Relatório de Práticas de Hematologia - Coleta de sangue venoso, determinação do hematócrito, contagem manual de hemácias e leucócitos

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UNIVERSIDADE CATÓLICA DO SALVADOR
ESCOLA DE SAÚDE
CURSO DE BIOMEDICINA
DISCIPLINA: HEMATOLOGIA (BME027)
RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS DE HEMATOLOGIA DA UNIDADE I
Coleta de sangue venoso, determinação do hematócrito, contagem
manual de hemácias e leucócitos
Salvador – Bahia
2022
SUMÁRIO
INTRODUÇÃO 3
OBJETIVOS 4
MATERIAL E MÉTODOS 4
3.1 MATERIAIS 4
3.2 METODOLOGIA 5
RESULTADOS E DISCUSSÃO 12
CONCLUSÕES 15
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS 15
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1. INTRODUÇÃO
O exame de sangue tem como objetivo investigar, diagnosticar e tratar
diversos processos patológicos. A coleta de sangue é um procedimento realizado
frequentemente em laboratórios de análises clínicas e hospitais para o acompanhar
a saúde do paciente, onde a coleta é realizada por um profissional qualificado,
podendo ser realizada com agulhas e seringas estéreis ou através de tubos a vácuo
com ou sem a presença de anticoagulantes para a realização de exames
bioquímicos, hemogramas, sorológicos dentre outros.
O hemograma completo é um exame, o qual avalia de forma quantitativa e
qualitativa os elementos do sangue de um paciente, o exame pode ser dividido em
duas séries, a vermelha, a qual verifica a quantidade e características das hemácias
além da sua contagem, dosagem de hemoglobina, hematócrito e índice
hematimétrico, essa parte do hemograma é chamada de Eritrograma. Já a série
branca avalia tanto os leucócitos quanto os seus precursores, além da realização da
contagem diferencial dos seus cinco tipos leucocitários, definida como Leucograma.
(Hemograma, UFPA).
O hematócrito (Ht) é um exame que pode ser feito separadamente como
também solicitado como parte do hemograma. É um parâmetro laboratorial, que
corresponde em porcentagem ao volume ocupado pelas hemácias contidas em
relação ao volume de sangue total, onde o resultado é obtido por meio da
centrifugação do sangue total em um tubo capilar de modo que os glóbulos
vermelhos fiquem firmemente ligados. Esse método serve para identificar e
diagnosticar anemia e policitemia; para o monitoramento do tratamento da anemia;
para verificar uma desidratação. A técnica de microhematócrito é utilizada para
contagem dos hematócritos. (Hemograma, UFPA).
A contagem de hemácias faz parte de uma das etapas do eritrograma; é um
exame de rotina realizado para mostrar se há alteração nos eritrócitos, que são
células de extrema importância para o organismo, como no transporte de O2 para
todo o corpo. Quando ocorre uma diminuição no nível de hemácias, o paciente
geralmente apresenta um quadro de anemia; quando ocorre um aumento, indica que
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o organismo necessita de mais oxigenação para as células, logo, há uma maior
produção de eritrócitos, e uma das causas disso pode ser tumor, desidratação,
fibrose, etc. Para a realização dessa contagem é necessário a realização de punção
venosa com a amostra de sangue inserida no tubo roxo, conhecido como EDTA, o
qual possui anticoagulante, sendo o mais utilizado nas análises hematológicas por
preservar a morfologia celular.
O leucograma é a parte do hemograma, onde através dele pode-se fazer uma
análise dos leucócitos/glóbulos brancos, conhecidos como as células de defesa do
organismo contra diferentes tipos de infecções e microorganismos. Ele é composto
pela contagem global e diferencial dos leucócitos, além de realizar a avaliação
morfológica. Esse exame é indicado para diagnosticar processos infecciosos,
inflamatórios, alérgicos, tóxicos e neoplásicos.
Os métodos empregados em sala foram a Determinação do hematócrito,
Contagem manual de hemácias e Contagem manual de leucócitos totais.
2. OBJETIVOS
O presente relatório, em geral, tem como objetivo apresentar a prática de
coleta de sangue juntamente com os equipamentos de proteção individual (EPI)
utilizados e a obtenção de amostras para a realização do exame hematológico. Com
relação aos objetivos mais específicos, visa executar um exame de
microhematócrito, caracterizar e reconhecer um hemocitômetro, além de reconhecer
e diferenciar as técnicas de contagem de eritrócitos e leucócitos.
