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FUNGOS: PATOLOGIAS FÚNGICAS DE INTERESSE CLINICO MICOLOGIA Profª Flaviane Brito Leveduras Fungo Filamentoso Leveduras ▪ Fungos apresentam um núcleo, e podem ser patogênicos a humanos. ▪ Sua reprodução se dá por brotamento / germinação ou divisão binária ▪ São células unicelulares que podem se apresentar com morfologia ovalada, arredondada ou alongada ▪ Podem se apresentar como: ➢ Blastoconídio. ➢ Artroconídeo ➢ Encapsulados Análise de Leveduras ▪ Macromorfologia: A leveduras formam colônias brilhantes, cremosas e podem variar o grau de coloração de textura. Muitas vezes são similares a colônias bacterianas. Morfogênese de leveduras Blastoconídeos Pseudo-hifa Morfologia microscópica de algumas leveduras: Brotamento simples: Candida, Saccharomyces Ovóide: Sporothrix schenkii Multibrotamento: Paracoccidioides brasiliensis Encapsulada: Cryptococcus spp Fungo Filamentoso ▪ Hifa: filamentos dos fungos. ▪ Micélio: conjunto de hifas. ▪ Bolor: fungo filamentoso. ▪ Os fungos de interesse médico, agentes de micoses, possuem um aparelho de vida vegetativa – MICÉLIO. ▪ E um aparelho de frutificação- órgãos se diferenciam para a reprodução. ▪ As hifas se diferenciam em forma e tamanho, o que podem ajudar na identificação do fungo. MICÉLIO HIFA ➢ Micélio aéreo: superficial. Tem função reprodutiva. Contém os corpos de frutificação ou propágulos. ➢ Micélio vegetativo: interior do substrato. Função de sustentação e absorção dos nutrientes. Classificação das hifas ▪ Conidiósporos ➢ Conídeos ou conidiósporos: São esporos livres e externos (não estão fechados dentro de um invólucro). ➢ Pode ser formado por uma estrutura especial no topo de uma hifa fértil ou pela segmentação de uma hifa vegetativa pré existente. ▪ Os conídeos podem: ➢ Ser hialinos ou pigmentados, geralmente escuros (feoconídeos) ➢ Apresentar formas diferentes: Esféricos, fusiforme, cilíndricos, periformes e etc... ➢ Ter parede lisa ou rugosa ➢ Ser formados de uma só célula ou com septos em um ou dois planos ➢ Apresentam-se isolados ou agrupados As hifas que formam os conídeos são denominadas conidióforos Conidiósporo Conidiósporo Diagnóstico Convencional A rotina em um laboratório de micologia ainda é simples e de baixo custo, mas necessita de profissional habilitado para o diagnóstico adequado do fungo e com capacidade para utilizar técnicas laboratoriais de maneira apropriada. O bom diagnóstico micológico inicia com a coleta de material de forma adequada e segue com várias alternativas, conforme a necessidade do diagnóstico do agente envolvido no processo infeccioso, como: • Exame direto. • Cultura. • Cultura em lâmina. • Testes bioquímicos e biológicos. • Sorologia. • Hemocultura. • Exame anatomopatológico. EXAME DIRETO É o primeiro contato com o material clínico de forma microscópica. Indica, na maioria das vezes, se o material examinado contém ou não estruturas fúngicas. Em muitos casos, o diagnóstico já pode ser obtido pelo exame direto, como nos casos de Malassezia sp., em escamas, Cryptococcus sp., no liquor, e Paracoccidioi-des brasiliensis, no escarro. Procedimentos : KOH 10-40%, lactofenol azul, tinta da China e calcofluor White (fluorescente) Os métodos mais utilizados são preparações a fresco com KOH 10-40% ou KOH 20% acrescido de tinta Parker na proporção 4:1. agente fúngico, microscopicamente. O exame direto corresponde a preparados imediatos utilizados no diagnóstico clínico Hidróxido de Potássio (KOH) Técnica é usada para pesquisa de fungos, proveniente de material biológico como muco, restos celulares, pelos e unhas. Consiste em colocar uma pequena amostra do material biológico a ser pesquisado no centro da lâmina; suspender o material com uma ou duas gotas de KOH, cobrir com uma lamínula e aguardar 30 minutos ou aquecer ligeiramente a lâmina para acelerar o clareamento Cryptococcus neoformans Tinta da China (nanquim) Técnica empregada para pesquisa de fungos em líquido cefalorraquidiano e outros materiais permitindo destacar a cápsula deste fungo contra um fundo negro. A técnica consiste em pegar o líquido cefalorraquidiano sedimentado ou uma amostra do meio