meios de cultura e controle do crescimento microbiano

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@lilyfazvet 
 
 
 
 
 
 
 Um meio de cultura consiste em um 
material rico em nutrientes preparado em 
laboratório para o crescimento de 
microrganismos; 
 Já cultura significa um conjunto de 
microrganismos que crescem e se 
multiplicam no meio de uma cultura; 
 
 
 
 Existem dois tipos de meios: o meio 
definido, que compõe toda composição 
química conhecida, e o meio complexo, 
que engloba toda composição química 
não conhecida (composto por nutrientes 
como extrato de levedura, de carne ou de 
plantas). 
 
 
 Não existe um meio de cultura universal, 
mas sim vários tipos de meios para 
diversas finalidades diferentes; 
 Alguns são meios gerais, ou seja, 
permitem o crescimento de muitas 
espécies, entretanto, outros são 
específicos, ou seja, servem para 
identificação de espécies; 
 Para se ter sucesso no cultivo de 
microrganismos é necessário o 
conhecimento de suas exigências 
nutricionais, para que os nutrientes sejam 
fornecidos na forma e proporção 
adequadas. 
 
 
Classificacao 
 
 
 
 Os meios de cultura podem ser 
classificados de acordo com o seu estado 
físico, a procedência dos seus 
constituintes, a sua composição química e 
a sua finalidade bacteriológica ou 
micológica; 
 Estado físico: 
- sólidos: contém agentes solidificantes, 
principalmente ágar (1 a 2%), que 
contribuem para a formação de colônias; 
- semissólidos: consistência intermediária 
(0,075 a 0,5% de ágar) que permite o 
crescimento dos microrganismos em 
diferentes tensões de oxigênio, 
verificação da motilidade (visualizada pela 
turvação); 
- líquidos ou caldos: sem agentes 
solidificantes. Servem para a ativação de 
culturas, repiques e provas bioquímicas. 
 Procedência dos constituintes: 
- naturais ou complexos: sem composição 
química definida, geralmente extratos 
vegetais, animais ou de outros 
microrganismos. São usados para 
microrganismos menos exigentes na 
nutrição, como o meio de Löwenstein 
Jensen (Mycobacterium tuberculosis), 
que contém sais, ovos e pedeços de 
batata; 
- artificiais ou quimicamente definidos: 
composição química definida. São usados 
para microrganismos mais específicos e 
exigentes, como caldo Tetrationato 
(Samonella), que contém apenas iodo, KI 
e água. 
 
 
 
 
 
 Meio de Lowenstein Jensen Caldo Tetrationato 
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@lilyfazvet 
 Composição química: 
- simples: permitem o crescimento 
bacteriano sem exigências especiais, 
como caldos e ágar simples; 
- especiais: quando cumprem exigências 
vitais de determinados organismos, como 
ágar sangue e ágar chocolate. 
 Finalidade bacteriológica ou micológica: 
- identificação: realização de provas 
bioquímicas e verificação de funções 
fisiológicas de organismos, como o ágar 
citrato e o caldo nitrato; 
- dosagem: determinações de vitaminas, 
antibióticos e aminoácidos; 
- contagem: determinação quantitativa da 
população microbiana, como o ágar de 
contagem de placas; 
- estocagem ou manutenção: garantem a 
viabilidade de microrganismos, como o 
ágar sabouraud; 
- meios de pré-enriquecimento: 
dessensibilização de microrganismos que 
sofreram algum tipo de tratamento 
(térmico ou químico), como a água 
peptonada e o caldo lactosado; 
- meios de triagem: avaliar determinadas 
atividades metabólicas permitindo 
caracterização e identificação presuntiva 
de muitos microrganismos. 
 
