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Estudo Dirigido – Análises Clinicas II (N1) - Profª. Anna Léa 1) Quais as características dos agentes biológicos de classe II? Dê exemplos Risco individual – Moderado Risco para a comunidade – Limitado São patogênicos para os homens e animais A maioria dos organismos são patogênicos Exemplos: Bactérias: Escherichia, Neisseria, Pseudomonas / Fungos: Candida, Malassezia, Aspergillus SSP 2) Quais as características dos agentes biológicos de classe III? Dê exemplos Muito patogênico para os homens Potencialmente letais / Exige contenção para impedir a contaminação e é transmitido pelo ar Usualmente existe tratamento ou prevenção Exemplos: Bactéria – Brucella sp, Mycobacterium tuberculosis, M. bovis, Yersinia, Burkholderia mallei / Fungo – Histoplasma sp, Coccidioidis immitis / Vírus – rábico, HIV, Influenza aviária 3) Quais critérios devem ser utilizados para rejeição de amostras? Verificar se as amostras estão devidamente identificadas Verificar se a quantidade de material é suficiente para o processamento dos testes microbiológicos Verificar se o transporte foi feito de forma adequada, em frasco estéril e compatível com o sítio informado, e se o frasco está fechado da forma certa. A amostra deve ser compatível com as solicitações dos exames. 4) Quais os meios mais utilizados na rotina de laboratórios de microbiologia? Para que microrganismos servem? Meios de Transporte Meio Stuart ou Amies. Meio de Cary-Blair. Meios de Cultura Ágar sangue, Ágar chocolate, Ágar Thayer-Martin, Ágar Eosin Methilene Blue – EMB, Ágar MacConkey, Ágar SS (Salmonella-Shigella), Ágar CLED (Cystine Lactose Electrolyte Deficient), Ágar Lowenstein Deficient Ágar CLED - Isolar e quantificar microrganismos Gram positivos, Gram negativos e leveduras. Ágar SS - Selecionar e isolar espécies de Salmonella e Shigella, em amostras de fezes, alimentos e água. Ágar MacConkey - Isolar bacilos Gram negativos (enterobactérias e não fermentadores) e verificar a fermentação ou não da lactose. Ágar Sangue - bactérias gram-positivas e gram- negativas bem como de fungos (bolores e leveduras) Ágar Chocolate - meio enriquecido e não seletivo para cultivo de bactérias delicadas e exigentes. Ágar Thayer-Martin - destinados ao isolamento de Neisseria gonorrhoeae e Neisseria meningitidis Ágar EMB - usado para isolar e identificar Escherichia coli e Enterobacter Ágar Lowenstein Deficient - destinado ao cultivo de micobactérias 5) Explique a técnica de esgotamento em estrias ou estrias múltiplas. É o método na qual se espalha o material com o auxílio de uma alça bacteriológica, fazendo estrias sucessivas até o esgotamento do material, de modo a obter-se um perfeito isolamento das bactérias existentes na amostra. Quando o material é muito denso, a alça deverá ser flambada. 6) Em caso de hemoculturas positivas quais agentes devem ser reportados ao CCIH e a vigilância sanitária? Suspeita de endocardite, sepse, infecções hospitalares (antes de iniciar, ou antes, da troca de um esquema de antibióticos), febre de origem indeterminada, infecções em pacientes imunodeprimidos (oncológicos, neutropênicos, usuários de corticóide, SIDA), meningites (colher líquor também, sendo este mais importante que as hemoculturas), pneumonias graves (com insuficiência respiratória, instabilidade hemodinâmica), bacteremia. 7) Quais os padrões de hemólise identificados em Streptococcus? Os Streptococcus são designados de várias maneiras. Se a hemólise for total diz-se que o Streptococcus é beta-hemolítico. Se a hemólise for parcial, diz-se que o Streptococcus é alfa- hemolítico. Não havendo hemólise, diz-se que o Streptococcus é do tipo gama ou não hemolítico. 8) Como identificamos S. pyogenes? O principal exame para identificar S. Pyogenes é o A SLO, que é o exame da antiestreptolisina O, que tem como objetivo identificar anticorpos produzidos pelo organismo contra essa bactéria 9) Como se organiza a parede celular das micobactérias? As características da parede interferem no processo de tratamento da doença? A parede celular é constituída de cerca de 60% de ácidos micóticos (ácidos graxos de cadeia longa incomum), covalentemente ligados ao polissacarídeo que compõem a parede. 10) As micobactérias causadoras de tuberculose estão no complexo M. tuberculosis? Quais as espécies deste complexo? Sim. As outras espécies pertencentes a esse complexo são: M. Bovis, M. Bovis BCG, M Africanum, M. Microti e M. Canetti. 11) Como devem ser tratadas as amostras de escarro para detecção de M. tuberculosis? Tratamento das amostras de escarro: NALC-NaOH* NaOH 4% Ácido oxálico 3% (indicado para materiais contaminados com P. aeruginosa) Meios que podem ser usados para semeadura: Lowerstein-Jensen, MGIT, MB/BacT, Ogawa 12) Como identificamos S. agalactie? O Streptococcus agalactiae ou Streptococcus do grupo B de Lancefield, é um coco gram positivo, de coloração roxa devido sua parede celular, beta hemolítico de potencial invasivo, catalase negativo porque não apresenta enzimas citocrômicas em sua parede celular, oxidase negativo e de extrema importância clínica. 