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PREPARAÇÃO DE FASE ESTACIONÁRIA QUIRAL PREPARAÇÃO DE FASE ESTACIONÁRIA QUIRAL PREPARAÇÃO DE FASE ESTACIONÁRIA QUIRAL PREPARAÇÃO DE FASE ESTACIONÁRIA QUIRAL 
BASEADA EM POLISSACARÍDEOS E SEPARAÇÃO DE BASEADA EM POLISSACARÍDEOS E SEPARAÇÃO DE BASEADA EM POLISSACARÍDEOS E SEPARAÇÃO DE BASEADA EM POLISSACARÍDEOS E SEPARAÇÃO DE 
ENANTIÔMEROS DO MITOTANOENANTIÔMEROS DO MITOTANOENANTIÔMEROS DO MITOTANOENANTIÔMEROS DO MITOTANO
Yamamoto T. M.; Santana C. C.
Departamento de Processos Biotecnológicos (DPB)Departamento de Processos Biotecnológicos (DPB)
CNPq/PIBIC/UNICAMP
Palavras-chave: Cromatografia – Quiral - MitotanoPalavras-chave: Cromatografia – Quiral - Mitotano
Introdução Cromatograma 1 Cromatograma 2Introdução
O mitotano é um agente quimioterápico no tratamento do tumor de 7.00E-02
Cromatograma 1
5.00E-02
Cromatograma 2
O mitotano é um agente quimioterápico no tratamento do tumor de
córtex adrenal (TCA). Uma das formas enantioméricas desse composto
possui maior capacidade de absorção por organismos vivos, de modo 4.00E-02
5.00E-02
6.00E-02
7.00E-02
3.00E-02
4.00E-02
5.00E-02
possui maior capacidade de absorção por organismos vivos, de modo
que se apresenta a importância do desenvolvimento de um processo de
separação da mistura racêmica para um posterior estudo de controle de 1.00E-02
2.00E-02
3.00E-02
4.00E-02
A
1.00E-02
2.00E-02A
separação da mistura racêmica para um posterior estudo de controle de
efeitos tóxicos.
-1.00E-02
0.00E+00
1.00E-02
0 1 2 3 4 5 6 7
tempo (min)
-1.00E-02
0.00E+00
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
tempo (min)
Metodologia
tempo (min) tempo (min)
Cromatograma 3 Cromatograma 4
Síntese do carbamato de amilose
4.50E-02
Cromatograma 3
6.00E-02
Cromatograma 4
2.50E-02
3.00E-02
3.50E-02
4.00E-02
4.50E-02
3.00E-02
4.00E-02
5.00E-02
Preparação da fase
estacionária
Empacotamento da coluna quiral
0.00E+00
5.00E-03
1.00E-02
1.50E-02
2.00E-02
2.50E-02
A
0.00E+00
1.00E-02
2.00E-02
3.00E-02
A
Acoplamento do carbamato 
-5.00E-03
0.00E+00
5.00E-03
0 2 4 6 8 10 12 14
tempo (min)
-1.00E-02
0.00E+00
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24
tempo (min)
Valores de tempo de retenção do soluto (t ), tempo de retenção do
Acoplamento do carbamato 
de amilose ao suporte de sílica
tempo (min)
α
Valores de tempo de retenção do soluto (tr,i), tempo de retenção do
composto inerte TTBB (tM), fator de retenção (ki) e separação (α):Cromatografia Líquida de Alta Eficiência:
Cromatograma tr,i (min) tM (min) ki αααα N
Preparação da 
Mistura de
solventes
Diluição do 
mitotano
2 7,318 2,88 1,541 1,143 3407,17
2 8,02 2,88 1,761 1,143 3469,278
Preparação da 
fase móvel
Diluição do 
composto Desgaseificação 2 8,02 2,88 1,761 1,143 3469,278
3 8,596 2,905 1,95 1,161 2593,197
composto
inerte (TTBB)
Desgaseificação 
da solução
3 9,486 2,905 2,265 1,161 2542,334
4 17,017 5,801 1,929 1,148 3632,428
Injeção da amostra
de mitotano 4 17,017 5,801 1,929 1,148 3632,428
4 18,642 5,801 2,214 1,148 3229,351
de mitotano
Injeção do 
Obtenção de parâmetros
cromatográficos
Obtenção do 
cromatograma
• Os tempos de retenção dos enantiômeros aumentaram com o
aumento da porcentagem de hexano da fase móvel e também com a
Injeção do 
composto inerte
Análise dos
aumento da porcentagem de hexano da fase móvel e também com a
redução da vazão, devido a um maior tempo de interação das moléculas
com a fase estacionária;
Análise dos
resultados
• Diluição do mitotano e TTBB: em etanol ou hexano (1 g/L).
