Cromatografia_liquida

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Orgânica 
Experimental:
Cromatografia
Líquida
Prof. Jonas Santos
09/03/2022
Aspectos 
históricos
(1903) Mikhael Semenovich
Tswett, botânico russo: Separação 
de misturas de pigmentos vegetais 
em colunas recheadas com 
adsorventes sólidos e solventes 
variados.
(1906) Cromatografia = chroma
(cor) + graphe [escrever] (grego)
 Década de 30 – Kuhn e Ledere
redescobriam e aperfeiçoavam a 
cromatografia de coluna.
 Izmailov e Shraiber – Cromatografia 
em camada delgada
 Era da “cromatografia moderna”: 
Prêmios Nobel -1937, 1938, 1939.
 Décadas de 60 e 70 – Karr, Jentoft, 
Gouwn, Hunber, Hulsman, Snyder e 
Kirkiland -cromatografia líquida de 
alta eficência
 1941 Martin e Synge –cromatografia 
gasosa 
 1951 Martin e James –
Cromatografia gasosa
Tipos de 
cromatografia
 Cromatografia em coluna
 Cromatografia em gel
 Cromatografia em flash
 Cromatografia em camada fina / delgada (CCF ou CCD)
 Cromatografia em papel
 Cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE)
 Cromatografia a gás (CG)
 Cromatografia a gás – espectrometria de massas (CG-MS)
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Cromatografia: modo de separação
Mecanismos de transferências de soluto entre FM e FE
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Cromatografia em Coluna
Cromatografia 
em coluna
 Consiste na separação de componentes entre
duas fases:
 Fase estacionária
 Fase móvel
 Fundamenta-se na diferença de solubilidade 
ou da adsortividade das substâncias em ambas 
as fases
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Adsorventes 
 Técnica de partição sólido-líquido
 Baseia-se na adsorção e na solubilidade
 Sólidos mais comuns:
 Sílica-gel: SiO2●xH2O
 Alumina: Al2O3 ●xH2O
 São usados como pós de 200-400mesh 
(número de abertura por polegada linear de 
uma tela).
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Interações 
 Sendo colocada em uma solução que contenha um 
composto orgânico, parte deste adsorve (adere) nas 
partículas do sólido.
 Interações intermoleculares
 van der Waals
 Dipolo-dipolo
 Ligação de hidrogênio
 Coordenação
 Formação de sal
 Quanto mais polar o grupo funcional, mais forte a 
interação com a alumina ou com a sílica
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Pavia, 2009
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 A capacidade de um 
solvente lavar um 
composto adsorvido na 
alumina depende da 
polaridade do primeiro.
 Equilíbrio dinâmico e 
diferenças de adsorção 
são fundamentais para a 
separação em coluna
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O processo de equilíbrio 
permite que diferentes 
compostos movam-se ao longo 
da coluna com diferentes 
velocidades de acordo com a 
sua afinidade relativa pelo 
adsorvente e pelo solvente
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 Importante:
 Tipo de adsorvente
 Sistema de solventes
Em geral:
 Compostos apolares passam mais 
rapidamente pela coluna já que sua 
afinidade pelo adsorvente é menor
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Aumento da 
polaridade e 
do “poder de 
solvente” em 
relação a 
grupos 
funcionais 
polares.
Série eluotrópica
Éter de petróleo
Ciclohexano
Tetracloreto de carbono
Tolueno
Clorofórmio
Cloreto de metileno
Dietil-éter
Acetato de etila
Acetona
Piridina 
Etanol
Metanol
Água
Ácido acético 
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 Aumenta-se a polaridade do solvente de forma 
progressiva para arrastar compostos de 
polaridade crescente.
 Conforme a polaridade do solvente aumenta, 
ele desloca as moléculas adsorvidas na fase 
estacionária e ocupa seus lugares na coluna.
 Assim, um solvente polar eluirá todos os tipos 
de compostos (polares e apolares)
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 Tamanho da coluna e quantidade de adsorvente.
Usualmente recomenda-se:
 Quantidade de adsorvente é 25 a 30 vezes, por peso, a 
quantidade de amostra a ser separada.
 A coluna deve ter uma razão 8:1 (comprimento e 
diâmetro)
Quantidade 
de amostra 
(g)
Quantidade 
de 
adsorvente 
(g)
Diâmetro da 
coluna (mm)
Compriment
o da coluna 
(mm)
0,01 0,3 3,5 30
0,10 3,0 7,5 60
1,00 30,0 16,0 130
10,00 300,0 35,0 280
 Empacotamento da coluna
 Deve ser por igual, sem bolhas e sem irregularidades.
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 Empacotamento da coluna
 Método a seco
 Método da lama – prepara-se a lama (sólido-
solvente) separadamente em um Erlenmeyer
 Aplicação da amostra na coluna
 Aplica-se a amostra no topo da coluna, sem 
diluição ou diluído em quantidade muito pequena 
de solvente
 Começa-se sempre com um eluente menos polar 
que aquele que poderia ser usado
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Cromatografia em Gel
Comparação 
entre os 
caminhos
percorridos 
por moléculas 
grandes e
as pequenas
 Fase estacionária –
material polimérico 
com ligações 
cruzadas.
 As moléculas são 
separadas de acordo 
com o tamanho, 
conforme penetram 
(ou não) em uma 
estrutura cheia de 
canais.
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Sinônimos:
 Cromatografia por permeação em gel
 Cromatografia em peneiras moleculares
 Cromatografia de exclusão por tamanho
Sephadex – usado para separar 
proteínas, ácidos nucléicos, enzimas e 
carboidratos.
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Cromatografia em Flash
 Modificação de uma coluna comum 
de cromatografia em coluna
O adsorvente é empacotado em uma 
coluna relativamente curta e usa-se o 
ar sob pressão para forçar o solvente 
pelo adsorvente
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A pressão alta do ar força o 
solvente a uma velocidade maior do 
que se dependesse apenas da 
gravidade. 
Assim, o tempo de experimento 
diminui.
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