Resumo de Quimioluminescencia

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Quimioluminescência 
 
A Quimioluminescência é a emissão de luz 
(luminescência) uma consequência de uma 
reação química. 
 
Principais técnicas 
 
o Western Blotting 
 Baseia-se na separação das proteínas por 
peso molecular através de uma 
eletroforese, seguindo-se da 
transferência para uma membrana e a 
detecção da proteína de interesse com 
um anticorpo específico. 
 É possível avaliar a abundância relativa 
pela intensidade da banda -> Reconhece 
a proteína através do anticorpo. 
 No Western blot, geralmente a enzima 
ligada ao anticorpo secundário é a HRP 
(horseradish peroxidase) e o substrato 
pode ser o luminol. 
 Maior a concentração de proteinas, 
maior a marca da banda. 
 
 Etapas: 
 
1) Extração e quantificação das 
proteínas 
2) Eletroforese em gel de poliacrilamida 
3) Transferência das proteínas para uma 
membrana 
4) Incubação da membrana com um 
anticorpo para detectar a proteína 
especifica a ser analisada 
5) Revelação dessa membrana para 
análise dos dados 
 
o Bioquímica da luciferase 
 As luciferases são enzimas que catalisam 
a oxidação da luciferina por oxigênio, 
ativada por MgATP. 
 Aplicação: Sequenciamento de DNA, gene 
repórter para avaliar atividade de 
promotores de transição etc. 
 
o Anticorpo secundário 
 Os anticorpos secundários são anticorpos 
policlonais ou monoclonais que se ligam 
aos anticorpos primários ou fragmentos 
de anticorpos, como as regiões Fc ou Fab. 
Eles são tipicamente marcados com 
sondas que os tornam úteis para 
aplicações de detecção, purificação ou 
separação. 
 A peroxidase ou fosfatase alcalina esta 
ligada ao anticorpo secundário. 
 Os anticorpos secundários poderão emitir 
luz. 
 
 
Quimioluminescência / Bioluminescência