3. MATERIAL E MÉTODOS
3.1 MATERIAIS
Nas aulas práticas referente às técnicas de análises hematológicas,
conduzidas pelo professor Sânzio Santana no Laboratório da Universidade Católica
do Salvador, foram utilizados seringa, agulha e máscara descartáveis, luvas,
algodão, álcool 70%, garrote, um tubo de coleta à vácuo de EDTA, descarte para
agulha, amostra sangue anticoagulado com EDTA, tubos capilares sem heparina,
massa selante, tubos de ensaio (10x75mm), micropipetas automáticas de 20μL e de
volume variável (10 a 100 μL, 100 a 1000μL e 1 mL), solução diluente de Gower,
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solução de Turk, ponteiras, microcentrífuga, câmara de Neubauer e microscópio
óptico. Após os alunos estarem devidamente vestidos, com luva, jaleco e sapato
fechado, fomos orientados pelo professor ao longo do desenvolvimento das
técnicas.
3.2 METODOLOGIA
Na primeira aula, no dia 16 de março, foram realizadas as práticas de coleta
de sangue venoso em tubo à vácuo e determinação do hematócrito. Para a
realização da coleta de sangue, primariamente, faz-se a higienização das mãos e,
em seguida, deve-se calçar as luvas, para maior segurança, eliminando os riscos de
contaminação. Posteriormente, no braço da colega voluntária, foi feito o
garroteamento, não excedendo o tempo máximo de 1 minuto, em torno de 8 a 10cm
do local de punção, geralmente é a fossa antecubital. Com o dedo indicador,
realiza-se a palpação, de forma a auxiliar na distinção entre veia e artéria; feita a
localização da veia mais calibrosa, é feita a assepsia do local, utilizando um algodão
umedecido com álcool 70%, com movimentos circulares de dentro para fora. Feita a
assepsia, não se deve mais encostar no local da coleta. Posteriormente, pede-se
para que a colega feche a mão, facilitando a localização do local apropriado para a
punção venosa e, após isso, foi feita a introdução da agulha do adaptador em um
ângulo de, aproximadamente, 30°, com a abertura do bisel voltada para cima,
evitando o rompimento do vaso, e rapidamente a introdução do tubo à vácuo no
dispositivo; nessa aula, foi utilizado um tubo de EDTA, contendo a tampa roxa,
utilizado na maioria das análises hematológicas, contendo um anticoagulante. Após
a introdução do tubo e a verificação se a punção foi bem sucedida, retira-se o
garrote; assim, o tubo se enche com o sangue e, após o preenchimento do tubo, se
coloca um algodão seco sobre o braço da voluntária para a retirada da agulha,
devendo-se auxiliá-la a pressionar de leve o local. O tubo é armazenado e os
demais materiais são descartados no local apropriado.
Na segunda aula realizada no mesmo dia, referente à determinação do
hematócrito, responsável pelo volume globular, um membro de cada equipe realizou
o procedimento que consistia em homogeneização da amostra sanguínea, coletada
em tubo de EDTA, com as extremidades do tubo capilar; deve-se preencher o tubo
por capilaridade, preenchendo 3⁄4 do volume do tubo capilar com o sangue, até que
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falte ~1,0cm para o topo (Figura 1). Posteriormente, os tubos foram fechados com
massa selante (Figura 2) e levados até a microcentrífuga, com a extremidade
voltada para o círculo externo, a 11.000rpm/5 min (Figura 3). Após o tempo
estimado, retira-se o capilar da centrífuga para posterior leitura de frente à tabela
apropriada; a massa selante deverá ficar abaixo da linha de ‘’0’’, movendo o capilar
até que a linha do plasma chegue a ‘’100’’.
Figura 1. Representação do tubo capilar preenchido com amostra de sangue coletada em tubo de
EDTA para posterior determinação do hematócrito.
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Figura 2. Representação da quelação do capilar com massa selante apropriada para que possa ser
levada à microcentrífuga.
Figura 3. Tubo capilar contendo amostra de sangue quelado com massa selante na microcentrífuga.
Na terceira aula, no dia 23 de março, foi realizada a técnica de contagem
manual de hemácias. Foi coletada uma amostra de sangue em tubo deEDTA
(tampa roxa); em seguida, um membro de cada equipe realizou a técnica. Foi
aspirado com uma pipeta, 3.980μL de solução de Gower para diluição em um tubo
de ensaio, já homogeneizado, na proporção de 1:200. Com auxílio de outra pipeta,
foi aspirado 20μL da amostra de sangue venoso anticoagulado e colocado no tubo
junto à solução de Gower para homogeneização, ‘’lavando’’ a pipeta por 2-3 vezes
no mesmo e, posteriormente, agitando levemente por aproximadamente 2 minutos.
