Aula 06 Testes bioquímicos

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Testes Bioquímicos 
para identificação de 
bactérias
Identificação de bactérias
Coloração simples, diferenciais ou estruturais, 
mesmo combinadas com diferentes cultivos, não 
são, geralmente, suficientes para identificação de 
bactérias 
Tais métodos não 
revelam a fisiologia ou a 
filogenia das células
Testes Bioquímicos
Classificação das bactérias segundo tipo de metabolismo e atividade enzimática
Combinado com outras 
técnicas, tais como os
testes bioquímicos, que 
permitem a identificação de 
bactérias, de acordo com suas 
propriedades metabólicas que
são únicas para cada espécie.
Testes Bioquímicos
Meios de Cultura
Seletivo
Diferencial
Enriquecimento
Favorece o crescimento de alguns 
organismos, mas suprime o crescimento 
de outros. 
Possui um constituinte que causa uma 
mudança observável no meio quando 
ocorre uma reação bioquímica específica.
Contém nutrientes especiais que 
favorecem o crescimento de um 
organismo específico.
 Classificação das bactérias em relação às suas características bioquímicas:
Diferentes vias metabólicas para 
obtenção de energia
Ex: Fermentação e Respiração
Enzimas específicas utilizadas 
no processo de metabolização 
de diferentes substratos
Ex: Enzimas Triptofanase e Catalase
•Formação de produtos
específicos nas reações
catabólicas
Ex: Ácidos estáveis e Indol
Testes Bioquímicos
Resultados de Testes Bioquímicos
Resultados 
expressos como 
positivo (+) ou 
negativo (-) 
Identificação da 
bactérias de 
acordo com suas 
características já 
pré-estabelecidas
Testes bioquímicos:
1. Fermentação de carboidratos 
2. Produção de indol
3. Hidrólise do amido
4. Teste de oxidação e fermentação
5. Teste da catalase
• A glicólise é um processo exoenergético, comum tanto 
na fermentação quanto na respiração celular aeróbica. 
Esse processo encerra-se com a formação de duas 
moléculas de ácido pirúvico que podem seguir 
caminhos metabólicos distintos.
1. Fermentação de carboidratos
1. Fermentação de carboidratos
Forma de catabolismo anaeróbio, no qual um composto orgânico é um 
doador de elétrons e um aceptor de elétrons
Utilizado para identificação de 
bactérias entéricas
• Bacilos Gram negativos;
• Aeróbios facultativos;
• Exigência nutricional simples (fermentadores de açúcares);
• Podem ser patogênicos ao homem, animais e plantas;
• Importância industrial.
1. Fermentação de carboidratos
Aplicação do teste é válido pois existem características que 
permitem distinguir vários gêneros de bactérias entéricas
Tipo e proporção de produtos de fermentação
Fermentação 
Ácido-Mista
Fermentação 
Butanodiol
3 ácidos são formados em 
quantidades significativas: 
acético, láctico e succínico
Quantidades menores de 
ácidos são formadas, sendo 
butanodiol, etanol, os 
principais produtos.
 Bactérias Entéricas 
Escherichia
Salmonella
Proteus
Enterobacter
Klebsiella
Serratia
Fermentação 
Ácida Mista
Fermentação 
do Butanodiol
1. Fermentação de carboidratos
a. FERMENTAÃO ÁCIDO-MISTA
 Formação de diferentes tipos de ácidos 
e etanol;
 CO2 e H2 produzidos na mesma 
proporção;
1. Fermentação de carboidratos
b. FERMENTAÇÃO DO BUTANODIOL
Reação geral
• Procedimentos
- Meio de cultura: caldo vermelho de fenol (incluí 
peptona e indicador de pH e a presença de um único 
carboidrato fermentável)
1. Fermentação de carboidratos
1. Fermentação de carboidratos
A fermentação de 
carboidratos é 
evidenciada pela 
produção de 
ácido e/ou gás no 
meio de cultura 
em pH neutro. 
Usa-se meio 
básico contendo 
apenas uma 
fonte de 
carbono e um 
indicador de pH
Detecção
Ocorre conversão em produtos neutros 
como 2,3 butanodiol, não provocando 
redução tão drástica de pH.
Exemplo: Enterobacter
Fermentam com produção de ácidos 
(fórmico, acético, láctico e succínico) e 
gás, até que o pH do meio chegue a 
cerca de 5,0. 
