PRÉ E PÓS TESTE EXTRAÇÃO DNA

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PRÉ-TESTE

1) Durante o processo de extração de DNA, é importante considerar a possibilidade de interferências causadas pelas desoxirribonucleases (DNAses). No que se refere às funções desempenhadas pelas enzimas DNAses, assinale a opção correta.
a) São responsáveis pela formação de pontes de hidrogênio entre os fragmentos de DNA em processos de amplificação;
PRÉ-TESTE

1) Durante o processo de extração de DNA, é importante considerar a possibilidade de interferências causadas pelas desoxirribonucleases (DNAses). No que se refere às funções desempenhadas pelas enzimas DNAses, assinale a opção correta.
a) São responsáveis pela formação de pontes de hidrogênio entre os fragmentos de DNA em processos de amplificação;
b) São responsáveis pela quebra enzimática da ligação fosfodiéster do DNA;
RESPOSTA CORRETA
As enzimas desoxirribonucleases (DNAses) catalisam a clivagem hidrolítica de ligações de fosfodiéster entre os nucleotídeos que compõem a estrutura do DNA. As DNAses são um tipo de nucleases.
PRÉ-TESTE

1) Durante o processo de extração de DNA, é importante considerar a possibilidade de interferências causadas pelas desoxirribonucleases (DNAses). No que se refere às funções desempenhadas pelas enzimas DNAses, assinale a opção correta.
a) São responsáveis pela formação de pontes de hidrogênio entre os fragmentos de DNA em processos de amplificação;
b) São responsáveis pela quebra enzimática da ligação fosfodiéster do DNA;
RESPOSTA CORRETA
As enzimas desoxirribonucleases (DNAses) catalisam a clivagem hidrolítica de ligações de fosfodiéster entre os nucleotídeos que compõem a estrutura do DNA. As DNAses são um tipo de nucleases.
PRÉ-TESTE

1) Durante o processo de extração de DNA, é importante considerar a possibilidade de interferências causadas pelas desoxirribonucleases (DNAses). No que se refere às funções desempenhadas pelas enzimas DNAses, assinale a opção correta.
a) São responsáveis pela formação de pontes de hidrogênio entre os fragmentos de DNA em processos de amplificação;
b) São responsáveis pela quebra enzimática da ligação fosfodiéster do DNA;
RESPOSTA CORRETA
As enzimas desoxirribonucleases (DNAses) catalisam a clivagem hidrolítica de ligações de fosfodiéster entre os nucleotídeos que compõem a estrutura do DNA. As DNAses são um tipo de nucleases.
PRÉ-TESTE

1) Durante o processo de extração de DNA, é importante considerar a possibilidade de interferências causadas pelas desoxirribonucleases (DNAses). No que se refere às funções desempenhadas pelas enzimas DNAses, assinale a opção correta.
a) São responsáveis pela formação de pontes de hidrogênio entre os fragmentos de DNA em processos de amplificação;
b) São responsáveis pela quebra enzimática da ligação fosfodiéster do DNA;
RESPOSTA CORRETA
As enzimas desoxirribonucleases (DNAses) catalisam a clivagem hidrolítica de ligações de fosfodiéster entre os nucleotídeos que compõem a estrutura do DNA. As DNAses são um tipo de nucleases.
PRÉ-TESTE

