pcc biologia molecular Enzimas de restrição

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Licenciatura em Ciências Biologicas 
 
PRATICA COMO COMPONENTE CURRICULAR 
DISCIPLINA:BIOLOGIA MOLECULAR
TEMA:ENZIMAS DE RESTRIÇÃO
 
 
 
 
 
 
 
 Maria Victória Da Silva Laurentino 
  RA: N689587
 Naiara Alves Ferreira
 RA: C5374e3
 
 
 
PCC de Biologia Molecular 
Enzimas de restrição
As enzimas de restrição são endonucleases que clivam em sequências específicas do DNA. Quase todas as enzimas de restrição reconhecem sequência palíndrômicas, isto é, quando uma das fitas for lida de 5’ 3’ e a outra no mesmo sentido, elas serão as mesmas. 
Exemplos:
1) A enzima EcoRV reconhece a seguinte sequência: 5’ GATATC 3’
 3’ CTATAG 5’
2) A enzima TaqI reconhece a seguinte sequência: 5’ TCGA 3’
 3’ AGCT 5’
A enzima 1 foi isolada da Escherichia coli (Eco) e a enzima 2 foi isolada de Thermus aquaticus (Taq). A sequência reconhecida pela enzima de restrição é chamada de sítio de restrição.
As enzimas de restrição são muito utilizadas em laboratórios de Biologia Molecular.
Atividade
A sequência abaixo foi obtida de um banco de dados que armazena sequências. Essa sequência é fita simples e está representada seguindo a convenção, ou seja, de 5’ 3’.
GCCTTCAATGGCAAGCGGTCTGGAATCCTACTTCTTGAATCGGCACGGTGTCATTACGGGCGGGGGCCAGAACAACGTCCCTGGACATCACACCTAGCCCGTGCGACGGCGGAAACCTTCGCCGGCGCAGGCTTCGACGTGACCCTCATCGCGGAACCCTCCCCCACCCCAGTGTTGGCGTGGCTGGTGCGCTCACGGCGAATGGACGTGGGCGTGCAGATCACCGCCTCGCACAATCGAATTCAGGACAACGGCTACAAGCTGTACCTGGACGGCGGCTCTCAGCTGGTCTCCCCCGCCGACCGGCAGATCGAGGAGCACATTGCCGCCCAGCCAACTGACGCGGCGAAGATCCCCCGCTCCGAGGCGAAGTCTGTAGACCTGTCCGTAGTCTCCGGCTATGTCACCGAGCTAAGTACCCTGGTGGCCACCGGCCGCCAATCCGAGCTGGCGCCGCGGCGGAAGCTGAAGATCCTCTACACCCCCATGCACGGCGTGGGCGGCAATGCCCTGGAGTGGGCCTTACGTGAATTCGGCTTCGGCAACGTGCACGCGGTGGCCTCGCAGCGCTGGCCGGACCCGACCTTCCCGACTGTGGACTTCCCCAACCCTGAGGAGCCGGGTGCCACCGACGCGCTGCTGGAAGAAGCCCGCGCCATCGATGCGGACCTGCTGATCGCCCTGGATCCGGATGCGGACC
Sabe-se que a enzima de restrição BamHI corta um DNA fita dupla do seguinte modo e no seguinte sítio (veja figura).
a) Quantos sítios de restrição existem nessa sequência? 
Existe apenas um sitio de restrição.
b) Faça uma pesquisa sobre os tipos de cortes das enzimas de restrição. Descreva-os e classifique o corte da enzima BamHI.
Enzimas são proteínas que tem atividade catalítica dentro destas enzimas encontram 
enzimas de restrição conhecida como endonuclease, são enzimas que cortam cadeias fosfodiéster, a partir de uma sequência de reconhecimento, este reconhecimento especifico de DNA nas quais são chamadas, região de restrição, as enzimas de restrição são produzidas através das bactérias, como mecanismo de defesa, contra infecção por fagos, as endonucleases tipo II são enzimas de restrição pode gerar dois tipos diferentes de cortes, dependendo se eles cortam ambas as cadeias no centro da sequência de reconhecimento, ou cada fio mais perto de uma das extremidades da sequência de reconhecimento. O primeiro corte vai gerar termina se corte sem saliências nucleotídeos. Este último gera pegajoso termina porque cada fragmento resultante de DNA tem saliência que complementa os outros fragmentos ambos são uteis em genética molecular para a tomada de ADN recombinante de proteína.
c) O gel abaixo apresenta, na canaleta 1, um padrão de peso molecular onde as bandas representam sequências com 50bp, 80bp, 200bp e 1000pb. Suponha que o DNA acima tenha sido clivado pela enzima PvuII e represente, na canaleta 2, os fragmentos resultantes do corte. 
 1 2 
Há apenas um sítio de restrição na sequência acima, dividindo a fita simples em duas 
partes. No fragmento menor, há cerca de 280 bases nitrogenadas, portanto 140 pb, 
ficando entre as sequências 80 e 200 pb. Já no fragmento maior, há em torno de 410 
bases, ou seja, 205 pb, ficando representado logo abaixo dos 20.