Aula2Anlisedosanguemtodos_20220307152458

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ANÁLISE DO SANGUE
Ms Deisy da S. Fernandes Nascimento
Composição do Sangue
O sangue é um tecido líquido, composto por diferentes células que transitam pelo sistema circulatório, levando inúmeras moléculas necessárias para o metabolismo de todos os tecidos do corpo.
http://image.slidesharecdn.com/aula9sistemacardiovascular-150912053210-lva1-app6891/95/fisiologia-sistema-cardiovascular-5-638.jpg?cb=1458668207
Composição do Sangue
Amostra de sangue para hematologia:
Sangue total com EDTA  quelante de cálcio iônico
Preserva a morfologia das células por mais tempo
Tampa roxa
Sangue total com citrato  quelante de cálcio iônico
Tampa azul
Soro: coletado sem anticoagulante, fatores de coagulação são consumidos durante a formação do trombo
Plasma: coletado com anticoagulante, fatores de coagulação preservados, não forma trombo
Coleta de amostra de sangue para o hemograma
Garroteamento
Assepsia
Punção
Anticoagulantes
Homogenização
Conservação da amostra
Confecção do esfregaço e coloração
Esfregaço
Coloca-se uma gota de sangue sobre uma lâmina limpa e seca, e com uma extensora se faz o arraste do sangue, formando uma camada fina de sangue sobre a lâmina.
Confecção do esfregaço e coloração
Corantes de Romanowski ou panótipos (“que tudo vê”)
Eosina e azul de metileno
Corantes formulados segundo May Grunwald e Giemsa
Corantes com mistura de sais e ácidos
Coloração de Leishman e Wright
Corante ácido: cora substâncias básicas
Corante básico: cora substâncias ácidas
Análise da série vermelha:
Três análises são realizadas:
Contagem de eritrócitos
Dosagem de Hemoglobina (Hb)
Hematócrito (Ht)
Três índices hematimétricos são calculados:
Hb corpuscular média (HCM)
Volume corpuscular médio (VCM)
Concentração de Hb corpuscular média (CHCM)
Análise da série vermelha:
Preparar uma diluição 1:200 do sangue total em líquido de Hayen (4 mL da solução e 20 uL de sangue)
Fixar a lamínula sobre a câmara e preenchê-la com a diluição
Contar as hemácias dos quadrantes marcados, e converter a contagem para a unidade aceita (hemácias / mm3 de sangue) multiplicando por 10.000.
Contagem de eritrócitos (CE) em câmara de Neubauer:
Análise da série vermelha:
Dosagem de Hb:
Método de cianometahemoglobina
Preparar uma diluição 1:250 do sangue total em Reativo de Drabkin (5 mL da solução e 20 uL de sangue) e incubar por 10 minutos à temperatura ambiente
Determinar a densidade ótica (DO) em espectrofotômetro em 540 nm dos padrões, controles e amostra
Cálculo:
Fator = concentração de Hb do padrão / DO do padrão
Concentração de Hb da amostra = Fator X DO da amostra
Análise da série vermelha:
Hematócrito:
Preencher ¾ do volume de um capilar com sangue total, e vedar uma das extremidades
Centrifugar a 10.000 RPM por 5 minutos em microcentrífuga
Realizar a leitura em tabela específica
Análise da série vermelha:
Hb corpuscular média (HCM): conteúdo médio de Hb por eritrócito
HCM (pg) = Hb x 10 / CE
Concentração de Hb corpuscular média (CHCM): percentual de Hb em 100mL de eritrócitos
CHCM (%) = Hb / Ht x 100
Volume corpuscular médio (VCM): tamanho médio dos eritrócitos
VCM (fl)= Ht x 10 / CE
Análise da série vermelha:
Contagem de reticulócitos:
Incubar por 15 minutos a 37 C duas gotas de sangue com azul de cresil brilhante
Confeccionar um esfregaço e contar os reticulócitos presentes em 10 campos homogêneos, e estimar o número de eritrócitos em cada campo
Calcular o número de reticulócitos em percentual
Ex.: Foram contados 18 reticulócios em 10 campos com aproximadamente 250 hemácias cada
2.500 eritrócitos  100% 	X = 18 x 100 /25000
18 reticulócitos  X		X = 0,7%
Análise da série vermelha:
Contagem corrigida de reticulócitos (CCR):
Em pacientes anêmicos, a contagem de reticulócito deve ser corrigida através da seguinte fórmula:
CCR = % de ret. x Ht paciente		Mulher 40%
			 Ht normal		Homem 45%
Índice de produção de reticulócitos (IPR):
IPR = CCR / tempo de maturação em dias
Ht 45%  1 dia	Ht 35%  1,5 dia	
Ht 25%  2 dias 	Ht 15%  2,5 dias
Análise da série branca:
Preparar uma diluição 1:20 do sangue total em líquido hemolisante (0,4 mL da solução e 20 uL de sangue)
Fixar a lamínula sobre a câmara e preenchê-la com a diluição
Contar os leucócitos dos quadrantes marcados, e converter a contagem para a unidade aceita (leucócitos / mm3 de sangue) multiplicando por 2,5
Contagem de leucócitos em câmara de Neubauer:
Análise da série branca:
Conta-se 100 leucócitos, em registrando-se a quantidade de cada tipo. O resultado é expresso em percentual e em número absoluto.
