção de bactérias Gram-positivas e Gram-negativas. O meio seletivo ágar colistina ácido nalidíxico (CNA) é recomendado para deteção de bactérias Gram-positivas.
Os meios com substratos cromogênicos têm sido amplamente utilizados para urocultura. Têm como vantagem a identificação presuntiva dos princinacionais gêneros e espécies associados à ITU, além de caracterizar mais facilmente culturas polimicrobianas, reduzindo o número de identificações desnecessáriasEntre eles, podem ser citados: CHROMagar® Orientation (BD dDiagnos- tics) e CPS® ID3 (bioMérieux).
	
		
	
	
 Definição do meio de cultura ( escarro ) Meio de cultura 
 
 Escarro 
	A cultura de escarro pode ser utilizada com o objetivo de confirmar o diagnóstico de doenças respiratórias como pneumonias comunitárias, tuberculose, bronquite e fibrose cística. Normalmente o exame é solicitado pelo médico Pnemologista ou até mesmo o clínico geral. Somando a isso, podemos dizer que o exame de escarro pode ser solicitado para acompanhar a resposta ao tratamento de uma infecção ou para verificar qual o melhor antibiótico para combater uma infecção
O exame pode ser realizado de maneira simples, o paciente apenas precisa lavar as mãos e higienize a boca e garganta apenas com água, após esse processo é indicado que a pessoa tussa profundamente para soltar as secreções que estão no pulmão, evitando apenas coletar a saliva da boca e vias respiratórias superiores.
O método utilizado nesse tipo de exame: 
- Cultura quantitativa em ágar sangue, ágar Haemophilus e ágar MacConkey.
	
		
	 Demonstração da maneira correta para de fazer o escarro. 
	
	
 Definição do meio de cultura ( fezes ) MEIO DE CULTURA
 Fezes 
	A finalidade da cultura de fezes é identificar germes patogênicos causadores de quadros dc diarréia aguda ou crônica. Na cultura de fezes, em geral, são pesquisados Salmonella spp., Shigella spp. e alguns sorotipos de Escherichia coli, agentes bacterianos mais comumemente causadores de gastrointerites. Outros agentes que podem ser pesquisados são Campytobacter spp., Yersinia spp. e Vibrio spp. A coleta pode ser feita, de forma que o paciente colete um pedaço da amostra em um recipiente próprio com o meio de transporte (Cary-Olair ou similar) e enviar ao laboratório até 12 horas após a colheita. Se for coletado sem conservador, até 3 horas no máximo
Método do meio de cultura utilizado 
meios de escolha são preferencialmente meios seletivos e diferenciais, como por exemplo agar Mac Conkey, agar XLD ou agar SS. O agar XLD é recomendado tanto para o isolamento de Salmonella spp. quanto de Shigella spp., o diferenciando do agar SS que pode inibir algumas espécies de Shigella spp. A utilização do agar Mac Conkey é importante para o isolamentos das espécies de E. coli enteropatogênicas, como p.ex. ETEC, EHEC, entre outras.
	
		
	. 
	
	
 MEIO DE CULTURA
 Pele 
Definição do meio de cultura ( pele ) 
	 A técnica consiste em retirar um pequeno fragmento de tecido (seja animal ou vegetal) e transferi-los para um ambiente artificial, que cria as condições perfeitas para que o tecido continue crescendo, além de manter as suas funções.
O trabalho com culturas de tecidos ajudou a identificar infecções, deficiências enzimáticas e anormalidades cromossômicas, classificar tumores, além de formular e testar drogas e vacinas. Em 1949, a vacina contra poliomielite foi produzida depois de observar que o vírus da poliomielite podia atacar células humanas.
Tem ajudado a esclarecer também as causas genéticas de certas doenças hereditárias e métodos foram desenvolvidos para detectar substâncias que podem causar danos genéticos. O efeito da radiação e produtos químicos em células normais e cancerígenas foi estudado. Assim, sua utilização para fins diagnósticos e de novos tratamentos é ilimitada.
		
