Avaliação em Bacteriologia Clínica nil[1686]

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Avaliação em Bacteriologia Clínica (AV2)
Professor (a): Nicole Mariele Santos Röhnelt
Acadêmico (a):
 Questão 1:  TEXTO DISSERTATIVO
Uma das etapas essenciais para o diagnostico bacteriano é o crescimento em agar. É através desse crescimento que conseguimos fazer os testes de identificação específicos de cada espécie bacteriana. Os meios de cultivo apresentam características que permitem a reprodução e crescimento das bactérias, resultando em múltiplas colônias que podem ser observadas a olho nu e utilizadas para a identificação do organismo. Assim, existem diferentes classificações de meios e diferentes formas de semeadura. De acordo com os conhecimentos adquiridos, discorra sobre as questões abaixo:
a) Discorra sobre os meios de cultivo simples, enriquecidos e seletivos, apontando as suas funções.
 Os meio de cultura tem papel de grande importância na microbiologia e facilitam a análise e identificação de microrganismos onde o meio necessário para o crescimento in vitro dos dos mesmos, interferem em seu desenvolvimento. Contudo podemos diferenciar os meios de cultura pela sua composição física como por exemplo liquidos, solidos e semi-sólidos. Os meios líquidos são conhecidos como caldos devido a sua composição bem fluida que não possui solidificantes, os semi-sólidos que apresentam um taxa de solidificante intermediária, geralmente são usados em tubos de ensaio e os sólidos que já possuim solidificantes como ágar em sua composição, esses por sua vez usado em placas de Pretri. Podemos ainda classificar os meios devido a identificação dos microrganismos tendo em vista o qual de quer estudar. Temos como base os meios básicos, os enriquecidos, seletivos e outros. 
Os meios de cultura básicos são aqueles que permitem o crescimento, porém não atendem a nenhuma condição nutricional específica de um determinado microrganismo. São exemplos de meio de cultura simples o caldo e o ágar simples. Os meios de cultura enriquecido tem aspectos de um caldo ou meio sólido tendo em sua composição uma variedade de suprimento de nutrientes que promove o crescimento dos microrganismos que geralmente são meios que foram suplementados com materiais altamente nutritivos. Temos como exemplo o Ágar-Sangue, meio sólido enriquecido utilizado rotineiramente nos laboratórios de bacteriologia. Ainda podemos citar o Thayer-Martin que auxillia no crescimento de bactérias como N.gonorrhoeae. Já os meios de cultura seletivo tem o crescimento de certos microrganismos e inibe o crescimento de outros. Tendo em sua composição inibidores, geralmente antibióticos, que tornam inviável o crescimento de alguns microrganismos, em inibir é calro o crescimento do microrganismo alvo. Desse seguimento temos o Ágar MacConkey que inibe o crescimento de bactérias gram-posistivas sendo assim especificos para bactérias gram-negativas. Outro meio que podemos falar é o Ágar eosina-azul de Metileno (EMB) sendo seletivo inibidor do crescimento de gram-positivos, suportando assim o crescimento de organismos gram-negativos. Umas das vantagens do EMB é o fato do mesmo conseguir distinguir fermetaddores de lactose, como a bactéria Escherichia coli e os não fermentadores como as Pseudomonas aeruginosa.
b) O que é semeadura e qual o objetivo da semeadura por esgotamento, por estria simples e de distensão?
A forma como inóculamos os microrganimos bactérianos nos meios de cultura se dá o nome de semeadura. Existem nesse processo vários métodos de transferir as bactérias garantindo que os microrganimos esteaja semeados de forma correta e que facilitem a análise posteriormente, respeitando sempre técnicas de assépsias visando não contaminar os matérias e os meios de cultura. Dentre os métodos podemos citar:
A semeadura por esgotamento. Esse método tem por objetivos ter uma análise quantitativa, onde obteremos um gradiente decrescente de concentração do inóculo de bactérias, onde se permite o isolamento de todas as colônias. A técnica consiste em transferir uma alçada da cultura para meio sólido em placa e estriar com a alça bacteriológica sobre o meio. A placa é dividida em 4 quadrantes e a inoculação pode ser feita de 2 tipos: 
· 3 estrias: estriar em metade da placa, com movimentos de zig-zag. Quando atingir a metade, girar a placa 90° e estriar até a metade (1/4 da placa), girar mais 90° e estriar o meio restante.