Meios de Cultura 
 Meio seletivo: ele favorece o crescimento 
de uma determinada bactéria de interesse 
enquanto impede o crescimento de 
outras; 
- exemplo: ágar Sabouraud dextrose, pH 
5,6, é utilizado no crescimento de fungos 
que são favorecidos, em relação as 
bactérias, pelo baixo pH. 
 Meio diferencial: facilita a identificação de 
um determinado organismo; 
- exemplo: meio ágar-sangue, utilizado 
para a identificação de bactérias capazes 
de destruir células sanguíneas (gera um 
anel claro em torno da colônia). 
 Meio seletivo/diferencial: favorecem o 
crescimento de determinadas bactérias 
enquanto permitem a sua identificação; 
- exemplo: Meio McConkey que contém 
sais de bile e cristal violeta. 
 Meio de enriquecimento: favorece o 
desenvolvimento de uma população 
bacteriana que está em desvantagem 
entre outras populações; 
- exemplo: isolar bactérias que oxidam 
fenol, fornecendo fenol como única fonte 
de carbono. 
 Meios redutores: meios com reagentes, 
como o tioglicolato de sódio, que é capaz 
de se combinar com o oxigênio dissolvido 
eliminando este elemento do meio de 
cultura (específico para microrganismos 
anaeróbicos). 
 
 
Agar nutriente 
 
 É simples, de fácil preparo e barato; 
 É utilizado na análise de água, alimentos 
e leite como meio para cultivo de amostras 
submetidas a exames bacteriológicos e 
isolamento de organismos para culturas 
puras; 
 Sua cor original é branco opalescente; 
 - Positivo – crescimento na superfície. 
 
Composição g/l 
Extrato de carne 1.0 
Extrato de levedura 2.0 
Peptona 5.0 
Cloreto de sódio 5.0 
Agar 15.0 
pH final: 6.8 ± 0.2 a 25º 
 
Microrganismos ATCC Crescimento 
Enterococcus faecalis 29212 Bom 
Escherichia coli 25922 Bom 
Pseudomonas aeruginosa 27853 Bom 
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Agar MacConkey 
 
 
 É destinado para o crescimento de 
bactérias Gram negativas e indica a 
fermentação de lactose; 
 Colônias de bactérias (positivas) que 
fermentam lactose tornam o meio rosa 
choque e as bactérias que não são 
fermentadoras de lactose tornam o meio 
amarelo claro; 
 A sua cor original é um rosa avermelhado. 
 
Agar sangue 
 
 
 Possui uma coloração vermelha escura e 
opaca, oferecendo excelentes condições 
de crescimento para a maioria dos 
microrganismos; 
 Os eritrócitos íntegros que a constituem 
favorecem a formação de halos de 
hemólise: 
- beta hemólise: presença de halo 
transparente ao redor das colônias (lise 
total das hemácias - Streptococcus 
pyogenes); 
- alfa hemólise: presença de halo 
esverdeado ao redor das colônias (lise 
parcial das hemácias – Streptococcus 
agalactiae); 
- gama hemólise: sem hemólise 
(Enterococcus faecalis). 
 
 
 
 
 
Agar chocolate 
 
 
 É utilizado para microrganismos exigentes 
ou fastidiosos; 
 Ao meio é adicionado sangue de cavalo, 
carneiro ou coelho em altas temperaturas; 
 Sua cor original é marrom escuro; 
 As bactérias Neisseria fazem um 
pigmento amarelo surgir no meio, 
enquanto as Haemophilus fazem 
aparecer um pigmento creme. 
 
Agar salmonela-shigella 
 
 
Diagnóstico de Streptococcus spp 
00 
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@lilyfazvet 
 A ágar SS possui componentes (sais de 
bile, verde brilhante e citrato de sódio) que 
inibem microrganismos Gram positivos; 
 Ela serve para selecionar e isolar 
espécies de Salmonella e Shigella, em 
amostras de fezes, alimentos e água; 
 Tanto a Salmonella quanto a Shingella 
são de difícil crescimento; 
 Colônias com centro escuro indicam a 
presença de Salmonela e colônias 
incolores indicam a presença de Shigella. 
 