	
Tryptic Soy Agar (TSA)
Meio de cultura sólido nutritivo para uso geral em contagem ou isolamento de microrganismos.
Definição:
É um meio de cultivo, isolamento e manutenção de microrganismos fastidiosos (exigentes). Prepararado de acordo com a formulação recomendada pela ISO 9308-1:2000. A Adição de sangue (coelho, cavalo, carneiro) permite a visualização de zonas hemolíticas de estreptococos e outras bactérias. 
Preparação:
Suspender 40 g de pó em 1 litro de água destilada ou deionizada. Aquecer até ferver de forma que fique completamente dissolvido. . Esterilizar em autoclave a 121°C por 15 minutos. Resfriar entre 45-50°C. Misturar bem. Distribuir em placas de Petri.Aparência do Meio:Desidratado: Pó bege claro, fluído e homogêneo; Preparado: Meio vermelho-cereja, opaco e sem hemólises.
Descarte:
Não descartar em esgotos ou lixos domésticos. O produto deve ser tratado conforme as regulações oficiais administrativas. Soluções em excesso e não recicláveis destinar para empresa responsável. As embalagens contaminadas devem ser eliminadas como produto não utilizado.
Ágar chocolate
Ágar Chocolate é um meio enriquecido e não seletivo para cultivo de bactérias delicadas e exigentes.
Definição:
Meio de Ágar Chocolate é amplamente utilizado para o cultivo de microrganismos exigentes, embora cresçam neste meio quase todos os tipos de microrganismos. . À base do meio, é adicionado sangue de cavalo, carneiro ou coelho em temperatura alta, o que faz com que as hemácias lisem, liberando hemina e hematina, compostos fundamentais para o crescimento dos microrganismos exigentes.
Preparação: 
Pesar e hidratar o meio conforme instruções do fabricante;Esterilizar em autoclave;Esfriar a base à temperatura de aproximadamente 80ºC;Adicionar 5 mL de sangue desfibrinado de cavalo para cada 100 mL de base;Homogeneizar bem até lisar totalmente as hemácias e o meio apresentar uma cor castanho escuro (chocolate);Distribuir em placas de Petri de 90 mm de diâmetro.
Interpretação :
Cor original do meio: castanho escuro (chocolate).Colônias de tamanho pequeno a médio, com pigmento amarelo: sugestivo de Neisseria spp, Branhamella catarrhalis ou Moraxella spp.Colônias pequenas e delicadas, com pigmento creme claro: sugestivo de Haemophilus spp.
Ágar MacConkey
É considerado um dos primeiros meios de cultivo para bactérias gram negativas indicando a fermentação por lactose.
Definição:
é um meio seletivo e diferencial utilizado para o isolamento e diferenciação de bastonetes gram-negativos não fastidiosos, particularmente membros da família Enterobacteriaceae e do gênero Pseudomonas . Composição do Ágar MacConkey Princípio do Ágar Mac Conkey O ágar MacConkey é usado para o isolamento de bactérias entéricas gram-negativas e a diferenciação da fermentação da lactose das bactérias gram-negativas não fermentadoras da lactose.
Preparação:
Dissolver o MacConkey na H2O destilada e agitar bem; ▪ Ferver em micro-ondas ou placa aquecida agitando sempre para dissolver na água por 1 Page 2 2 minuto; ▪ O pH final é de 7,0 ± 0,2. Autoclavar em erlenmeyer a meia rosca por 15 minutos a 121º C/1 atm.
Finalidade:
 O ágar MacConkey é um meio diferencial seletivo utilizado para o isolamento e diferenciação de enterobactérias e uma variedade de outros bastonetes gram-negativos provenientes de amostras clínicas.
Ágar Sangue 
O Ágar Base Sangue é recomendado como uma base à qual o sangue pode ser adicionado para uso no isolamento e cultivo de microorganismos patogênicos exigentes como Neisseria, Streptococcus, etc.
Definição:
O Ágar Sangue de Carneiro é um meio de cultivo para a grande maioria das bactérias gram positivas e gram negativas, como fungos (bolores e leveduras), a partir de uma base rica e suplementada que oferece ótimas condições para o desenvolvimento de microorganismos.
Preparação:
Pesar, hidratar e autoclavar o ágar base segundo as recomendações do fabricante;Retirar o ágar base da autoclave e deixar esfriar à temperatura aproximada de 45oC ± 2oC, de preferência em banho-maria;Tomando todos os cuidados de assepsia, adicionar vagarosamente o sangue referente a 5% do meio preparado e homogeneizar cuidadosamente.Distribuir assepticamente em Placas de Petri estéreis.Proceder os controles necessários.
Finalidade:
 Ele é utilizado como agente solidificante, muito semelhante à maneira como a gelatina é utilizada como agente solidificante na culinária. O Ágar Bacteriológico Kasvi, por exemplo, é um tipo de ágar purificadono qual impurezas, pigmentos e sais foram removidos ou reduzidos ao mínimo.
Ágar XLD
Meio moderadamente seletivo recomendado para isolamento e diferenciação de patógenos entéricos, presuntivo de Salmonella spp. e Shigella spp
