0fc 2 Relatório prática_ eletroforese 02

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RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS - EaD
	
AULA ____
	
	
	DATA:
____23__/____11__/____2021__
VERSÃO:01
RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS: Biologia Molecular 
DADOS DO(A) ALUNO(A):
	NOME: Hellen Clarice Campos Xavier 
	MATRÍCULA: 27004032
	CURSO: FARMÁCIA - EAD
	POLO: UNAMA- Santarém
	PROFESSOR(A) ORIENTADOR(A): Luan Aécio Melo Maciel
	
	
	TEMA DE AULA: ELETROFORESE
RELATÓRIO:
1. Identificar todos os equipamentos e reagentes necessários para a realização da eletroforese
-Cuba de eletroforese;
- Gel de agarose,
-Tampão;
- Amostra;
- Sonda (corante fluorescente);
- Transluminador;
- Corante fluorescente;
- Fotodocumentador;
- Primers;
- Magnésio;
- Nucleotídeos; 
-Termociclador;
-Tubos de PCR e Taq polimerase.
2. Descrever cada etapa dessa metodologia
Eletroforese em gel é uma técnica usada para separar fragmentos de DNA, outras macromoléculas, como o RNA e proteínas. A eletroforese envolve a passagem de uma corrente através de um gel contendo as moléculas de interesse. Em função de seu tamanho e carga, as moléculas vão se mover através do gel em diferentes direções ou em diferentes velocidades, o que permite que sejam separadas umas das outras. Todas as moléculas de DNA têm a mesma quantidade de carga por massa. Por essa razão, a eletroforese em gel de fragmentos de DNA faz a separação baseada apenas no tamanho. Através do uso da eletroforese, podemos ver quantos diferentes fragmentos de DNA estão presentes em uma amostra, e o quão grandes eles são em relação aos outros. Podemos também determinar o tamanho absoluto de um pedaço de DNA examinando-o ao lado de um DNA “padrão”, composto de fragmentos de DNA de tamanhos conhecidos.
3. Justificar a aplicação das diferentes concentrações dos géis. 
A agarose é utilizada como gel para a eletroforese. A agarose é um polissacarídeo forma 
uma rede que prende as moléculas durante a migração. De pendendo da concentração de agarose, há uma diferença no gradiente de separação, isto é, quanto maior a concentração 
de agarose, menor o tamanho dos poros e maior a dificuldade da migração dos fragmentos 
de DNA e de RNA, aumentando o tempo de migração. 
Para preparar um gel de agarose, faz-se a mistura entre o pó de agarose e a solução tampão 
T BE ou TAE. Após a polimerização do gel, coloca- se brometo de etídio, que fará o DNA e o 
RNA "brilhar" quando exposto ao UV. A menores temperaturas o gel ganha consistência. Um 
detalhe fundamental é a colocação do pente no gel durante o endurecimento. O pente cria 
poços que serão utilizados para a colocação das amostras de DNA e RNA. Podemos ver este processo como uma corrida. Cada um é colocado numa pista e na presença de uma corrente elétrica vai deixando o seu rastro. São estes rastros que vamos comparar. 
O tipo de matriz que é usada (agarose ou poliacrilamida)
depende do tamanho dos fragmentos de DNA que se pretende separar evisualizar. Devido à diferença no tamanho dos poros dessas matrizes,utiliza-se normalmente o gel de agarose para a separação de fragmentosque variam de 0,2 kb a 50 kb (1 kb = 1000 pares de bases) e o gel depoliacrilamida para separação de fragmentos pequenos, de até 1kb. Alternativamente para a resolução de fragmentos superiores a 1 kb podese utilizar a agarose com baixo ponto de fusão (Low Melting) que é um tipo de agarose derivada de síntese orgânica.
gel de agarose forma uma malha para fragmentos de maior tamanho, enquanto a poliacrilamida forma uma malha para fragmentos de menor tamanho.
	
	
	TEMA DE AULA: REAÇÃO EM CADEIA DA POLIMERASE 
RELATÓRIO:
1. Descrever cada uma das etapas da PCR, explicando detalhadamente cada uma. 
· DESNATURAÇÃO: O DNA genômico contendo a sequência a ser amplificada é desnaturado por aquecimento a cerca de 95°C por cerca de 30 segundos. A dupla fita é aberta (desnaturada), tornando-se uma fita única.
· ANELAMENTO OU HIBRIDIZAÇÃO: Após a separação das fitas, um par de iniciadores ou primers (uma fita de DNA específica para o gene que se quer estudar) complementam a fita oposta da sequência de DNA a ser amplificada. Ou seja, um deles é complementar à sequência em uma fita da dupla-hélice de DNA e o outro é complementar à sequência na outra fita. O molde é determinado pela posição dos iniciadores que se anelam a fita. Essa etapa ocorre a uma temperatura de 60°C
· EXTENSÃO OU POLIMERIZAÇÃO: Com o molde já identificado, a enzima DNA-polimerase adiciona as bases complementares, formando uma nova fita e então tem-se novamente a duplicação da fita de DNA. Esse processo acontece a uma temperatura de 72°C.
2. Realizar o cálculo para 10 reações da PCR
	
Quantidade para 1 reação 
	
Quantidade para 10 reações 
	Amostra de DNA 5UL 
	Amostra de DNA 50 UL
	dNTPs 2,5UL
	dNTPs 25 UL
	MgCl 1,25 UL
	MgCl 12,5 UL
	Primes 2 UL (1+1)
	Primes 20 UL (10+ 10)
	Taq Polimerase 1UL
	Taq Polimerase 10 UL 
	Tampão 4 UL
	Tampão 40 ul
	H20 ultrapura (q.s.p) 9,5 UL
	H20 ultrapura (q.s.p) 95 UL 
	Total preparado 25 uL
	Total preparado 250 uL
	
	
REFERÊNCIAS BIBLIOGRAFICAS: 
 
Metodologia. Disponível em: https://pt.khanacademy.org/science/biology/biotech-dna-technology/dna-sequencing-pcr-electrophoresis/a/gel-electrophoresis. Acesso em 10 de Junho.
Etapas da PCR. Disponível em: https://kasvi.com.br/3-etapas-pcr/. Acesso em 10 deNovembro.
Agarose ou poliacrilamida . Disponível em 10 de novembro. https://www.google.com/search?q=o+que+e+agarose+ou+poliacrilamida&oq=o+que+e+agarose+ou+poliacrilamida&aqs=chrome..69i57.7517j0j7&sourceid=chrome&ie=UTF-8. Acesso em 10 de novembro.
https://kasvi.com.br/principios-da-tecnica-de-eletroforese/
http://ciencia.hsw.uol.com.br/evidencias -de-d na1.htm
 https://pt.wikipedia.org/wiki/Eletroforese_em_gel