microscopia e colorações histológicas e histoquimicas

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Citologi� � Histologi�
Preparação das amostras para microscopia
as etapas de preparação do material para microscopia eletrônica e óptica são parecidas, se
baseia na remoção do tecido do animal, que é segmentado e processado, passa por um
processo de fixação, desidratação, inclusão em parafina, corte e montagem da lâmina
as diferenças na preparação do material estão nos tipos de substâncias utilizadas em cada
etapa
MO= óptica
ME = eletronica
5. análise inclusão na parafina
6. análise no corte
após a coleta dos corte de parafina eles são colocados em banho maria a 40 graus
tipos de corte possíveis em material biológico
a amostra se apresenta diferente na lâmina dependendo do corte
Métodos básicos de coloração na histologia (estudo da morfologia microscópica de células
e tecidos)
a coloração é usada para visualizar e distinguir diferentes partes de células e tecidos
os corantes podem ser específicos (para uma estrutura particular, grupo químico ou
molécula) ou não específico (maior parte da célula cora do mesmo jeito)
tipos de corantes:
- ácidos: carga negativa, se ligam a estruturas carregadas positivamente
- básicos: carga positiva, se ligam a estruturas carregadas negativamente
- combinação dos dois (neutros): não tem carga
ácidos nucleicos e proteínas possuem grupamentos carregados, grupamentos carboxila ou
grupamentos fosfato
corantes mais comuns:
- hematoxilina - eosina (H.E.)
HEMATOXILINA
1. corante básico
2. cora as estruturas em azul e roxo
EOSINA
1. corante ácido
2. cora as estruturas de rosa
- ácido periódico de Schiff (P.A.S)
1. processo histoquímico (identificação da natureza química de constituintes celulares)
2. identificação de glicogênio e outros polissacarídeos que tem glicose na constituição
3. ajuda no diagnóstico de várias doenças
4. cora carboidratos, moléculas ricas em carboidratos
5. as mucinas se coram na cor magenta
6. os núcleos se coram na cor azul
- impregnação pela prata/ método de golgi
1. no método de uso se utiliza o dicromato de potássio e o nitrato de prata, gera
deposição de cromato de prata formando um cristal marrom avermelhado
2. cora tecidos do sistema nervoso
- azul de toluidina
1. cora ácidos nucléicos e polissacarídeos
2. corante básico
3. ácidos nucleicos em azul
4. polissacarídeos em roxo
- tricrômico de Masson
1. efeito triplo, resulta em 3 diferentes contrastes
2. estruturas basofílicas e ácidos nucleicos se coram em azul
3. colágeno se cora em azul ou verde
4. citoplasma, eritrócitos, queratina e músculo se coram em vermelho
- tetróxido de ósmio
1. usado para corar gordura, mielina, complexo de golgi
2. é muito tóxico, segue protocolos restritos
3. técnica utilizada em microscopia de transmissão
Como examinar cortes histológicos ao microscópio óptico
- observe a lâmina a olho nu antes de começar, isso ajudará a orientação
- coloque a lâmina no microscópio e calibre começando com a objetiva de
menor aumento, sempre focalizando a imagem
- vai aumentando o aumento (magnificação)
- após olhar a lâmina e as estruturas de preparação, escreva uma descrição
das estruturas maiores e menores que você encontrou
- identificar a coloração usada
- identificar as estruturas da lâmina, de que parte do corpo é
- anote infos adicionais, função das células, dos tecidos e do órgão