Definição:
O ágar XLD ou ágar desoxicolato Xilose Lisina é uma cultura sólida meio selectivo diferencial e para o isolamento de enteropatogénios. Taylor projetou a fórmula do agar XL (Xilosa, Lisina) para melhorar o isolamento do gênero Shigella.
Preparação: 
Pesar 55 gr de meio XLD desidratado e dissolver em 1 litro de água. Aqueça e mexa a mistura até atingir o ponto de ebulição. Não superaqueça, pois o calor danifica o meio ambiente e cria um precipitado que altera a morfologia das colônias típicas. Este meio não deve ser autoclavado. Ao dissolver, deve ser transferido para um banho de água a 50 ° C. Ao esfriar, deve ser servido diretamente em placas de Petri estéreis. Eles podem ser servidos em pratos simples ou duplos. Eles podem solidificar e são armazenados na geladeira até o uso. O pH final do meio deve ser 7,4 ± 0,2. A cor do meio preparado é vermelho alaranjado, translúcido, sem precipitado
Finalidade:
O ágar XLD é utilizado para a recuperação de enteropatógenos, principalmente do gênero Shigella e secundariamente do gênero Salmonella. É útil para avaliar amostras de fezes, água e alimentos. O ágar XLD é amplamente utilizado em laboratórios de bacteriologia por sua alta eficiência na recuperação de Shigella e também possui uma boa recuperação do gênero Salmonella
Ágar Hektoen
É um meio seletivo para isolamento e diferenciação de bacilos gram- negativos entéricos. É utilizado para isolar e diferenciar Salmonella e Shigella, as quais causam uma variedade de doenças gastrointestinais sérias em humanos.
Definição:
O ágar Hektoen entérico (HE) é um meio de cultura para o isolamento de Shigella e Salmonella . Baseia-se no uso de sais biliares para inibição seletiva e dois sistemas indicadores: azul de bromotimol e fucsina ácida como indicadores de dissimilação de carboidratos e ferro férrico como indicador da formação de sulfeto de hidrogênio a partir de tiossulfato. O ágar Hektoen permite um bom crescimento de Shigella spp., pois a inibição desses organismos pelos sais biliares é reduzida pela adição de quantidades relativamente grandes de peptona e carboidratos.
Preparação: 
Meio desidratado:Suspender 76 g de pó em 1 litro de água destilada ou deionizada. Misturar bem. Aquecer agitando com frequência até que o pó esteja completamente dissolvido. Não Autoclavar.Técnica:Inocular as placas estriando diretamente a amostra na superfície do ágar ou espalhando uma amostra de uma cultura de enriquecimento. Incubar a 35 ± 2°C por 18-24 horas.Interpretação dos Resultados:Shigella e Providencia spp. formam colônias verdes, com aspecto úmido. Salmonella e Proteus spp. crescem como colônias azuis-esverdeadas, com ou sem centro preto devido à produção de H2S.Os coliformes, que são principalmente fermentadores rápidos de lactose-sacarose-salicina, desenvolvem colônias vermelho-salmão cercadas por uma zona de precipitação de bile.Enterococos, estafilococose outras bactériam Gram-positivas são parcialmente ou completamente inibidas.Notar que devem ser realizados outros testes para confirmar a identificação presuntiva dos organismos isolados neste meio.
Ágar CLED
Definição:
O meio de cultura CLED (Cystine Lactose Electrolyte Deficient) é recomendado para o isolamento de microrganismos urinários. Também permite diferenciar os germes que fermentam a lactose dos germes não fermentadores. Os germes lactose originam colônias amarelas-pálidas e amarelas por acidificação do meio.
Preparação: 
Placas prontas para uso: Retirar o pacote da refrigeração e, em ambiente asséptico, separar as placas a serem usadas, devolvendo o restante ao refrigerador; Colocar as placas em estufa bacteriológica entre 35-37oC pelo tempo necessário para adquirirem esta temperatura, ou deixar estabilizar/secar em temperatura ambiente;Usando procedimentos adequados, proceder a inoculação do material diretamente na superfície do meio;Incubar o material em estufa bacteriológica entre 35-37°C por 18-24h;Após a incubação, avaliar o padrão de crescimento, aspectos morfológicos e a fermentação ou não da lactose; Devido a exigências especiais, alguns microrganismos podem necessitar de um período maior de incubação, se não ocorrer o crescimento nas primeiras 24 horas, ou caso o crescimento apresentado não seja o suficiente, incubar o material em estufa bacteriológica entre 35-37oC, por mais18-24h;
Finalidade:
Meio de cultura nutritivo, não seletivo e diferencial destinado a cultura de urina. Este meio de cultura promove o crescimento de agentes patogênicos e contaminantes urinários e reduz a formação de swarming (véu) de espécies de Proteus spp., devido a baixa concentração de eletrólitos.
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