Com auxílio de outra pipeta, foi aspirada uma pequena quantidade da amostra
(Figura 4) e, em seguida, colocado sobre a plataforma central da câmara de
Neubauer, até que fosse ocupada toda a área reticulada (Figura 5). Após o
procedimento, deve-se esperar por aproximadamente 3 minutos, tempo suficiente
para a sedimentação e posterior contagem ao microscópio com objetiva de 10x e
40x para análise das hemácias contidas nos 5 pequenos quadrantes no centro do
retículo, sendo os 4 externos e 1 central. Na contagem de hemácias, para cada um
dos quadrados médios, as hemácias situadas sobre as linhas duplas esquerda e
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superior são contadas, enquanto que as situadas sobre as linhas duplas direita e
inferior são excluídas; após a contagem, é feito o cálculo a partir da aplicação de
uma fórmula para determinação do número de eritrócitos/mm³.
Figura 4. Tubo de ensaio contendo solução de Gower sendo homogeneizado com amostra de
sangue anticoagulado em tubo de EDTA para posterior sedimentação em câmara de Neubauer para
contagem de eritrócitos.
Figura 5. Aplicação da amostra diluída na câmara de Neubauer com auxílio de uma micropipeta para
posterior sedimentação e contagem de eritrócitos.
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Na quarta aula, no dia 30 de março, foi realizada a técnica de contagem
manual de leucócitos. Foi coletada uma amostra de sangue em tubo de EDTA
(tampa roxa); em seguida, um membro de cada equipe realizou a técnica. Foi
aspirado com uma pipeta, 380μL da solução diluente de Turk (Figura 6) para diluição
em um tubo de ensaio, já homogeneizado, na proporção de 1:20 . Com o auxílio de
uma outra pipeta, foi aspirado 20μL da amostra de sangue venoso anticoagulado
(Figura 7) e colocado no tubo de ensaio junto à solução de Turk para
homogeneização (Figura 8), de forma cuidadosa, por ‘’up-down’’ [movimento de
aspiração e soltura do líquido no tubo], para destruição das hemácias e retenção
apenas dos leucócitos e plaquetas. Posteriormente, foi coletado 10μL da amostra
(Figura 9) com a micropipeta automática e, em seguida, colocado sobre a
plataforma central da câmara de Neubauer (Figura 10), até que fosse ocupada toda
a área reticulada. Após o procedimento, levou-se a mesma ao microscópio óptico
utilizando a objetiva de 10x e de 40x para análise dos leucócitos contidos nos
quadrantes externos do retículo.
Figura 6. Aplicação da solução de Turk com o auxílio de uma micropipeta automática em tubo de
ensaio.
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Figura 7. Coleta de sangue venoso com auxílio de uma micropipeta automática para posterior
homogeneização em tubo de ensaio contendo a solução de Turk.
Figura 8. Aplicação da amostra de sangue venoso em tubo de ensaio contendo solução de Turk para
posterior homogeneização.
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Figura 9. Tubo de ensaio contendo amostra diluída de solução de Turk e sangue venoso
anticoagulado.
Figura 10. Aplicação da amostra diluída na câmara de Neubauer para posterior contagem de
leucócitos em microscópio óptico.
4. RESULTADOS E DISCUSSÃO:
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Com relação à técnica de coleta sanguínea à vácuo, o grupo em questão não
praticou a metodologia, apenas foi observada a técnica aplicada com orientação do
professor. Porém, foi observada uma certa dificuldade quanto à destreza para coleta
com tubo à vácuo, por ser a primeira vez em que a maioria dos alunos realizaram e
observaram tal procedimento.
Acerca dos estudos de determinação do hematócrito, após a coleta,
centrifugação e utilização da escala de leitura obteve-se um valor de porcentagem
de hemácias no sangue de 34%, estando abaixo do valor referencial para mulheres
que varia de 36~46%, de acordo com a literatura, porém, vale ressaltar que variáveis
tidas nos valores podem ter sido consequentes do tempo de análise amostral tardio
em relação ao tempo de coleta, portanto não é indicativo de anemia ferropriva. Além
deste fator interferente, o uso do anticoagulante (EDTA) em excesso poderia estar
relacionado a diminuição do hematócrito e do volume corpuscular médio (OLIVEIRA
et al., 2010). Na imagem logo abaixo (Figura 11) observa-se a leitura através do
hematócrito, método que foi utilizado para determinação.
Figura 11. Determinação do hematócrito em leitura específica com amostra de sangue no tubo de
EDTA.
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A alta de hematócrito em um exame laboratorial poderia ser indicativo de
policitemias, caracterizada principalmente por esse aumento de eritrócito produzido
na medula óssea, em contrapartida, a diminuição é indicativo para anemia ou
hemorragia. Porém, como dito anteriormente, o estudo trabalhado ao longo deste
roteiro, não é confirmatório, sendo portanto suscetível a falhas.
Na contagem dos eritrócitos, após a homogeneização da amostra e
transferência para a câmara de contagem, na microscopia pode-se observar a
presença de "bolhas" como fatores interferentes na contagem. Para a determinação
do número de eritrócitos foi utilizado o material concedido por outra equipe, que
apresentava melhor qualidade visual para a análise quantitativa, com a autorização
consentida pelos integrantes (Figura 11).