· 4 estrias: estriar até 2/3 da metade da placa, girar 90°, estriar 2/3 do próximo quadrante (1/4 da placa), girar 90°, estriar mais 2/3 do próximo quadrante (1/4 da placa), girar 90° e estriar o restante do meio.
É muito importante não cruzar as estrias (não tocar a alça na estria anterior), para reduzir o inóculo a cada estria e obter as colônias isoladas, podendo alternativamente, flambar a alça entre as estrias e tocar a ponta da estria anterior, arrastando um pequeno inóculo para a próxima estria.
A semeadura por estria simples tem por objetivo uma análise quanlitativa e visualisar determinadas metabólicas, como por exemplo a produção de enzimas hidrolíticas (hidrólise de substâncias do meio - gema de ovo, sangue...), e produção de pigmentos. Para esse processo devemos transferir uma alçada da cultura para meio sólido em placa e estriar com a alça bacteriológica sobre o meio. A estria pode ser realizada em movimento de zig- zag (estria sinuosa) ou como uma linha reta sobre o meio (estria reta).
A semeadura por Distensão é utilizada principalmente para obtenção do teste de sensibilidade aos antibióticos. Para isso devemos transferir 0,1 ml da cultura para o meio sólido na placa e espalhar uniformemente com a própria ponta da pipeta, ou alça bacteriológica / swab / alça Drigalsky em todas as direções de forma não deixar qualquer porção do meio sem inóculo, garantindo o crescimento uniforme. 
Questão 2: FLUXOGRAMA
A identificação das bactérias Gram positivas e negativas são realizadas de formas diferentes, de acordo com a sua classificação de gram. Com base na identificação das bactérias Gram positivas realize uma tabela sobre a identificação, incluindo o nome dos meios utilizados, funcionalidade do teste e interpretação                                      
Critérios de avaliação: Domínio do conteúdo; uso do padrão linguístico; capacidade de síntese; domínio conceitual.
Sobre um disco de PYR adicionado uma gota de água destilada
Diluir a colônia sobre o disco e aguardar uns minutos, colocar uma gota do reagente PYR. Resultado da cor vermelha = Positivo
Adicionar uma gota de Peróxido de hidrogênio 3%
Depois diluir a colônia de bactérias na gota
COCOS GRAM POSITIVOS
Adicionar uma gota de Plasma de sangue de coelho
Depois diluir a colônia de bactérias na gota
NEGATIVA:
Enterococcus
s
TESTE DE CATALASE
POSITIVA:
Staphylococcus
s
Teste PYR: Positivo
Motilidade: Negativa
NEGATIVA:
Streptococcus 
s
Dissolver as colônias no caldo (contém CHO arabinose) e incubar à 35° por 24h. Resultado positivo para Cor turvo do meio e colocaração. 
Teste 
Coagulase
Crescimento em ágar sangue
Teste Arabinose:Negativa:
E. faecalis
Negativa:
E. faecium
Positiva: S. aureus
Negativa: S. epodermidis e S. saprophyticus
			Padrão Hemolítico Beta (β)
Hemólise completa:
S.pyogenes e S. agalactiase
Padrão Hemolítico Alfa (α)
Hemolíse incompleta:
S. pneumoniae
agalactiase
Dissolver as colônias no caldo (contém CHO arabinose) e incubar à 35° por 24h. Resultado positivo para Cor turvo do meio e colocaração. 
Questão 3: TABELA
A identificação das bactérias Gram positivas e negativas são realizadas de formas diferentes, de acordo com a sua classificação de gram. Com base na identificação das bactérias Gram negativas realize uma tabela sobre a identificação, incluindo o nome dos meios utilizados, funcionalidade do teste e interpretação dos resultados.
	  Meio de Provas Bioquímicas
	Principais Reações (Função)
	Interpretação dos Testes
	Meio TSI
	Lactose
	Meio se altera para amarelo decorrente da fermentação da lactose, no fundo do tubo ocorreu a fermentação da glisose e formação de gás
	Meio EPM / IAL / TSI
	Sulteto de HidrogênioPresença de pigmento preto reação da hidrolise do ferroso
	Meio EPM / IAL
	Uréia
	Adquire coloração azul/esverdeada
	Meio EPM
	Fenilalanina
	Reação verde-escura/acastanhada
	Meio MILI
	Motilidade
	Turvação do meio e sem mobilidade quando colocado em meio semissolido devido a ausencia de flagelos 
	Meio MILI / IAL
	Indol
	Após pingar o reativo de Kolvas, ocorre a formação de pigmento rosa.
	Meio MILI
	Lisina
	Meio com coloração púrpura
	Meio IAL / TSI
	Sacarose
	Meio se altera para amarelo
	Meio Citrato
	Citrato
	Coloração Azul de brotimol, teste positivo, onde a bactéria usou citrato como fonte de carbono para seu metabolismo liberando amonia. 
	Meio IAL / EPM / TSI
	Gás
	Bolhas e rachaduras no meio
Questão 4: TEXTO DISSERTATIVO
Os Testes de Sensibilidade aos Antimicrobianos (TSA), também conhecidos como antibiograma, têm a finalidade de determinar a interação de uma bactéria frente a um fármaco antimicrobiano. Discorra sobre o teste de disco difusão, incluindo como é realizado e a interpretação:
Tambem chamado de antibiograma, o Teste de Sensibilidade aos Antimicrobianos (TSA), é um exame que tem como finalidade indentificar o perfil de sensibilidade e resistência de bacteriana e de fungos aos antibióticos. Com o resultado do antibiograma o médico pode iniciar o tratamento para qual o antibiótico é mais indicado para tratar a infecção do paciente, assim evitando o uso de antibióticos desnecessários, além de evitar o surgimento de resistência. Geralmemte é realizado após a identificação de microrganismos em grande quantidade no sangue, urina, fezes e tecido podendo assim ajudar ao médico qual o tratamento mais indicado para cada microrganismos. Tento grande importância em aspectos qualitativos que indica sensibilidade do microrganismo e se o mesmo é intermediário ou resistente e também em aspectos quantitativos indicando a concentração Inibitória Minima (CIM), onde mostra quanto de concentração de fármaco é capaz de inibir o crescimento bacteriano. 
Podemos destacar dois testes que são empregados para a sensibilidade aos antimicrobianos:
O Agar Mueller Hinton (MH)  também conhecido como difusão em disco ou até mesmo teste de Kirby-Bauer. A finalidade do método consiste em testar se a bactéria em análise é sensível a determinados antibióticos.Descrito em 1966 por Kirby e Bauer, sendo uma das mais simples e confiável utilizada pelos laboratórios até hoje, para a determinação da sensibilidade a antibacterianos, sendo o meio padrão recomendado pela OMS tendo princípio básico a propagação do antimicrobiano na superfície do agar, a partir de um disco de papel. Esses discos são colocados em um meio de cultura que apresentam as bactérias onde se difundem de forma radial. Tendo ou não uma reação de atividade à uma formação de um halo de inibição ao redor do disco que é medido e avaliado identificando assim se a bactéria é sensível, intermediária ou resistente. 
Esta técnica consiste em preparar um inóculo bacteriano, escolhendo de 4 a 6 colônias iguais, onde as mesmas devem ser suspensas em uma solução salina estéril, servidno para obter uma turvação que corresponde a escala de 0,5 de McFarland, onde deve ser utilizada em um período de 15 minutos. Para inoculação deve-se usar um swab estéril que será umedecido no inóculo bacteriano acima, semeando a suspenção na superfície do ágar Mueller-Hinton por semeadura por distensão. Após a absorção completa do inóculo pelo ágar, iniciar a aplicação dos discos, com o auxílio de pinças ou dispensador de disco aplicando os discos nos cantos da placa e certificando-se que os mesmos já esteja aderidos, já que os mesmos não podem ser removidos. A quantidade de discos para cara placa deve ser respeitada para não haver sobreposição de halos. Em uma placa de 90 mm deve conter 5 discos e as placas de 150mm podem conter 12 discos. Ao final do processo verificar o crescimento bacteriano se está confluente e uniforme no meio realizando a leitura do diâmetro dos halos interpretando os resultados tendo como referência tabelas do ponto de corte que variam de acordo com as bactérias e os antimicrobianos testados.