de cultura líquido e ressuspender em uma gota de tinta da china fazendo um filme bem delgado entre lâmina e lamínula Microscopia em coloração de azul de Lactofenol, utilizando aumento de 40x. Amostras de isolado fúngico oriundo de canino (esquerda) e de humano (direita). Evidenciam-se a presença de numerosas hifas septadas e hialinas com presença de macroconídios fusiformes contendo de oito a doze septos, característicos de M. canis Azul de Lactofenol Calcofluor White (fluorescente) Solução fluorescente que necessita de microscópio de fluorescência com excitação ultravioleta, violeta ou azul brilhante usando objetiva 10 ou 25 vezes. Técnica de Microcultivo https://www.youtube.com/watch?v=o35Zm2aM7NE Micoses Superficiais Acometem as camadas superficiais da pele e dos pelos Micoses Cutâneas ou Dermatofitoses Acometem a epiderme mais profunda e invadem pelos e unhas Micoses Subcutâneas: Acometem a derme, tecido subcutâneo, músculos e fascias (camadas de tecido conjuntivo, que reveste o músculos e vísceras) Micoses Sistêmicas: Acometem órgãos e sistemas internos, principalmente pulmão Micoses Oportunistas: Acometem indivíduos debilitados (drogas antibacterianas, imunossupressoras, AIDS, irradiação, corticóides); agentes com baixo potencial patogênico favorecidos por alterações na flora normal Diferentes Camadas da pele MICOSES Pitiríase versicolor Malassezia furfur Três generos: Microsporum, Trichophyton e Epidermophyton. Malassezia furfur Micoses Superficiais Colonizam tecidos mortos (não induzem resposta celular), mas podem apresentar Hipersensibilidade tipo imediato com elevadas concentrações de IgE Levedura - Brotamento Habitat Faz parte da biota normal da pele humana em áreas sebáceas – couro cabeludo, cabeça, pescoço, tórax Hospedeiro Jovens na puberdade (glândulas sebáceas x hormônios), Pacientes em uso de corticóides, indivíduos com sudorese excessiva, oleosidade e alta temperatura Transmissão: Praia ; Piscina ; Roupas sintéticas Causa ou Conseqüência: Seborréia, Foliculite. Tratamento: Antifungicos Tópicos Pitiríase versicolor O hidróxido de potássio (KOH) é um reativo que clarifica e digere o material clínico; no entanto, a presença de elementos fúngicos requer tempo e experiência,1 pois não há contraste entre restos celulares e elementos fúngicos A técnica consiste em colocar uma pequena amostra do material biológico a ser pesquisado no centro da lâmina; suspender o material com uma ou duas gotas de KOH, cobrir com uma lamínula e aguardar 30 minutos ou aquecer ligeiramente a lâmina para acelerar o clareamento. https://www.youtube.com/watch?v=KEcpSpaU5Zs Tempo: 4:45’ https://www.youtube.com/watch?v=KEcpSpaU5Zs Fungo filamentoso Habitat: Solo, gravetos e vegetação rica em matéria orgânica com alta umidade Transmissão: Contato com solo contaminado Hospedeiro: 3 a 5 vezes mais freqüente em mulheres, 20 a 30 anos Palma da mão ou planta dos pés, cuja lesão tem coloração negra ou castanha. Associação com hiperhidrose Tratamento: Antifúngicos tópicos Tinea Nigra - Phaeonnellomyces werneckii A reprodução assexuada no Reino Fungi acontece através de esporos, processo chamado de esporulação e ocorre quando o fungo libera os esporos (quando estão em condições favoráveis) e essas germinam e formam um novo micélio. Micose que acomete a parte livre dos pêlos, formando concreções de colorações brancas ou pretas. São assintomáticas. Fungo filamentoso Habitat: Florestas úmidas e águas paradas (margem dos rios) Tratamento: Corte dos pelos parasitados / Medicações Tópicas (ex: formol) Hospedeiro Ambos os sexos, mais freqüente em indígenas ) Piedras preta - Piedraia hortae (pelos do cabelo ) Levedura Habitat: Solo, água, vegetais,biota normal de orofaringe e pele animais . Hospedeiro Qualquer idade, sexo e raça Tratamento: Corte dos pêlos parasitados Medicações Tópicas (ex: formol) Piedra branca: T richosporon beigelli (pêlos axilares e pubianos, raro de cabelo) Agentes: Tricophyton sp. Candida albicans Candida albicans TINHA DA UNHA (Tinea ungueal) Micoses Cutâneas - agentes transmissíveis: Dermatófitos Acometem a epiderme mais profunda e invadem pelos e unhas Queratina como