Contagem diferencial de leucócitos:
O esfregaço é útil para avaliação microscópica de todas as células sanguíneas, bem como para a contagem diferencial dos leucócitos.
Análise da série vermelha:
Preparar uma diluição 1:20 do sangue total em oxalato de amônio 1% (0,4 mL da solução e 20 uL de sangue)
Fixar a lamínula sobre a câmara e preenchê-la com a diluição
Contar as plaquetas dos quadrantes marcados, e converter a contagem para a unidade aceita (plaquetas / mm3 de sangue) multiplicando por 1.000.
Contagem de plaquetas (CE) em câmara de Neubauer:
Velocidade de Hemossedimentação 
VHS
O aumento na concentração de proteínas do sangue eleva o VHS.
Método de Westergren
Pipetar 2 mL de sangue total coletado com citrato em uma pipeta graduada em milímetro. Manter a pipeta na vertical, em repouso, e após 60 minutos medir a sedimentação das hemácias.
http://www.horiba.com/typo3temp/pics/96511b15cb.jpg
Impedância
O número de interrupções representa o número de células, enquanto a intensidade da interrupção está relacionado com o volume celular, e este, com a identidade das células.
Dilui-se o sangue em uma suspensão eletrolítica, que passa por um orifício condutor de uma corrente elétrica.
As células, sendo más condutoras de eletricidade, interrompem a corrente elétrica ao passarem pelo orifício.
Impedância - Histograma
A altura do gráfico representa a quantidade de células, e a largura representa o volume celular
http://www.scielo.br/pdf/rbhh/v31n3/aop4509.pdf
Impedância - Histograma
http://66.media.tumblr.com/90758117943a89f8efc0fbdf89ab1085/tumblr_inline_ni9inupDgl1t7oa9a.png
Citometria de Fluxo
Baseada na difração, refração e reflexão da luz emitida.
A luz atravessa um orifício de um obstáculo
A luz muda de veloci-dade ao atravessar um obstáculo
A luz muda de direção ao encontrar um obstáculo
Citomegria - Scattergrama
Citomegria - Scattergrama
Referências Bibliográficas
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CRUVINEL, Wilson de Melo et al . Sistema imunitário: Parte I. Fundamentos da imunidade inata com ênfase nos mecanismos moleculares e celulares da resposta inflamatória. Rev. Bras. Reumatol.,  São Paulo ,  v. 50, n. 4, Aug.  2010.
GOLDSBY, Richard A.; KINDT, Thomas J.; OSBORNE, Barbara A. Kuby Imunologia. 4.ed.; Revinter: Rio de Janeiro, 2002.
HOFFBRAND, A. V.; PETTIT, J. E.; MOSS, P. A. H. Fundamentos em hematologia. 4. ed. Porto Alegre: Artmed, 2004.
LORENZI, T. Atlas de hematologia: clínica hematológica ilustrada. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2006.
NAOUM, P. C.; NAOUM, F. A. Hematologia Laboratorial – Eritrócitos. São José do Rio Preto: Academia de Ciências e Tecnologia, 2005.
NAOUM, P. C.; NAOUM, F. A. Hematologia Laboratorial – Leucócitos. São José do Rio Preto: Academia de Ciências e Tecnologia, 2006.
SANTOS, V.M. dos; CUNHA, S.F. de C. da; CUNHA, D.F. da. Velocidade de sedimentação das hemácias: utilidade e limitações. Rev. Assoc. Med. Bras.,  São Paulo ,  v. 46, n. 3, p. 232-236,  Sept.  2000 .