Exercício - Enzima GLR - Atividade Enzimática - Espectrofotometria

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BIOQUIMICA (IQB-366) - 2022/1- Profa Elis Eleutherio 
A enzima glutationa redutase (GLR) catalisa a seguinte reação 
GSSG+NADPH+ H 2 GSH +NADP
LBEDCA 
GSH é a forma reduzida do tripeptideo glutationa (Y-L-glutamil L-cisteinil glicina). cuja
forma oxidada, GSSG, tem duas moléculas de glutationa ligadas através de uma ponte
dissulfeto. NADPH é a forma reduzida do di-nucleotideo nicotinamida adenina fosfato; sua 
forma oxidada é NADP". GLR está presente no citosol de vários organismos aeróbicos. 
Para ter acesso àenzima, e poder medir sua atividade, é necessário romper a célula. Após 
o rompimento, centrifuga-se e recolhe-se o sobrenadante, onde encontra-se 
a enzima.
Este sobrenadante é conhecido como extrato celular. Para a determinação da atividade 
GLR, mistura-se 2,6 mL de tampão Tris 0,1M pH8,0; 0,2 mL de GSSG (50mg/mL); 0,1 mL 
de extrato de células e dispara-se a reação com 0.05 mL de NADPH (10 mg/mL). A 
cinética da reação é acompanhada pelo consumo de NADPH, efetuando-se leituras de 
absorbância a 340nm, de 10 em 10 segundos, durante 3 minutos.
AX 
a) A partir dos dados mostrados a seguir, determine a atividade especifica da GLR 
expressando-a em U/mg proteina. A concentração de proteina no extrato celular é 20 mg/ 
ml. Apresente os cálculos usados na determinação. Dados: 
1)1 unidade de atividade de GLR (U) equivale ao consumo de 1 umol de NADPH por 
minuto. Dy1ern 
2) K NADPH 6,22 mM (Abs = K. Concentração)
AAFUTd 
T (min) Abs Abs/nim
7c 0,753 
0,738 
0 -0,0921xl- 0,754 o.7 
olrulv 
0,17 0, o.72 
R 0,9953 
0,33 
0,5 
0,724 
0,708 
0,694 0,67 
0,8 0,681 
0,658 L 1 
Aiuiduss1,17 0,644 
1,33 
1,5 
1,63 
1,83 
0,63 
0,618 
0,605 
0,592 
2 0,58 
2,17 
2,33 
0,568 ulplicond (alo V o4ul - 2,95 
0,556 
0,545 
0,533 
0,521 
0,51 
2,5 3,5 
2,67 
2,83 
2,Umn TRIS 
02ml 6536 
od Pnl ¬x+ [E) = 20 mo 
2ro d pln 
Tempo fnin) 
3 
b) O que aconteceria com o valor obtido para a atividade se ao invés de 
usar 0,1 ml de 
extrato celular fosse usado o dobro deste volume? E com a atividade específica? Explique
C) Explique como o valor de K NADPH foi obtido?
CO
 
b)Bss o weomu ofi dw do ern to ellu debro 30 
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