Resumo - Cromatografia de Interação Hidrofóbica

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Resumo - Cromatografia de Interação Hidrofóbica 
 Moléculas proteicas em solução salina são adsorvidas por um ligante hidrofóbico 
 imobilizado em um suporte. Proteínas, mesmo solúveis em água, possuem em sua 
 estrutura grupos hidrofóbicos que conferem à molécula certa hidrofobicidade, que pode ser 
 aumentada com adição de sais. 
 ● Princípio da técnica 
 Baseia-se na interação hidrofóbica ou na associação entre moléculas e ligantes hidrofóbicos 
 imobilizados em um suporte sólido. Os ligantes são grupos hidrofóbicos de cadeia curta fixados 
 na matriz. A interação hidrofóbica ocorre em elevadas concentrações salinas, pois a molécula 
 de proteína tem a solubilidade reduzida. 
 ● Condições de operação 
 Processo ideal a ser aplicado após precipitação salina, a elevada força iônica do meio resultante 
 das altas concentrações salinas favorece as interações hidrofóbicas. A operação é semelhante a 
 cromatografia de troca iônica: 01) A coluna é equilibrada → 02) A molécula-alvo é adsorvida à 
 matriz → 03) a molécula-alvo ou o produto é eluído → 04) A coluna é regenerada pela remoção 
 de proteínas remanescentes → 05) A coluna é reequilibrada para ser reutilizada em um novo 
 ciclo de operação. 
 A eluição pode ser realizada por meio da alteração da força iônica, pelo aumento do pH e pela 
 adição de um componente que tenha maior atração pelo ligante ou torna a proteína mais 
 hidrofóbica. 
 ● Fatores que afetam a CIH 
 01) Tipo do ligante: A capacidade do adsorvente se ligar a uma proteína aumenta com o 
 aumento do comprimento da cadeia de hidrocarboneto, e quanto maior o grau de 
 hidrofobicidade, menor será a concentração salina. 
 02) Grau de substituição: A capacidade do adsorvente se ligar a uma proteína aumenta com o 
 grau de substituição. 
 03) Tipo de matriz: A seletividade de um suporte polimérico não será exatamente a mesma 
 quando comparada com um suporte baseado na agarose contendo o mesmo tipo de ligante. 
 04) Tipo e concentração de sal: Quando a concentração dos sais aumenta, a quantidade de 
 proteínas ligadas ao suporte também aumenta, linearmente no início para uma concentração 
 específica de sal e exponencialmente à medida que a concentração é elevada. 
 05) Efeito do pH e temperatura: o aumento do pH debilita as interações hidrofóbicas e o inverso 
 também é verdadeiro, o aumento da temperatura melhora a retenção da proteína e a redução 
 facilita a eluição. 
 06) Aditivos: Podem ser utilizados para melhorar a solubilidade e modificar a conformação da 
 proteína e sua eluição.