Pratica 1 Biotecnologia Farmaceutica

Prévia do material em texto

REGRAS BÁSICAS DE SEGURANÇA NO LABORATÓRIO: 
 
1. Durante a aula prática mantenha sempre a atenção ao roteiro, tendo-o sempre próximo a você. Pode ser 
efetuada uma marcação com caneta sob cada item realizado do experimento, de forma a não se perder 
durante a execução; 
2. Leia sempre o roteiro antes de iniciar a prática e mesmo antes das explicações do professor; 
3. Observe a localização do material e dos equipamentos de emergência (chuveiro, lava olhos, etc); 
4. Não abra qualquer recipiente antes de reconhecer o seu conteúdo pelo rótulo; 
5. Não pipete líquidos diretamente com a boca; use pipetas adequadas; 
6. Não tente identificar um produto químico pelo odor e nem pelo sabor; 
7. Não deixe de utilizar os equipamentos de proteção; 
8. Não adicione água aos ácidos, mas sim os ácidos à água; 
9. Não trabalhe de sandálias, chinelos ou sapatos abertos e de salto no laboratório; 
10. Sempre identifique o conteúdo presente nos frascos ou tubos utilizados no experimento com caneta 
para os vidros. Isto facilita o seu descarte adequado por parte dos responsáveis pelo laboratório; 
11. Mantenha os solventes em recipientes adequados e devidamente tampados, bem como os materiais 
inflamáveis longe de fontes de calor (bico de Bunsen); 
12. Utilize a capela sempre que manipular reagentes ou solventes que liberem vapores; 
13. Conheça as propriedades tóxicas das substâncias químicas antes de empregá-las pela primeira vez no 
laboratório; caso tenha dúvidas, consulte o professor ou o técnico a respeito; 
14. Se tiver cabelos longos, deixe-os presos ao realizar qualquer experiência no laboratório; não se alimente 
e nem ingira líquidos nos laboratórios. 
 
Título da Aula: Extração de DNA de morango e verificação de 
integridade do DNA por espectrofotômetro 
 
OBJETIVO: 
Explicar a função do DNA em diferentes células e seus prováveis usos na biologia molecular e biotecnologia. 
Explicar a extração de DNA desta aula e comparar com a que é realizada em laboratórios de pesquisa 
Explicar, resumidamente, os procedimentos mais rotineiros de clonagem molecular usando a técnica de DNA 
recombinante. 
Discutir efeito hipocrômico do DNA e pureza de DNA 
 
PROCEDIMENTO: 
Retire as sépalas e os cabos de 3 ou 4 morangos e coloque os morangos dentro de um saco plástico e 
adicione 50-80mL de solução de lise. 
Feche o saco e os amasse bem por 1-2 minutos aproximadamente, (pode ou não colocar o saco em um banho 
maria 600C por 5-10 minutos a fim de melhorar a lise). 
Passe a mistura obtida pelo aparato filtrante e coloque cerca de 10-20 mL em tubo largo limpo. 
Colocar o etanol absoluto gelado (na proporção de 1:2) pelas paredes e verificar a precipitação de DNA 
quando o etanol se encontra com a solução. Enrolar com um bastão de vidro o DNA presente no tubo (depois 
pode misturar levemente por inversão) 
Dissolver uma parte do DNA em água, e medir a Abs 260nm. Aquecer e medir novamente. Verificar o efeito 
hipocrômico. Discutir as medidas com = 232 nm e 280nm. 
 
Descarte do material utilizado conforme Normas Internacionais de Segurança 
O bagaço pode ser jogado no lixo, e as soluções podem ser jogadas na pia com a água correndo. 
 
Exercício de fixação 
1. Por que é necessário macerar o morango? 
2. Em que etapa do procedimento ocorre o rompimento das membranas das células do morango? Explique. 
3. Qual a função do sal de cozinha? 
4. Qual o papel do álcool? 
5. Por que você não pode ver a dupla hélice do DNA extraído? 
6. Considerando os procedimentos da extração do DNA genômico, você espera obtê-lo sem quebras 
mecânicas e/ou químicas? 
 
 
Título da Aula: Observação de leveduras 
OBJETIVO: 
Observar as leveduras utilizando diferentes técnicas. 
Discorrer sobre a participação das leveduras em processos fermentativos. 
Explicar fermentação e respiração em leveduras 
 
 
PROCEDIMENTO: 
A. Observação macroscópica 
Observar e comparar a textura, a cor e o cheiro do fermento seco e do fermento fresco. 
B. Observação das colônias crescidas em placa de Petri 
Observar as colônias de leveduras Saccharomyces cerevisae crescidas em placa de Petri 
C. Observação microscópica. Observar, no microscópio, um pouco de levedura fresca, fermento seco, e da 
placa em uma mesma lâmina. Explicar o que é fermento seco 
D. Observação de colônias 
Fazer lâmina com lamínula e azul de metileno ou tinta nanquim. 
Pode-se fazer coloração de Gram para observação das leveduras 
 
Descarte do material utilizado conforme Normas Internacionais de Segurança: 
As soluções presentes nos tubos deverão ser desprezadas na pia, com água corrente. 
 
 
Exercício de fixação 
1- Comparar eucariotos e procariotos não só na presença de membrana nuclear, mas em outras 
características. 
2- Como poderemos saber se é uma levedura ou cocos? 
3- Por que o tempo de prateleira é maior em levedura seca que em fresca?