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Histotécnica Microscopia optica- principio Luz da fonte é condensada, atravessa o espécime e chega na objetiva. Imagem do espécime é aumentada e projetada na ocular que amplia e projeta na retina. _____________________________________________________ PREPARAÇÃO DE TECIDOS PARA MICROSCOPIA Fixação desidratação e diafanização inclusão microtomia montagem e coloração proteçãoHistotécnica Fixação evitar a digestão dos tecidos por enzimas presentes nas próprias células ou em bactérias, endurecer os fragmentos, preservar em grande parte a estrutura e a composição molecular dos tecidos preservação da morfologia. Fixação química – os tecidos são imersos em soluções de agente desnaturantes ou de agentes que estabilizam as moléculas formando pontes com moléculas vizinhas. É usado formol para fixação química. Após a fixação, os fragmentos de tecidos e órgãos devem ser infiltrados com substancias que proporcionem uma consistência rígida. Fixação física- congelamento Primeira etapa: desidratação//Segunda: diafanização Desidratação: Remove agua usando alcool Diafanização- segunda etapa. Remove o álcool usando xilol Inclusão – Endurecimento da amostra. Parafina não se mistura com agua e álcool, xilol se mistura com parafina. Derrete a parafina coloca o corpo q tava no xilol na parafina e ai endurece. Tem parafina no material também Microtomia - micrótomo utilizado p cortar parafina Montagem e coloração Proteção – aumenta o tempo de vida útil do corte _____________________________________________________ COLORAÇÕES EM HISTOLOGIA- PRINCÍPIO ACIDO-BASE Hematoxilina -corante básico -cor azul/roxo mitocôndrias -colore acido (núcleo) -Basófilos -afinidade por corante básico Eosina -Corante acido -cor rosa -colore base (proteínas, mitocôndrias) Acidófilos DNA TEM CARATER ACIDO NUCLEO TEM CARATER ACIDO HEMATOXILINA COLORE O NUCLEO EM VOLTA DO NUCLEO TEM O CITOPLASMA DE OUTRA COR PROTEINA GERALMENTE TEM CARATER BASICO, CONFERE COLORAÇÃO ROSA NUCLEO ROXO E CITOPLASMA ROSA PERMITINDO DIFERENCIAR ESSES DOIS COMPARTIMENTOS Tricrômio de masson -3 cores Periódico de Schiff Colore estruturas com alta proporção de macromoléculas de carboidrato (glicogênio, glicoproteína) Artefatos de técnica: Defeitos no material provocados por: ranhuras, dobras ou rugas, bolhas, coloração aberrante Direção de cortes
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