Meios de cultivo 3 e PCR

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Rhodococcus equi; 
 
MSA (Mannitol Salt Agar): utilizado para o isolamento 
seletivo de estafilococos e para a detecção de 
Staphylococcus aureus provenientes de amostras clínicas. 
 
 
 
Ágar Xilose-Lisina-Desoxicolato (XLD): a região onde a 
bactéria cresce se torna vermelha e com coloração negra 
devido à produção de H2S; 
 
Ágar Hektoen (HEK) - a região onde a bactéria cresce se 
torna verde e com coloração negra devido à produção de 
H2S; 
 
 
 
Kits comercias: 
Bactray: Identificação bioquímica de bactérias gram-
negativas oxidase + ou -; 
Vitek 2; 
OmniLog®; 
MALDI-TOF MS (Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization 
– Time of Flight). 
 
 
 
A partir da identificação bacteriana: 
 Realização de teste de susceptibilidade aos 
antimicrobianos 
 Produção de vacinas autógenas 
 Diagnóstico definitivo 
 
Teste de susceptibilidade aos antimicrobianos: 
Métodos: 
 Disco-difusão; 
 CIM e CBM; 
 E-test. 
 
Resistência intrínseca X Resistência adquirida: 
Intrínseca – nunca entrou em contato com o 
antimicrobiano mas possui resistência já em seus genes. Já 
sabemos que algumas bactérias são resistentes a tais ATB 
normalmente. 
Adquirida – através de contatos com ATB. 
 
Disco-difusão: 
Teste qualitativo – é resistente ou não. 
Ágar Mueller hinton e Mueller hinton sangue. 
Utiliza doses terapêuticas. Manter 37°C por 24h. 
 
 
CIM 
 
 
CBM 
 
Diluições seriadas para ver até qual concentração é capaz 
de inibir/matar. 
Note que na primeira linha inibiu mas não matou. 
 
E-TEST: 
Fitas com ATB com diferentes concentrações. Cabe até 6 
fitas em uma placa. Mais caro, menos medicamentos do 
que no disco-difusão. 
 
 
 
TESTES MOLECULARES 
1) PCR para genes específicos 
2) PCR para gene 16S e sequenciamento 
 
PCR: 
 Amostra 
 Extração 
 Amplificação 
 Visualização em gel. 
 
Amostras: 
Fezes, Tecidos/órgãos, Sangue, Secreções, Leite, Líquor, 
Urina, Isolado. 
Mais comum utilização do isolado, porém não pode ser 
utilizado se vier em amostra no ágar. 
 
Termo extração ou fervura: 
Rompe membrana; centrifugação. 
 
 
 
Purificação: reagentes com sais diferentes. 
 
MIX: enzima constrói novas fitas de DNA. 
Água ultrapura; 
Tampão; 
Cloreto de magnésio; 
dNTPs – nucleotídeos. 
Primers; 
Enzima TaqDNA polimerase: 
Amostra de DNA/RNA. 
 
Amplificação: 
Desnaturação: 94 a 97°C; 
Anelamento: 45 a 60°C; 
Extensão: 72°C. 
 
Termociclador: 2-3h + 1h para correr o gel. 
 
Desnaturação: 20 a 40 vezes. Quebra a fita dupla do DNA. 
Faz várias copias do genoma. 
 
 
Anelamento: