Exercícios Meios de cultura

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EXERCÍCIOS –MEIO DE CULTURA
1- Qual a função do Ágar em um meio de cultura?
Solidificar
2- Obter uma colônia pura significa isola-la a partir de um grupo de contaminantes. Porque é necessário um meio sólido em placa para isso? Por qual motivo não posso realizar esse procedimento utilizando um meio em caldo ou camada alta/inclinado?
As vantagens de meios sólidos sobre meios líquidos incluem o isolamento de culturas puras e capacidade de realizar contagens, outros meios líquidos ou semissólidos não possibilitam.
3- O que diferencia um meio de cultura complexo de um quimicamente definido?
As quantidades do meio complexo são variáveis, as de meios quimicamente definidos são exatas.
4- Defina os meios de cultura abaixo em relação ao estado físico, a composição química e aos objetivos funcionais.
Ágar batata – dextrose, acidificado → Sólido, complexo e contagem de fungos e leveduras;
Ágar citrato de Simmons → Sólido, sintético, cloreto de sódio aumenta a pressão osmótica e mantém a isonomia do meio, e É útil para selecionar organismos que usam citrato como sua principal fonte de carbono e energia;
Ágar leite → Sólido, complexo e meio utilizado para confirmação do diagnóstico de Pseudomonas aeruginosa;
Práticas em Microbiologia Básica - LADMI
1
	
COMPOSIÇÃO DE ALGUNS MEIOS DE CULTURA
Práticas em Microbiologia Básica - LADMI
4
Ágar batata – dextrose, acidificado
Infusão de batata 	4g
Glicose 	20g
Ágar	15g
Água destilada	1000mL
Dissolver o meio em água destilada. Aquecer até ebulição. Distribuir o meio em tubos e esterilizar a 121°C/15 minutos. O pH após a esterilização é de 5,6. O meio é acidificado a pH 3,5 com solução estéril de ácido tartárico a 10% na proporção aproximada de 14 mL /litro de meio.
Sulfato de magnésio	0,2g
Fosfato de Monoamonium	1g
Fosfato de dipotássio	1g
Citrato de sódio	2g
Cloreto de sódio	5g
Ágar	15g
Azul de bromotimol	l0,05g
Água destilada	1000mL
pH: 6,9 +/- 0,1 desidratado/litro de água destilada. Distribuir 2 a 3 mL em pequenos tubos de ensaio e esterilizar a 121°C/15 minutos.
Ágar leite
Ao meio de ATGE esterilizado e resfriado a 50°C, adicionar 10mL de leite desengordurado estéril (110°C/15 minutos) para cada 100 mL do meio base. Distribuir em placas assepticamente.
Caldo lactose
Extrato de carne	3g
Peptona	5g
Lactose	5g
Água destilada	1000 mL
pH: 6,9 +/- 0,1. Esterilizar a 121°C/15 minutos
Ágar Mueller Hinton
Extrato de carne	5g
Caseína hidrolisada	17,5g
Amido	1,5g
Ágar	12,5g
Água destilada	1000 mL
pH: 7,4 +/- 0,2; esterilizar a 115°/10 minutos
Ágar nutritivo
Extrato de carne	3g
Peptona	5g
Ágar	15g
Água destilada	1000 mL
pH: 7,0 +/- 0,1; esterilizar a 121°C/15 minutos
Ágar Sabouraud
Peptona de carne	5g
Peptona de caseína	5g
D(+) Glicose	40g
Ágar	15g
Água destilada	1000 mL
pH: 5,6; Esterilizar a 121°C/15 minutos
Ágar Triptona Glicose Extrato (ATGE)
Triptona	5g
Glicose	1g
Extrato de levedura	2,5g
Ágar	15g
Água destilada	1000 mL
pH: 7,0 +/- 0,2;
Na preparação do Ágar nutritivo e ATGE, dissolver o meio em água destilada até o ponto de ebulição. Distribuir o meio em tubos ou frascos e esterilizar a 121°C/15 minutos.
Caldo de cérebro-coração (BHI – Brain Heart Infusion)
Infusão de cérebro	12,5g
Infusão de coração	5g
Proteose – peptona	10g
Glicose	2g
Cloreto de sódio (NaCl)	5g
Na₂HPO₄	2,5g
Água destilada	1000 mL
pH: 7,4 +/- 0,2; Esterilizar a 121°C/15 minutos
Caldo lactose suplementado
Cloreto de sódio	0,5g
Sulfato de magnésio	0,1g
Fosfato bibásico de potássio	0,1g
Extrato de carne	3,0g
Peptona	5,0g
Lactose	5,0g
Água destilada	1000 mL
Esterilizar a 121°C/15 minutos
Caldo malte
Maltose	12,75g
Dextrina	2,75g
Glicerol	2,35g
Peptona	0,78g
Água destilada	1000 mL
pH: 4,8; Esterilizar a 121°C/15 minutos
Caldo nutritivo
Extrato de carne	3g
Peptona	5g
Água destilada	1000 mL
pH: 7,0 +/- 0,2; Esterilizar a 121°C/15 minutos
Caldo tioglicolato
Peptona de caseína	15g
Extrato de levedura	5g
Glicose	5,5g
L-Cisteína	0,5g
Cloreto de sódio	2,5g
Tioglicolato de sódio	0,001g
Água destilada	1000 mL
pH: 7,1; Esterilizar a 121°C/15 minutos
Caldo vermelho de fenol
Extrato de carne	1g
Peptona	10g
Cloreto de sódio	5g
Vermelho fenol	0,018g
Água destilada	1000 mL
Este meio recebe adição de um açúcar (0,5%) e é usado em estudo de fermentação para a identificação de cultivos puros de microrganismos. A cor do meio deve ficar vermelho claro ou cereja. O pH final deve ficar em 7,4;
Esterilizar a 115°C/10 minutos.
Caseína Dextrose Ágar (CDA)
KH₂PO₄	0,5g
MgSO₄.7H₂O	0,2g
Glicose	2g
FeSO₄.7H₂O	0,01g
Caseína	0,2g
Ágar	15g
Água destilada	1000 mL 
A Caseína é insolúvel em água, deve ser solubilizada em solução de NaOH com meia hora de antecedência ao preparo do meio, evitando a formação de precipitados ao fundo do meio.
Adicionar o ágar após o ajuste do pH utilizando HCl 0,1M e NaOH 0,1M para 6,5 ~ 6,6. Esterilizar a 121°C/15 minutos.
Adicionar 2,5 mL de Nistatina, antifúngico, sob condições estéreis antes de verter o meio pronto em placas. NÃO AUTOCLAVAR
Gelatina nutritiva
Peptona	5g
Extrato de carne	3g
Gelatina	120g
Água destilada	1000 mL
pH: 7,0 +/- 0,2;
Dissolver 128g/litro de água destilada, e em seguida esterilizar na autoclave a 115°C/10 minutos.
Meio de Clark-Lubs (Meio para VM e VP)
Peptona tamponada	7g
Dextrose	5g
Fosfato dipotássico	5g
Água destilada	1000 mL
pH: 6,8 – 7,0;
Dissolver 17g do meio em 1 litro de água destilada à temperatura ambiente. Distribuir em tubos (10mL); esterilizar a 121°C/15 minutos.
Meio SIM (Sulfeto-Indol-Motilidade)
Peptona	30g
Extrato de carne	3g
Ferro peptonizado	0,2g
Tiossulfato de sódio	0,025g
Ágar	3g
Água destilada	1000 mL
pH: 7,0
Dissolver o meio em água destilada. Distribuir o meio em tubos para que fiquem numa profundidade de cerca de 7,5cm e se esteriliza a 121°C/15 minutos. Os tubos se solidificam em posição vertical.
Meio Yeast Manitol Agar (YMA)
Manitol	10g
KH₂PO₄	0,5g
Extrato de levedura	0,5g
NaCl	0,1g
Azul de bromotimol	5 mL
Ágar	15g
pH: 7,0 +/- 0,2; Esterilizar a 121°C/15 minutos