13) Quais as caracteríticas gerais dos membros da família Enterobacteriaceae? As bactérias da família Enterobacteriaceae são bacilos Gram negativos não esporuladores, anaeróbios facultativos, e a maioria das espécies crescem bem na temperatura de 37ºC. Por outro lado, algumas espécies crescem melhor na temperatura de 25- 30ºC. 14) Espécimes suspeitos de presença de membros das Enterobacteriaceae são inoculados em geral em que meios? O meio seletivo diferencial baseia-se em que característica? Produtos intravenosos contaminados, derivados sanguíneos, água destilada e cateteres. 15) Correlacione: a) Fermentadores de lactose b) Não fermentadores de lactose (A) Enterobacter (B) Shigella (A) Escherichia (A) Klebsiella (B) Salmonella (B) Proteus (B) Pseudomonas 16) Dentre as linhagens de E. coli entero-hemorragicas, o sorotipo O157:H7 é de relevante importância. Discorra sobre as principais características desse sorotipo e patogenia da doença causada por ele. As bactérias Gram-negativas Escherichia coli O157:H7 e outras E. coli entero- hemorrágicas (ECEH) tipicamente causam diarreia sanguinolenta aguda, que pode provocar síndrome hemolítico-urêmica. Os sintomas são cólicas abdominais e diarreia, a qual pode ser muito sanguinolenta. Febre não é importante. O diagnóstico é feito por cultura de fezes e exame da toxina. O tratamento é de suporte; o uso de antibióticos não é recomendado. 17) Quais as principais características de Shigella que permitem seu diagnóstico laboratorial? Shigella não fermenta lactose nem produz gás sulfeto de hidrogênio, então as colônias resultantes são incolores 18) Como é feito o diagnóstico laboratorial de Vibrio cholerae? O Vibrio cholerae pode ser isolado a partir da cultura de amostras de fezes de doentes ou portadores assintomáticos. A coleta do material pode ser feita por swab retal ou fecal, fezes in natura ou em papel de filtro. 19) Quais as principais características de Pseudomonas? Pseudomonas são bacilos Gram negativos, aeróbicos, não têm grandes exigências nutritivas, têm versatilidade em termos de temperatura e condições ambientais, e por isso, são amplamente distribuídas na natureza e particularmente abundante no solo e água. 20) Quais os principais testes de identificação de Staphylococcus aureus? Coloração de Gram, prova da catalase – positivo, prova da coagulase – positivo, prova da DNAse – positivo. 21) Quais os principais testes de identificação de Neisseria menigitidis? Teste de Oxidase – Positivo, e Catalase – Positivo. 22) Diferencie antimicrobiano e antibiótico. Antimicrobiano-> É utilizado para descrever substancias que demonstram a capacidade de reduzir a presença de micróbios tais como bactérias e fungos. Antibióticos -> Substâncias capazes de eliminar ou impedir a multiplicação de bactérias, são utilizados no tratamento de infecções bacterianas. 23) Quais podem ser os alvos estruturais dos antimicrobianos? Parede celular, síntese proteica, membrana plasmática, ácidos nucleicos e fatores de crescimento. 24) Classifique os antibacterianos quanto ao espectro de ação. Os antibióticos podem ser classificados em dois grandes grupos: Bactericidas e Bacteriostático. Os bactericidas são responsáveis por causar a morte de bactérias. Os bacteriostáticos são responsáveis por inibir a multiplicação delas. 25) Quais os principais métodos de testes de sensibilidade a antimicrobianos? Explique-os resumidamente. Disco-difusão - O teste de disco-difusão em ágar foi descrito em 1966 por Bauer e Kirby. É um dos métodos de sensibilidade mais simples e confiáveis. É realizado dispensando os discos de antimicrobianos sobre a placa de ágar após a aplicação do inóculo bacteriano com aproximadamente 1 a 2 x 10 UFC/mL. Microdiluição em Caldo – O procedimento envolve a diluição seriada em caldo de uma concentração definida do antimicrobiano que é desafiada com um inóculo padronizado da cepa teste. Macrodiluição em caldo - Esta técnica foi uma das primeiras a ser utilizada na avaliação da sensibilidade aos agentes antimicrobianos e envolve a preparação de diluições seriadas e logarítmicas de antimicrobianos (por exemplo, 1, 2, 4 e 8 μg/mL) em um meio de cultura líquido, o qual permitirá o crescimento bacteriano. Difusão em ágar - neste procedimento são colocados pequenos discos de papel que contêm diferentes antibióticos em uma placa com meio de cultura apropriado para crescimento do agente infeccioso. Após alguns dias, é verificado se houve ou não crescimento em volta do disco. E-test - é uma fita plástica, disponível comercialmente, que é impregnada por concentrações crescentes de antimicrobiano em uma de suas faces. Na face oposta, está impressa a escala das concentrações testadas, a fim de orientar a leitura do resultado. 