Agar Sabouraud 
 
 
 Ele favorece o crescimento de diversos 
fungos leveduriformes e filamentosos; 
 É composto por dextrose, ágar e 
peptonas; 
 Sua cor original é amarelo claro 
opalescente e, após o crescimento, deve-
se seguir a identificação do 
microrganismo que cresceu. 
 
 
 As técnicas de semeadura são os 
métodos pelos quais se transfere inóculos 
bacterianos de um meio de cultura ou 
material a ser analisado (como secreções 
e alimentos) para um outro meio de 
cultura; 
 Para garantir que apenas o 
microrganismo desejado seja semeado, 
são utilizadas técnicas assépticas, 
visando a não contaminação de materiais, 
meios e culturas; 
 ; 
 
 
Estria sinuosa 
 Método: semear com alça ou 
agulha bacteriológica, em zig-
zag, partindo da base para a 
extremidade do bizel 
(superfície inclinada do meio); 
 Objetivo: obtenção de intensa 
massa de microorganismos. 
 
 
Estria reta 
 Método:semear com agulha 
bacteriológica, fazendo uma 
linha reta, com cuidado de não 
ferir o Agar, partindo da base 
para a extremidade do bizel 
(superfície inclinada do meio); 
 Objetivo: obtenção de pequena 
massa de microrganismos. 
 
Difusao 
 Método: uma alçada da 
colônia (Agar em placa) ou 
da cultura (de outro meio ou 
líquido) é introduzida no 
meio líquido, com agitação 
da alça, para maior difusão 
dos microorganismos (da 
alça para o meio e 
homogeneização no meio). Pode-se 
inclinar o tubo a 30° e esfregar o inóculo 
na parede do mesmo, quando o tubo 
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@lilyfazvet 
retornar à posição original o inóculo se 
difundirá no meio; 
 Objetivo: é um repique genérico para 
crescimento bacteriano em meio líquido. 
 
 
Estria Simples 
 Método: transferir uma 
alçada da cultura para 
meio sólido em placa e 
estriar com a alça 
bacteriológica sobre o 
meio. A estria pode ser 
realizada em 
movimento de zig- zag 
(estria sinuosa) ou 
como uma linha reta 
sobre o meio (estria reta); 
 Objetivo: Essa técnica é muito utilizada 
para visualização de determinadas 
propriedades metabólicas, como a 
produção de enzimas hidrolíticas 
(hidrólise de substâncias do meio – gema 
de ovo, sangue), e produção de 
pigmentos. 
 
Pour-plate 
 A técnica também é conhecida como 
disseminação; 
 Método: transferir 1 
ml da cultura para 
placa de Petri vazia, 
colocar 10 – 20 ml do 
meio fundido (e 
resfriado a cerca de 
45 – 50°C) sobre a 
cultura e 
homogeneizar suavemente com 
movimentos circulares. 
 Objetivo: contagem bacteriana; 
 A técnica também é utilizada para análise 
de microrganismos anaeróbios, 
adicionando uma outra camada de meio 
fundido após o endurecimento da primeira 
camada. 
 
Spread-plate 
 Método: Transferir 0,1 
ml da cultura para o 
meio sólido na placa e 
espalhar 
uniformemente com a 
própria ponta da 
pipeta, ou alça 
bacteriológica/ swab/ 
alça Drigalsky; 
 Objetivo: obtenção de 
crescimento confluente, ou para 
contagem bacteriana; 
 Esta técnica é muito utilizada na 
realização de antibiogramas. 
 
Estrias multiplas 
 Método: transferir uma 
alçada da cultura para 
um meio sólido em 
placa e estriar com a 
alça bacteriológica 
sobre o meio. 
 Objetivo: obtenção de 
colônias isoladas. É 
importante não cruzar 
as estrias, para reduzir o 
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inóculo e obter colônias isoladas; 
 Pode-se, alternativamente, flambar a alça 
entre as estrias e tocar a ponta da estria 
anterior, arrastando um pequeno inoculo 
para a próxima estria. 
 