Figura 12. Câmara de Neubauer contendo solução diluente mostrando eritrócitos (hemácias) vistos
na objetiva de 10x em microscópio óptico.
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O resultado da contagem manual de hemácias foi determinada a partir da
equação:
𝑁° 𝑑𝑒 ℎ𝑒𝑚á𝑐𝑖𝑎𝑠 (/𝑚𝑚³) = 𝑁° 𝑑𝑒 ℎ𝑒𝑚á𝑐𝑖𝑎𝑠 × 𝐹𝑎𝑡𝑜𝑟 𝑑𝑒 𝑑𝑖𝑙𝑢𝑖çã𝑜𝑁° 𝑑𝑒 𝑞𝑢𝑎𝑑𝑟𝑎𝑛𝑡𝑒𝑠 × 𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒 𝑑𝑎 á𝑟𝑒𝑎 𝑐𝑜𝑟𝑡𝑎𝑑𝑎 (𝑚𝑚³) =
𝑁° × 200
5 × 0,004𝑚𝑚2 =
𝑁° × 200
0,02𝑚𝑚³
𝑁° 𝑑𝑒 ℎ𝑒𝑚á𝑐𝑖𝑎𝑠 (𝑚𝑚³) = 432 × 10. 000
𝑁° 𝑑𝑒 ℎ𝑒𝑚á𝑐𝑖𝑎𝑠 (𝑚𝑚³) = 4. 320. 000 𝑒𝑟𝑖𝑡𝑟ó𝑐𝑖𝑡𝑜𝑠/𝑚𝑚³
A quantidade de eritrócitos varia de acordo com o sexo e a idade do paciente,
portanto, tratando-se de um indivíduo do sexo feminino, o número de hemácias
determina que está dentro da faixa de normalidade, entorno de 4.000.000~5.400.000
de eritrocitós por milímetros cúbicos.
Na contagem de leucócitos, não foi possível realizar a contagem devido,
possivelmente, a interferências externas, contaminando a lâmina, e a qualidade das
objetivas do microscópio óptico. Foi possível somente observar os quadrantes da
câmara de Neubauer mas, na passagem da objetiva de 10x para a de 40x, a
imagem torna-se turva, impossibilitando a visualização.
5. CONCLUSÕES:
Por meio das práticas realizadas, foi possível analisar a importância desses
exames e de cada etapa dos procedimentos laboratoriais. Apesar de todos os
avanços tecnológicos, testes como os que foram realizados em aula são
indispensáveis. Levando em consideração o exposto neste relatório, junto aos
resultados obtidos e os objetivos descritos, verifica-se que, de alguma forma, os
acadêmicos presentes nas práticas em questão puderam desenvolver suas
habilidades e competências, tornando-se possível a afirmação de que esses
processos são de extrema importância na tomada de decisões nos resultados e
clínica em que o paciente se encontra, devendo-se estar atentos principalmente aos
valores referenciais nos exames laboratoriais.
6. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS:
15
Como é realizada a contagem de células?. Kasvi. Disponível em: <
https://kasvi.com.br/como-e-realizada-contagem-de-celulas/>. Acesso em: 11 de abril
de 2022.
Hematócrito. UFRGS. Disponível em:
<https://www.ufrgs.br/lacvet/hematocrito.html/>. Acesso em: 11 de abril de 2022.
MOREIRA, Cícero Lasaro Gomes et al. A IMPORTÂNCIA DA REALIZAÇÃO DO
HEMOGRAMA PARA TRIAGEM DE ANEMIAS EM PESSOAS DA TERCEIRA
IDADE: UMA REVISÃO BIBLIOGRÁFICA THE IMPORTANCE OF PERFORMING
THE HEMOGRAM FOR SCREENINGANEMIA IN PERSONS OF THE THIRD AGE:
A.
Realizando a Técnica de Microhematócrito em Aula Prática, Unipampa,
Pampa,2012. Disponível em:
<http://seer.unipampa.edu.br/index.php/siepe/article/view/915>. Acesso: 11 de abril
de 2022.
Sangue + Cardiovascular. UNESP. Disponível em:
<http://sgcd.foa.unesp.br/home/departamentos/ciencias_basicas/aulas-sanguecardio
vascular.pdf>. Acesso em 11 de abril de 2022.
https://kasvi.com.br/como-e-realizada-contagem-de-celulas/
https://www.ufrgs.br/lacvet/hematocrito.html/
http://seer.unipampa.edu.br/index.php/siepe/article/view/915
http://sgcd.foa.unesp.br/home/departamentos/ciencias_basicas/aulas-sanguecardiovascular.pdf
http://sgcd.foa.unesp.br/home/departamentos/ciencias_basicas/aulas-sanguecardiovascular.pdf