26) Para que são realizados os TSAs? O antibiograma, também conhecido por Teste de Sensibilidade a Antimicrobianos (TSA), é um exame que tem como objetivo determinar o perfil de sensibilidade e resistência de bactérias e fungos aos antibióticos. 27) Como são selecionados os antimicrobianos utilizados no TSA? Quais as principais padronizações observadas? Como é feito o controle de qualidade? O antibiótico deve ter apresentação parenteral, possuir mínima toxicidade e custos, ser fraco indutor de resistência e farmacocinética adequada, além de possuir atividade contra a maior parte dos patógenos causadores de ISC na instituição. As principais padronizações observadas: pH do meio de cultura ➔ Entre 7,2 e 7,4; Padronização do inóculo ➔ Equivalente à escala 0,5MF (MacFarland ➔ 1,5x108 UFC/mL ); Espessura do meio de cultura; Temperatura de incubação; Atmosfera de incubação; Meio padrão ➔ Müeller-Hinton. Quanto ao controle de qualidade: Monitorar a precisão e acurácia dos procedimentos aplicados nos testes, verificar a qualidade dos materiais empregados e o desempenho do técnico que conduz o teste e finaliza o exame; Cepas-padrões (ATCC – American Type Culture Collection) 28) Como devem ser interpretados os resultados de um TSA? Sensível - em geral significa que a infecção causada pelo microrganismo isolado pode ser adequadamente tratada com a dosagem habitual do antimicrobiano testado e recomendado para este tipo de infecção. 2- Intermediário - significa que o microrganismo pode ser inibido por concentrações atingíveis com doses maiores, se puderem ser administradas ou se a infecção ocorre em local onde o antimicrobiano é fisiologicamente concentrado (trato urinário, por ex.) 3- Resistente - quando o isolado não é inibido pela concentração do antimicrobiano obtida no local da infecção ou quando o microrganismo patogênico apresenta mecanismos específicos de resistência. 29) Qual deve ser o procedimento para semeadura de urina? A técnica quantitativa pode ser utilizada para a semeadura de urina. Inicie descarregando o SWAB em um canto do meio de cultura. Com a alça bacteriológica já flambada (ou com Alça Descartável Estéril), faça a primeira estria (esgotamento inicial), transferindo o material biológico para o meio. 30) O Acinetobacter baumanni se diferencia da Pseudomonas aeruginosa por ser: a) Oxidase positiva. b) Móvel. c) Imóvel e oxidase negativa. ✓ d) Produção de pioverdina 31) Pseudomonas aeruginosa é um patógeno tipicamente oportunista, podendo causar várias doenças, principalmente em imunodeprimidos. Atualmente, é considerado um patógeno alerta em infecções nosocomiais, devido a sua característica de manutenção em locais úmidos e elevada resistência a muitos antibióticos e antissépticos. Assinale a alternativa que descreve corretamente a análise de identificação microbiológica da Pseudomonas aeruginosa. a) Fermenta glicose, oxidase positiva e algumas cepas produzem um pigmento azul- esverdeado chamado piocianina✓ b) Oxidase e catalase positivos, móvel, aeróbio, não fermentador c) Fermentadores da glicose, anaeróbios facultativos, oxidase positiva d) Aeróbias, móveis e oxidase negativa 32) (Farmacêutico Bioquímico/Secretaria da Administração do Estado - TO 2004) A temperatura média de incubação dos meios de cultura durante a realização da coprocultura é de 37 °C, porém algumas bactérias são termotolerantes e têm seu crescimento favorecido pelo aumento da temperatura. O gênero de bactérias que cresce bem a 42-43 °C, inibindo o crescimento de outras e, com isso, facilitando o seu diagnóstico, é: a) Escherichia. b) Proteus. c) Clostridium. d) Campylobacter✓ 33) Apresenta colônias incolores em Agar MacConkey, oxidase positivo, fermentador de sacarose, aglutina em anti-soro polivalente O1. Esse microrganismo pode ser: a) Helicobacter pylori b) Campylobacter jejuni c) Vibrio cholerae✓ d) Escherichia coli 34) São características de Acinetobacter, exceto: a) Oxidase negativo b) Em esfregaços exibem aspecto cocobacilar ou em forma de cocos sendo confundidos com Neisseria c) É sensível a maior parte dos antibacterianos✓ d) São agentes de pneumonia hospitalar e infecções associadas a dispositivos invasivos. 35) Seu paciente apresenta queimaduras de terceiro grau na maioria do corpo. Ele estava bem até dois dias atrás quando começou a apresentar febre e suas roupas de cama apresentavam pus de coloração azul-esverdeada. A coloração de gram do pus mostrou bacilos gram negativos que formavam colônias sem cor no ágar EMB. Qual das seguintes bactérias é causa mais provável da infecção? a) Campylobacter jejuni b) Escherichia coli c) Haemophilus influenzae d) Pseudomonas aeruginosa✓
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