Nutriente!! Classificação Por região das lesões: Tinea pedis – Frieira / Pé de Atleta Tinea corporis - Corpo Tinea cruris - Genitália - Virilha Tinea capitis - Couro Cabeludo e Barba Tinea ungueum - Unhas Micoses Cutâneas ou Dermatofitoses (Tineas) Dermatófitos, que são fungos que têm afinidade pela queratina madura da pele e anexos (unhas e cabelos). Trichophyton, Microsporum e Epidermophyton Habitat: Geofílicos (solo), Zoofílicos (animais) e Antropofílicos ( homem) Hospedeiro: Indivíduos expostos a alta carga de fungos e com abrasão da pele (pele úmida e quente – ambiente fechado) Filamentosos Agente: Candida albicans Candida - fungo oportunista que se aproveita da debilidade orgânica para causar patologia. Pode ser encontrada nas mucosas respiratórias, digestivas e genital. Ela torna-se patogênica com uso abusivo de antibióticos, alterações hormonais, stress, uso de corticóides, quimioterapias com antineoplásicos, AIDS e outras imunodeficiências. Na pele: Ataca principalmente as dobras do corpo, região crural, axilar, inframamária, fissuras labiais, etc. São lesões vesiculosas e úmidas com intenso prurido. Nas mucosas: Na vaginal, formando vulvovaginites (pode atacar o homem) com odor fétido, formação de placas brancas, presença de corrimento e intenso prurido. Na mucosa oral, atinge crianças, formando os "sapinhos", com intensa ardência e dificultando a alimentação. Na unha: Base da unha com reação inflamatória. Visceral ou sistêmica: Pulmonar, renal, no caso de cirurgias (cardíacas e esofagianas). CANDIDÍASES Lesão: Localiza-se no bordo livre da unha, com acúmulo de material córneo (camada mais externa da epiderme), espessa e descolada, com sulcos longitudinais ou transversais, sem brilho, que arrebenta facilmente. Na lesão por Candida albicans aparece reação inflamatória perioníquia (ao redor da base da unha), com dor. TINHA DA UNHA (Tinea ungueal) Agentes: Epidermophyton floccosum Tricophyton sp. Candida albicans Lesão: eritemato-descamatória, de bordos ativos, localização inguinal, pode aparecer em um ou ambos os lados. Apresenta prurido e é mais freqüente no adulto, devido ao uso de roupas íntimas de material sintético, etc. TINHA DA VIRILHA (Tinea cruris) Agentes: Tricophyton rubrum Tricophyton mentagrophytes Microsporum gypseum Lesão: Descamativa e com queda do pelo da barba; pode haver prurido. TINHA DA BARBA (Tinea barbae) Agentes: Microsporum cannis Microsporum gypseum Tricophyton sp. Epidermophyton floccosum Lesão: Circular, de bordos ativos, pode ser única ou várias que se uniram e formaram uma lesão maior. Possui evolução muito rápida, dependendo da sensibilidade da pessoa. Atinge mais as crianças, difunde-se rapidamente porque os esporos vão caindo e formando novas lesões. Contágio: Do cão ou gato para o homem. TINHA DO CORPO (Tinea corporis ou herpes cincinado) Agentes: Trichophyton tonsurans Trichophyton shoenleinii (tinea favus) Lesão: No couro cabeludo apresenta forma de cratera de lua, com cheiro de ninho de rato. Pode se estender pelo corpo da pessoa. Atinge o folículo piloso ocasionando a queda do cabelo. Transmissão: De homem para homem TINHA DA CABEÇA (Tinea capitis) INOCULAÇÃO TRAUMÁTICA: Doenças causadas por fungos saprófitas (crescem no solo) que penetram no tecido através do trauma. Micoses subcutâneas (hipoderme) • Hifas e leveduras • Esporotricose (vasos linfáticos) - Sporothrix • Cromoblastomicose (lesões verrucosas e hemorrágicas) – Philiaphora • Micetoma (lesões tissulares profundas) – Pseudallescheria boydii • Zigomicose e Feoifomicose Micetoma Esporotricose Cromoblastomicose Micoses Subcutâneas Micetoma Hifas - Esporulação Cromoblastomicose Hifas - Esporulação Zigomicose Hifas Feihomicose Hifas Doenças adquiridas pela inalação. 