com a fase estacionária;
• A separação é mais pronunciada quando se utiliza uma coluna de 25
cm de comprimento, já que ocorre um aumento de número de pratos e,
• Diluição do mitotano e TTBB: em etanol ou hexano (1 g/L).
• Desgaseificação da solução: em banho ultra-sônico (5 min).
• Cromatografia: cm de comprimento, já que ocorre um aumento de número de pratos e,
portanto, uma maior interatividade da fase estacionária e os compostos
da mistura racêmica;
• Cromatografia:
- Temperatura: 25 °C;
- Volume de injeção: 20 µL; da mistura racêmica;
• Embora não se tenha logrado uma separação por linha de base,
obteve-se um fator de separação da ordem de 1,15 quando foi utilizado
- Volume de injeção: 20 µL;
- Vazão da fase móvel: 0,5 mL/min ou 1,0 mL/min;
- Comprimento de onda de detecção do soluto: 270 nm;
- Tipo de eluição: isocrática. obteve-se um fator de separação da ordem de 1,15 quando foi utilizado
a fase móvel de hexano/isopropanol na proporção (99:1 v/v) e vazão de
0,5 e 1,0 mL/min. Esse fator é considerado razoável para separaçãott − k
- Tipo de eluição: isocrática.
• Parâmetros Cromatográficos:
0,5 e 1,0 mL/min. Esse fator é considerado razoável para separação
quiral e poderia ser otimizado alterando-se, por exemplo, a temperatura
na qual ocorre a separação.M
MiR
i
t
tt
k
−
=
,
1
2
k
k
=α
na qual ocorre a separação.Mt 1k
Resultados e Discussão
Conclusões
Resultados e Discussão
Principais cromatogramas obtidos:
• Foi possível realizar uma separação cromatográfica do mitotano com a
fase estacionária quiral 3,5-dimetilfenil carbamato de amilose e uma
Principais cromatogramas obtidos:
•Cromatograma 1: coluna de 15 cm, fase móvel hexano/isopropanol (95:5) 
e vazão 1,0 mL/min. fase estacionária quiral 3,5-dimetilfenil carbamato de amilose e uma
fase móvel de hexano/isopropanol;
• Não se obteve nenhuma separação por linha de base;
e vazão 1,0 mL/min.
•Cromatograma 2: coluna de 25 cm, fase móvel hexano/isopropanol (98:2) 
e vazão 1,0 mL/min.
•Cromatograma 3: coluna de 25 cm, fase móvel hexano/isopropanol (99:1) • Não se obteve nenhuma separação por linha de base;
• Ocorreu um favorecimento da separação dos enantiômeros utilizando-
se uma coluna de 25 cm de comprimento;
•Cromatograma 3: coluna de 25 cm, fase móvel hexano/isopropanol (99:1) 
e vazão 1,0 mL/min.
•Cromatograma 4: coluna de 25 cm, fase móvel hexano/isopropanol (99:1) 
se uma coluna de 25 cm de comprimento;
•Cromatograma 4: coluna de 25 cm, fase móvel hexano/isopropanol (99:1) 
e vazão 0,5 mL/min.