1) Durante o processo de extração de DNA, é importante considerar a possibilidade de interferências causadas pelas desoxirribonucleases (DNAses). No que se refere às funções desempenhadas pelas enzimas DNAses, assinale a opção correta.
a) São responsáveis pela formação de pontes de hidrogênio entre os fragmentos de DNA em processos de amplificação;
As desoxirribonucleases (DNases) são uma classe de enzimas responsáveis por quebrar as ligações entre os ácidos nucleicos que compõem o DNA, levando à degradação das moléculas de DNA.
b) São responsáveis pela quebra enzimática da ligação fosfodiéster do DNA;
RESPOSTA CORRETA
As enzimas desoxirribonucleases (DNAses) catalisam a clivagem hidrolítica de ligações de fosfodiéster entre os nucleotídeos que compõem a estrutura do DNA. As DNAses são um tipo de nucleases.
c) Promovem a desnaturação das pontes de hidrogênio em reações de PCR.
As desoxirribonucleases (DNases) são enzimas responsáveis por quebrarem ligações de fosfodiéster do DNA. Essas enzimas não são utilizadas no desenvolvimento de reações de PCR.
2) No que se refere a possíveis interferentes na extração de DNA, assinale a afirmativa correta.
a) Diversos tipos de amostras podem ser utilizados para a extração. Entretanto, a amostra também irá determinar a qualidade do material extraído;
RESPOSTA CORRETA
Amostras de DNA podem ser obtidas em saliva, manchas de sangue, bulbos capilares, tecidos incluídos em parafina, ossos, gotas de sêmen, células epiteliais, urina, entre outros fluidos corporais. A quantidade de DNA purificado depende do tipo de amostra, do volume utilizado, das condições de transporte, do armazenamento e da idade das amostras.
b) Amostras extraídas de DNA não têm estabilidade química a longo prazo, devem ser utilizadas imediatamente após a extração e não devem ser armazenadas;
Após a extração completa, o DNA obtido é estável e pode ser armazenado por até um dia no refrigerador (4°C) ou congelado (-15°C a -25°C) por 3 a 4 meses.
c) Existem diversos protocolos metodológicos para a extração de amostras de DNA, porém não existe diferença entre eles.
Existem diversos métodos para a extração de DNA. A escolha do método ideal leva em consideração a otimização do rendimento e a degradação do DNA durante a extração e a sua eficiência em termos de custo, tempo e simplicidade da metodologia.
3) Sobre o uso de análises de DNA na investigação forense, é correto afirmar que:
a) técnicas de identificação baseadas na análise direta de amostras de DNA são consideradas a maior revolução científica na esfera forense por produzirem resultados de alta precisão;
RESPOSTA CORRETA
Desde a década de 1980 até os dias atuais, as técnicas de identificação por DNA têm revolucionado a esfera forense por meio da produção de provas confiáveis aliando a ciência ao campo investigativo e contribuindo para a solução de casos complexos.
c) as análises de material genético (DNA) em investigação forense não têm precisão devido à grande chance de erros de análise laboratorial;
A genética forense é reconhecida por sua confiabilidade, com resultados de alta precisão.
d) uma das aplicações mais populares da análise de DNA em investigação forense é o teste de paternidade, porém esse método tem baixa taxa de precisão.
A análise de paternidade é comumente utilizada na genética forense e tem altas taxas de precisão (99,99%).
4) Sobre a quantificação de DNA, assinale a alternativa correta.
a) Não é necessário quantificar amostras de DNA extraído, uma vez que esse dado não é relevante para as próximas etapas da análise gênica;
A quantificação do DNA extraído é essencial tanto para conferir a eficiência da extração quanto para desenvolver etapas subsequentes, como análise de PCR.
b) As concentrações de DNA não se alteram em diferentes tipos de amostras biológicas, já que todas as células contêm material genético em seu interior;
A quantidade de DNA purificado pode variar dependendo do tipo de amostra, do número de células presentes, da idade do paciente e de seu estado de saúde, além de condições de transporte e armazenamento.
c) A Lei de Lambert-Beer pode ser utilizada para calcular a quantidade de amostra de DNA obtida.
RESPOSTA CORRETA
A Lei de Lambert-Beer estabelece uma relação entre a absorbância de uma solução e a sua concentração quando atravessada por radiação luminosa monocromática.
5) Boas práticas laboratoriais determinam que se deve tomar o máximo de precaução e cuidados a fim de evitar a contaminações. Dentro desse contexto, assinale a opção correta.
a) A assepsia da bancada e de equipamentos torna desnecessário o uso de EPIs, já que não pode haver contaminação em um ambiente asséptico;
Assim como a assepsia do ambiente de trabalho, o uso de EPIs é imprescindível para evitar contaminações dentro do ambiente de laboratório e fazer a proteção pessoal contra agentes nocivos, tóxicos ou corrosivos.
b) A contaminação por DNA exógeno representa uma forma de contaminação que não pode ser purificada ou corrigida matematicamente, inutilizando a amostra;
RESPOSTA CORRETA
A contaminação por DNAexógeno (de microrganismos presentes no ambiente ou do próprio avaliador) não pode ser deduzida por meio das razões de pureza e é dificilmente removida por purificação, inutilizando a amostra, mas pode ser verificada em géis de eletroforese.
c) Dentro do ambiente de laboratório, a única preocupação em relação ao controle de contaminação deve ser voltada a evitar a contaminação das amostras com DNA de microrganismos do ambiente
Além dos microrganismos, grande atenção deve ser voltada à contaminação das amostras por DNA proveniente do avaliador (células epiteliais, saliva, fios de cabelo ou pelos), ressaltando a importância das normas de biossegurança.
PÓS-TESTE