1° Foco: Pulmão 2° Foco: Pode causar doença cutânea, óssea, neurológica As micoses sistêmicas endêmicas no Brasil são: Paracoccidioidomicose, Histoplasmose, Coccidioidomicose e Criptococose Ciclo de vida da Micose Sistêmica Micoses Sistêmicas ou Profundas 1º Reação Alveolite – inflamação dos alvéolos presença de macrófagos mas são incapazes de deter a infecção Multiplicação das leveduras, ocupam outras áreas pulmonares Sistema linfático entra em ação como tentativa de deter a infecção – “Complexo primário da micose” Fungemia: pode atingir órgãos distantes. Disseminação por sistema linfático e corrente sanguínea. Podem atingir Sistema Digestivo, ossos, SNC entre outros 2 a 3 semanas após o inicio da infecção, os linfócitos T agem (foram ativados com o 1º contato do fungo/hospedeiro) mecanismo capaz de deter a infecção. Lesões são ou não bloqueadas, mas alguns permanecem quiescentes prontas a eclodirem quando houver imunodeficiência Modificação de hifas para leveduras Inalados (conidios)* Chegam no Interior do alvéolo Inalação de Inalação de hifas saprófitas provenientes de fezes de morcego de pombos. São fagocitados por macrófagos e histiócitos. Sintomas: Perda de peso e suor noturno, quadro semelhante a gripe. A infecção crônica é disseminada principalmente em indivíduos com deficiência imune podendo levar a hepatoesplenomegalia. Histoplasmose – Histoplasma capsulatum A forma mais comum leva a meningoencefalite. A infecção me geral é subagudo ou crônica. Pode envolver pele, pulmão, glândula prostática, trato urinário, olhos, miocárdio, ossos e articulação. Criptococose – Cryptococcus neoformas, Cryptococcus gatti Inalação de leveduras. Cryptococcus em Humanos Micose sistêmica (endêmica). Pode variar de infecção assintomática a sintomática e crônica Fungo DIMÓRFICO (micelo no solo – levedura no hospedeiro) Lesões ulcerativas - mucosa oral, nasal, gastrintestinal Paracoccidioidomicose - Paracoccidioides brasiliensis Fatores predisponentes - Prematuridade - Gravidez - Baixa imunidade celular Causada por fungos de baixa virulência mas ao encontrar condições favoráveis como distúrbios do Sistema Imune podem ser patogênicos. Ex: Aspergiloses, Penicilose, Candidiase, Zigonicoses, Criptococose Micoses Oportunistas Fungo Dimórfico, endêmico do sudoeste da Ásia e sul da China. Manifestação clínica: Febre e perda de peso; lesões cutâneas, linfadenopatia, anemia, hepatomegalia com ou sem esplenomegalia. Tratamento com Anfotericina B Peniciliose – Penicillium marneffei A. Flavus, A. Fumigatus, A. Niger, A. terreus, A. nidulans, A. restrictus Doenças que se localizam nos pulmões, ouvido, SNC, glóbulos oculares, válvulas cardíacas. Aspergilose alérgica (bronquite): granjeiros, horticultores e jardineiros Habitat natural: Plantas, solo. Material orgânico em geral. Diagnostico de Aspergilose pulmonar Aspergilose Ação dos antifúngicos Diagnóstico A principal preocupação aqui é a identificação do patógeno. Microscopia. ➢ Preparação nativa: aqueça brevemente o material sob a lamela com 10% de KOH. ➢ Preparação corada: corante com azul de metileno, azul de lactofenol, ácido periódico de Schiff (PAS), tinta, etc. Cultura. ➢ Isso é possível em meios universais e seletivos. ➢ O agar de dextrose Sabouraud pode conter agentes seletivos (por exemplo, cloranfenicol e cicloeximida), este meio tem um pH ácido de 5,6. ➢ As principais estruturas identificadoras são morfológicas, em particular as estruturas reprodutivas sexuais assexuadas e, se presentes ➢ Testes bioquímicos são usados principalmente paraidentificar leveduras e geralmente não são tão importantes em micologia quanto em bacteriologia. Diagnóstico Diagnóstico Sorologia. ➢ Na identificação de antígenos antifúngicos antipsiculares no soro do paciente. ➢ A interpretação dos achados sorológicos é bastante difícil em infecções fúngicas. ➢ Detecção de antígeno. Ao encontrar antígenos específicos no material de diagnóstico por meios diretos usando anticorpos conhecidos, é possível em algumas infecções fúngicas (por exemplo, criptococose). Diagnóstico Teste cutâneo. ➢ Testes cutâneos (alergia) com antígenos fúngicos específicos podem ser úteis no diagnóstico de várias infecções fúngicas. Biologia molecular ➢ Combinados com a amplificação, tais testes são úteis para a detecção rápida de doenças micóticas em pacientes imunocomprometidos. Bibliografia FRANÇA, F.S.; LEITE, S.B. Micologia e virologia. Grupo A, 9788595026827. Disponível em: https://integrada.minhabiblioteca.com.br/#/books/9788595026827/. Acesso em: 16 Apr 2022
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