Exemplo: E. coli
Vermelho 
de Metila
1. Fermentação de carboidratos
IMPORTANTE
Razões
Ácido : Neutro
CO2 : H2
2. Produção de Indol
Identificar bactérias entéricas que são capazes de degradar o aminoácido 
triptofano até indol através da ação enzimática da triptofanase
Hidrolisar o triptofano
com a produção de 
indol não é uma 
característica de todos 
os microrganismo, por 
isso pode ser utilizado 
como marcador 
bioquímico
Ácido pirúvico
Amônia
2. Produção de Indol
2. Produção de Indol
Triptona 5 g
NaCl 2,5 g
Água destilada 1 L
Caldo Indol
2x
Incubar à 
30°C por 
48 h
+ -
Adição de 
0,5 ml do 
reagente 
de Kovac
Leitura
3. Hidrólise do amido
Forma linear da 
molécula do amido
Forma ramificada da 
molécula do amido
O amido juntamente com 
a celulose são os dois 
polissacarídeos naturais 
mais abundantes
O que diferencia estes 
polissacarídeos são as 
ligações entre as 
moléculas de glucose
As enzimas amilase e 
oligo-1,6-glicosidase 
catalisam a hidrólise 
do amido, formando 
maltose. A maltose 
pode então entrar na 
célula, onde é 
hidrolisada à glicose
3. Hidrólise do amido
Diferencia bactérias que hidrolisam o amido
Leitura
Iodo presente na solução é 
usado para detectar a 
presença ou ausência de 
amido na periferia ao redor 
do crescimento bacteriano
Iodo reage com o amido e 
produz uma coloração azul-
violácea intensa
Zona clara ao redor do 
crescimento representa 
resultado positivo para o 
teste
4. Oxidação/Fermentação
CARBOIDRATOS Produtos ácidos
Fermentação
Aerobiamente
O teste de oxidação/fermentação é utilizado para diferenciar 
microrganismos que oxidam ou fermentam açúcares específicos e 
determina se a bactéria é aeróbia ou anaeróbia facultativa
4. Oxidação/Fermentação
Tubos selados com óleo mineral 
(ambiente anaeróbio)
Microrganismos não são
capazes de degradar o açúcar
(sem alteração do pH)
Microrganismos são capazes de 
degradar o açúcar
(alteração no pH)
Azul de bromotimol
4. Oxidação/Fermentação
Microrg. 
capazes de 
promover 
apenas 
oxidação 
Microrg. 
capazes de 
oxidar e 
fermentar
Microrg. 
capazes de 
promover 
apenas 
fermentação
Azul de bromotimol
4. Oxidação/Fermentação
Aeróbio
Rodilhão de 
algodão
Anaeróbio
2 ml de óleo 
mineral
Incubar à 30°C 
por 48 h
+ -
Leitura
NaCl 5,0g
Peptona 2,5g
Glicose 10g
Ágar 5g
Azul de Bromotimol 40ml (solução 1:500)
Água destilada 1000mL
Meio com ágar e azul de 
bromotimol
2 X
Corrigir o pH para 7,1
4. Oxidação/Fermentação
5. Catalase
Permite identificar microrganismos produtores da enzima 
catalase que protege a célula de formas tóxicas do oxigênio. 
A toxicidade do oxigênio para anaeróbios estritos 
deve-se a certas moléculas produzidas durante as 
reações que envolvem o oxigênio. 
5. Catalase
Reações tóxicas do oxigênio para anaeróbios estritos 
O2 + e- O2
-
2O2
- + 2H+ O2 + H2O2
O2
- + H2O2 O2 + OH- + OH-
Superóxido
Peróxido de 
hidrogênio
Hidroxilas
Adição de 1 elétron a molécula de oxigênio:
Superóxidos dão origem:
Altamente reativos 
e podem destruir 
componentes vitais 
da célula, como o 
DNA
5. Catalase
Reações de proteção dos aeróbios e anaeróbios 
facultativos: 
Superóxido dismutase
Catalase
Peroxidase
O2
- H2O2
H2O2
H2O2
O2 e H2O
H2O
Produção de enzimas que eliminam os superóxidos e peróxidos de hidrogênio:
Enzimas
Superóxido Peróxido de hidrogênio
5. Catalase
Incubar à 
30°C
18-24 h
Água oxigenada 
(3%)
Ágar nutriente
Água oxigenada reage com a 
catalase liberando bolhas de 
oxigênio (Catalase +)
• https://youtu.be/SnWkAuj1Gkg
• https://youtu.be/E1gUU-_AMnc
https://youtu.be/SnWkAuj1Gkg
https://youtu.be/E1gUU-_AMnc
https://www.youtube.com/watch?v=KfaINjI24sU