Resumo - Cromatografia em Fase Reversa

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Resumo - Cromatografia em Fase Reversa 
 Cromatografia em fase normal : As colunas de sílica apresentam mecanismo de separação 
 baseado em adsorção por meio da fase estacionária polar, fase móvel apolar ou de baixa 
 polaridade. As partículas de sílica possuem grupos silanol (e outros) na superfície e 
 aproximadamente a metade está disponível para interação com solutos. O grupo silanol livre é 
 mais ativo . Método pouco utilizado por conta do problema de reprodutibilidade do tempo de 
 retenção, a água degrada a sílica que ocasiona problema no recheio. 
 Cromatografia em fase reversa : As fases estacionárias de sílica são chamadas de fases 
 ligadas. Apresenta fase estacionária apolar ou baixa polaridade e fase móvel polar. A fase móvel 
 mais utilizada é a base de sílica. O grupo silanol exposto tem o H ou o grupo OH substituído por 
 uma cadeia orgânica. A cadeia orgânica é uma cadeia de hidrocarbonetos com 2 a 30 carbonos. 
 Possui capacidade de reter compostos apolares: C 30 >C 18 >C 8 >C 2 → Mais utilizado para C 18 e C 2 . 
 Possui alta gama de solventes e baixa toxicidades, 70 dos 80 analitos podem ser separados 
 utilizando fase reversa, processo que possui alto alcance de separação. 
 ● Principais fase quimicamente ligadas 
 ○ Fases apolares (Principais grupos) 
 ■ Grupos alquílicos: com cadeias de 2 a 3 átomos de carbono 
 C 4 (Butila): Tempo de retenção menor que das fases C 8 e C 18 . Utilizada para separação 
 de peptídeos e proteínas. 
 C 8 (Octila): Recomendada para solutos ligeiramente ou altamente polares como 
 peptídeos pequenos, esteróides, nucleosídeos e fármacos polares. 
 C 18 (Octadecil, ODS): Para solutos polares ou moderadamente polares, tais como 
 triacilgliceróis, esteróides, aminoácidos, proteínas, pigmentos, micotoxinas, aminas e vitaminas. 
 Os principais grupos apolares se dividem em alquílicos e fenílicos. Os Grupos Alquílicos 
 possuem cadeias de 2 a 30 átomos de carbono e os Grupos Fenílicos são grupos fenilicado à 
 sílica (recomendados para grupos moderadamente polares (aplicações semelhante a C 18 ). 
 ○ Fases polares (Os grupos ligados à sílica são polares) 
 São eles: Amino (NH 2 ), Ciano (CN) e Diol. Quando se utiliza sílica derivada com grupos polares, 
 a fase estacionária pode ser utilizada tanto para cromatografia em fase normal ou em fase 
 reversa. 
 ● Resumo e diferença entre os processos 
 A polaridade da fase estacionária na Fase Normal (F.N.) é alta e para a Fase Reversa (F.R.) é 
 baixa. A polaridade da fase móvel para a Fase Normal (F.N.) é de baixa para média e para a 
 Fase Reversa (F.R.) é de média para alta. A fase móvel típica para a Fase Normal (F.N.) é 
 heptano/triclorometano e para a Fase Reversa (F.R.) é metanol/água. A ordem de diluição para 
 a Fase Normal (F.N.) em primeiro sai os solutos menos polares e para a Fase Reserva (F.R.) em 
 primeiro sai os solutos mais polares. Para redução do tempo de retenção do soluto, para a Fase 
 Normal (F.N.) deve-se aumentar a polaridade da fase móvel e para a Fase Reversa (F.R.) 
 deve-se diminuir a polaridade da fase móvel. 
 ● Vantagens da fase reversa 
 Uso de fases móveis menos tóxicas e de menor custo (metanol e água), rápido equilíbrio da 
 coluna após a mudança da fase móvel, facilidade de empregar eluição por gradiente, maior 
 rapidez em análises e boa reprodutibilidade dos tempos de retenção, aplicada para separação 
 de solutos com diferentes polaridades, massa molares e funcionalidades químicas. 
 O processo pode ser isocrático (eluição com fase móvel únicas (ex. só água)) ou por gradiente 
 (diferentes solventes e diferentes concentrações para eluição( ex. 1° clorofórmio + água; 2° 
 água).