 Os microrganismos devem ser 
preservados para produzir vacinas vivas 
modificadas e para estocar culturas de 
bactérias e de fungos usadas em 
pesquisas; 
 A preservação deve garantir a viabilidade, 
a isenção de contaminações e a 
estabilidade genética; 
 Subcultivos podem ser usados para 
preservar bactérias por curtos períodos, 
mas esse procedimento possui limitações, 
como a morte de algumas células 
bacterianas ou o risco de contaminação e 
de mutação; 
 Os métodos de preservação por longos 
períodos incluem liofilização, 
ultracongelamento em nitrogênio líquido a 
-190oC e congelamento a -70ºC; 
 Esses métodos de preservação, quando 
corretamente utilizados, podem manter 
microrganismos em estado hipobiótico por 
mais de 30 anos e garantir que 
permaneçam inalterados e sem 
contaminação; 
 Entretanto, o congelamento prejudicar os 
microrganismos, então produtos químicos 
devem ser empregados para diminuir os 
danos e garantir a viabilidade da maioria 
dos microrganismos. 
 
 O controle do crescimento microbiano 
consiste na limitação ou na inibição do 
crescimento das células; 
 Os métodos para inibir o crescimento 
microbiano incluem a descontaminação, o 
tratamento de um objeto ou uma 
superfície, e a desinfecção, um processo 
direcionado diretamente contra os 
patógenos, embora possa não eliminar 
todos os microrganismos; 
 Métodos físicos de controle do 
crescimento microbiano são 
frequentemente utilizados para promover 
a descontaminação microbiana, 
desinfecção e esterilização 
 O calor, a radiação e a filtração também 
são capazes de destruir ou remover os 
microrganismos; 
 O método de controle do crescimento 
microbiano mais difundido consiste no uso 
do calor, porém, existem fatores que 
interferem na suscetibilidade dos 
microrganismos ao calor, como a 
temperatura e a duração do tratamento 
térmico; 
 Além disso, produtos químicos são 
rotineiramente utilizados para controlar o 
crescimento microbiano; 
 Agentes que matam organismos são 
frequentemente denominados agentes-
cidas, dessa forma, temos agentes 
bactericidas, fungicidas e viricidas, que 
matam bacterias, fungos e virus, 
respectivamente; 
 Agentes que não matam, mas inibem o 
crescimento, são denominados agentes –
státicos, e incluem compostos 
bacteriostáticos, fungistáticos e 
viristáticos; 
 Métodos físicos e químicos podem ser 
utilizados para a inativação e a inibição de 
microrganismos; 
 Agentes químicos incluem drogas 
antimicrobianas, desinfetantes e 
conservantes de alimentos; 
 Já as técnicas que inativam bactérias ou 
interferem em seu metabolismo utilizam 
temperatura elevada, baixos valores de 
pH, dessecação e pressão osmótica alta; 
 A esterilização é o método empregado 
para destruir microrganismos junto a 
equipamentos usados em procedimentos 
microbiológicos ou cirúrgicos; 
 Os métodos de esterilização são efetivos 
para destruir agentes bacterianos, 
fúngicos e virais, mas não agentes 
infecciosos não-convencionais, como os 
príons; 
 Quando se trabalha com endósporos 
bacterianos, como os do gênero 
Clostridium, é necessária uma 
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temperatura de 121°C por 15 minutos 
para sua inativação; 
 Vale ressaltar que o tempo de morte 
térmica depende do tamanho inicial da 
população microbiana; 
 O tempo de redução decimal (valor D) é o 
tempo em minutos, à determinada 
temperatura, necessário para redução de 
90% da população de células viáveis; 
 O valor D é inversamente proporcional à 
temperatura e independe do tamanho da 
população inicial.