Coloração e Histoquímica

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D é b o r a h M i r a n d a 
 
Coloração 
 
ETAPAS ANTERIORES DA COLORAÇÃO 
 
1. Fixação: por meio do formol 4% 
(formaldeído ou glutaraldeído), com um 
volume de 10 a 20 vezes maior do que o da 
peça, preserva-se a morfologia e a 
composição dos tecidos; 
2. Desidratação: Remover 
água dos tecidos utilizando-se de 
álcool em concentrações 
crescentes 
3. Clareamento ou diafinização: embeber a 
peça com substâncias miscíveis na parafina 
como xilol, toluol e benzol. Tais 
substâncias favorecem a passagem de luz. 
4. Impregnação: introdução de parafina 
5. Inclusão: a peça adquire consistência 
rígida, sólida, podendo ser cortada. 
CORANTES 
Podem ser de dois tipos: 
Corantes ácidos: possuem auxocromo aniônico 
(carga elétrica negativa), com afinidade para 
componentes básicos do tecido (componentes 
catiônicos), como: proteínas citoplasmáticas, 
grânulos citoplasmáticos, mitocôndrias, colágeno. 
 
Corantes Básicos: possuem auxocromo catiônico 
(carga elétrica positiva), com afinidade para 
componentes ácidos do tecido ( componentes 
aniônicos), como: ácidos nucléicos, 
glicosaminoglicanos, glicoproteínas ácidas. 
 
TÉCNICAS DE COLORAÇÃO 
Microscopia de contraste 
Produz objetos visíveis sem corante, baseando-se 
na diferença da velocidade da luz entre as células, 
devido as diferenças de densidades entre as 
regiões. 
Microscopia de fluorescência 
 
 
 
Quando certas substâncias são irradiadas por luz 
ultravioleta e emitem um comprimento de luz 
visível. 
(Fonte de luz de mercúrio sob alta pressão * passa 
pelas etapas anteriores da coloração) 
Microscopia eletrônica 
Baseia-se na interação entre elétrons e 
componentes do tecido; 
 
 
 
 
HISTOQUÍMICA E CITOQUÍMICA 
Processos que permitem a visualização de 
macromoléculas intra e extracelulares. Muito 
usados para diagnósticos laboratoriais. 
Analisar as células por meio de corantes. 
Às moléculas que se ligam as que 
queremos identificar são adicionados marcadores, 
como substâncias fluorescentes, átomos 
radioativos, metais como partículas de ouro e 
moléculas de enzimas como a peroxidase. 
Ácidos nucléicos: corantes básicos 
Proteínas: Corantes ácidos 
*As enzimas são muito identificadas pelo 
mecanismo de imunocitoquímica 
 D é b o r a h M i r a n d a 
 
(imergindo o corte de tecido em uma 
solução do substrato da enzima). Dentre as 
enzimas encontradas há: 
• Fosfatases: encontradas em 
lisossomos 
• Deidrogenases: ciclo de Krebs 
• Peroxidase 
Diferenciando termos: 
Polissacarídeos: existem livres ou combinados com 
proteínas e lipídeos. Livre comum: glicogênio. 
Glicoproteínas: cadeias pequenas de açúcar 
associadas a proteína (principal cadeia é a proteica) 
Glicosaminoglicanos: polissacarídeos aminados 
(amino açúcares) 
Proteoglicanos: quando um grande número de 
glicosaminoglicanos se prendem a um eixo 
proteico. *principal componente da matriz. 
Glicosaminoglicanos e glicoproteínas: são 
fortemente ácidos devido a presença de grupos 
carboxila e sulfato. 
 
IMUNOCITOQUÍMICA 
Técnica que não utiliza corantes e sim pela ligação 
do anticorpo a proteína de interesse (o anticorpo 
possui um marcador) 
*anticorpos = imunoglobulinas 
Anticorpo policlonal: anticorpos gerados de mais 
de um clone de linfócito b 
Anticorpos monoclonais: provém de um mesmo 
linfócito e possuem ação específica, são usados na 
imunoterapia, tratamento de câncer e doenças 
autoimunes (os efeitos colaterais são bem 
menores) 
Método direto e indireto 
 
 
 
 
Técnicas de hibridização: 
É a ligação entre duas moléculas de cadeia única de 
ácidos nucleicos que se reconhecem um ao outro 
se suas sequencias forem complementares, 
formando moléculas de cadeia dupla, permitindo a 
identificação de sequências específicas de DNA ou 
RNA 
Hibridização in situ: 
Lâminas com cortes de tecidos, células ou 
cromossomos são aquecidas para separar as 
cadeias duplas de DNA. Em seguida, uma solução 
contendo a sonda ( DNA ou RNA complementares 
ligados a um marcador) é colocada sobre o 
espécime por tempo necessário para hibridização. 
Alguns corantes importantes: 
Giemsa: neutro 
Azul de toluidina: afinidade pelo DNA dos núcleos 
celulares e pelo RNA presente no citoplasma 
Impregnação pela prata: depósitos de metais, 
organelas e tecido nervoso 
Sudan Black: lipofílico 
Ácidos: Fucsina ácida, azul de anilina e Orange g 
Básico: azul de metileno, verde metil e azul de 
toluidina 
Neutros: Giemsa, sudan black e hematoxilina e 
eosina 
Algumas colorações importantes: 
Glicogênio: PAS 
Mastócito: Azul de toluidina 
Plasmócito: Hematoxilina e eosina 
Fibras colágenas: Tricômico de gomori 
Fibras elásticas: Verhoeff ou Nitrato de prata 
Fibras reticulares: Del Rio ou Hortega 
Timo: hematoxilina eosina 
Linfonodo: Hematoxilina e eosina 
Hemácia/ 
basófilo/eosinófilo/linfócito/neutrófilo/monócit
o: Giemsa