Isolamento e meios de cultivo

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Caldo tetrationato – específico - Salmonella 
Caldo Rappaport-Vassiliadis - específico - Salmonella 
Reinforced Clostridial Medium – específico clostridium. 
 
Meios enriquecidos: contém muitos nutrientes. Amostras 
advindos de tecidos pouco contaminados, com dificuldade 
de isolar. 
BHI (brain heart infusion) 
TIO (tioglicolato) – para microaerófilos. 
 
Incubação em estufas com diferentes temperaturas; 
Bactérias de peixes; Aeromonas precisa de 25°C, diferente 
das outras que a maioria cresce em 37°C. 
*Deixamos todos os isolados por no mínimo 72h (37°C) 
para casos de bactérias de crescimento lento como a 
nocardia. 
Diferentes condições de incubação: Aerobiose, anaerobiose 
e microaerobiose. 
Ambiente para microaerófilos - Jarra com vela para strepto 
e actinomyces. 
 
 
Após 24 horas: o Ágar sangue: 
Bactéria pura ou contaminação. 
 
Identificação: 
Morfologia Colonial: características do crescimento no meio 
de cultura: 
Forma (circular, irregular, radiada, rizóide), elevação (chata, 
convexa, umbilicada), tamanho (em mm), bordas (inteiros, 
ondulados, lombados, denticulados) e a superfície (lisa ou 
rugosa); 
 
Presença ou ausência de hemólise em ágar sangue: 
 
Fica mais escuro ou mais claro e ao redor da colônia sem 
pigmentação do ágar. 
 
Tipos de hemólise para Streptococcus sp. 
Alfa-hemólise ( α ): é caracterizada por uma hemólise 
parcial, associada com a perda parcial de hemoglobina 
pelas hemácias, ocorrendo uma zona cinza-esverdeada no 
meio de cultura ao redor da colônia; 
Beta-hemólise ( β ): é caracterizada pela lise completa das 
hemácias que rodeiam a colônia, ocorrendo uma zona 
transparente (zona de lise total) ao redor da colônia; 
Gama-hemólise ( γ ): é caracterizada pela ausência de 
hemólise. Cepas desses microrganismos não hemolíticos, 
ou d-hemolíticos; 
 
Streptococcus equi – causa hemólise completa (beta). 
 
Hemólise para Staphylococcus sp. 
Alfa-hemólise ( α ): é caracterizada por uma hemólise 
completa; 
Beta-hemólise ( β ): é caracterizada pela hemólise parcial; 
Dupla hemólise: Alfa + Beta hemólise. 
 
 
 
 
 
 
Presença de células leveduriformes (são bem maiores), 
como malassezia, cândida. 
 
Dúvida na coloração de Gram à Teste do KOH 3% 
Dissolve parede celular das gram negativas. 
Fica um fluido grudento. 
 
 
Coloração de Ziehl-Neelsen: Bactérias álcool-ácido 
resistentes; 
Aquecer. 
Evidenciam cápsula. 
Coloração específica para esporos, cápsulas e flagelos. 
 
 
 
Provas de triagem: 
Gram-positivas: Catalase e coagulase 
Gram-negativas: Oxidase 
 
Catalase positiva: formação de bolhas – peróxido de 
hidrogênio. 
Coagulase positiva: formação de coágulos. 
Coagulase livre na lâmina forma uma névoa – negativo. 
Oxidase: afeta o citocromo oxidase; positiva forma uma 
área rosea; todas as enterobactérias são oxidase negativas. 
 
 
 
Testes bioquímicos 
O estudo da atividade bioquímica das bactérias consiste em 
pesquisar as modificações no meio de cultura pelo 
metabolismo bacteriano. O que se constata é o resultado 
global da ação enzimática da bactéria. 
 
 
 
SIM (sulfur indole motility) 
Meio utilizado para verificação de motilidade, indol e 
produção de gás e enxofre; 
Após o crescimento pingar o reativo de Kovac's para 
avaliação do indol; 
Forma um anel rosa. 
Amarelo = negativo. 
Preto = presença de enxofre. 
Linha de inoculação – a partir dela se verifica se é móvel ou 
não. 
 
 
 
Meio semissólido glicose oxidativa-fermentativa (GOF): 
Fonte de carboidratos: desdobramento de glicose na 
presença e ausência de O2; 
Avalia se é capaz de desdobrar a glicose no meio. 
Sem utilização - Se manteve verde. 
Utilização Na presença de O2 – amarelo na superície. 
Oxifermentativa – utiliza na presença ou ausência de O2 
(toda amarela).