1) Após realizar o processo de extração de DNA, um pesquisador mediu a absorbância (A) da amostra em comprimentos de onda a 230nm (A230), 260nm (A260) e 280nm (A280), em espectrofotômetro, para avaliar a pureza das amostras obtidas. Assinale a afirmativa correta.
a) Se o DNA extraído apresenta razão A260/A280 entre 1,7 e 2,0, ele apresenta pureza adequada e pode ser empregado em técnicas como PCR;
RESPOSTA CORRETA
A forma mais prática e eficiente de avaliar a pureza de amostras de DNA é por meio da razão A260/A280. Valores entre 1,7 e 2,0 indicam pureza adequada das extrações de DNA, enquanto valores fora dessa faixa podem significar a presença de contaminante.
b) A concentração de DNA extraído das amostras pode ser quantificada por meio da utilização da razão entre 260nm:230nm (A230/A26);
A razão entre 260nm:230nm (A260/A230), apesar de menos utilizada, serve como ferramenta adicional de avaliação de pureza das amostras. Os valores de referência estão geralmente entre 1,8 e 2,2
c) Em geral, a contaminação com proteínas gera leitura A208 alta. Assim, pode-se interpretar que a amostra é composta exclusivamente de proteínas.
Valores altos de leitura A208 podem indicar a presença não só de proteínas, mas de diversos contaminantes, como proteínas, compostos orgânicos, compostos fenólicos, em meio ao DNA extraído também presente na amostra.
2) Acerca dos espectrofotômetros, assinale a opção correta.
a) O aparelho de espectrofotometria cria uma corrente elétrica que se desloca a carga elétrica, quantificando um número muito elevado de elétrons livres para gerar o resultado;
Os espectrofotômetros utilizam análises ópticas, com base na medida quantitativa da absorção da luz pelas soluções, em que a concentração na solução da substância absorvente é proporcional à quantidade de luz absorvida.
b)A espectrofotometria é o único método de avaliação da quantidade de DNA extraído de uma amostra;
A espectrofotometria é o método mais utilizado, porém não é o único método para quantificação de amostras de DNA. A espectrofluorimetria é um método de espectroscopia eletromagnética que analisa a luz emitida pelas moléculas fluorogênicas. É um método alternativo para avaliar a concentração de DNA e RNA por meio do uso de corantes fluorescentes que se ligam a ácidos nucleicos.
c) A absorbância da linha base (branco) deve ser subtraída da absorbância medida da amostra de DNA para que se obtenha a absorbância verdadeira da amostra.
RESPOSTA CORRETA
Para eliminar possíveis interferências da solução em que a amostra foi diluída, deve-se corrigir a absorbância leitura das amostras de DNA pela leitura denominada “branco”. O branco deve conter a solução diluente livre da amostra a ser estuda
3) Alguns procedimentos básicos são realizados para isolar e purificar o DNA. Assinale a informação correta.
a) Etapa de lise: o primeiro passo para extração consiste em realizar a lise (quebra) do material genético (DNA ou RNA);
A etapa de lise consiste em quebra da parede celular para expor o DNA que será isolado.
b) Etapa de lavagem: as etapas de lavagem removem resíduos contaminantes, utilizando a incubação com soluções, seguida por centrifugação;
RESPOSTA CORRETA
As etapas de lavagem emulsionam a gordura e as proteínas que formam a membrana da célula, restando apenas o material genético isolado. Isso normalmente é feito utilizando soluções detergentes associados à centrifugação.
c) Etapa de eluição: por fim, ocorre a diluição dos ácidos nucleicos (DNA/ RNA). Essa amostra de DNA purificado está pronta para ser utilizada em análises de PCR.
Após a etapa de eluição das amostras, é necessário realizar as análises de quantificação e pureza do DNA isolado antes de aplicar a amostra em técnicas de PCR.
4) No que diz respeito ao uso de Chelex 100 para extração de DNA, assinale a alternativa correta.
a) Chelex 100 é um solvente orgânico utilizado para purificar amostras de DNA;
Apesar de solventes orgânicos poderem ser aplicados para purificar amostras de DNA, o Chelex 100 não é um solvente, e sim uma resina quelante.
b) A solução de Chelex 100 protege a amostra da ação das DNAses que podem permanecer ativas após o aquecimento das amostras;
RESPOSTA CORRETA
A resina Chelex 100 que faz ligação a cátions (incluindo Mg2+) que exercem papel de cofator essencial para atividade de DNAses.
c) A extração de DNA com resina Chelex é um método avançado e de difícil execução comparado a outros métodos existentes.
O uso de Chelex tem-se mostrado um método seguro, simples, mais eficaz e mais barato do que outros métodos ou kits comerciais.
5) Sobre o processo de extração de DNA, assinale a alternativa correta.
a) O aquecimento das amostras durante a extração tem como objetivo auxiliar na quebra das células e preservar a amostra de degradação;
RESPOSTA CORRETA
O aquecimento de amostras promove a quebra de paredes celulares para a liberação do DNA, catalisa a reação entre a resina Chelex-100 e inativa enzimas DNAses.
b) A centrifugação durante a extração de DNA tem como principal objetivo resfriar as amostras rapidamente, evitando degradação;
A centrifugação é utilizada para separar fases (líquido/sólido) das amostras de acordo com a massa, a solubilidade, a forma e a densidade das moléculas
c) Para extração de DNA, devem-se utilizar apenas materiais de vidro, devido à sua fácil limpeza, desinfecção e esterilização, evitando contaminações
Deve-se utilizar material plástico esterilizado e novo para evitar riscos de contaminação das amostras. Materiais de vidro não devem ser utilizados, pois o DNA pode ser adsorvido.